选择适于WT1疫苗患者的方法技术

提供了一种选择对ＷＴ１疫苗高应答患者的方法和包括所述选择方法的用于治疗癌症的治疗方法，该选择对ＷＴ１疫苗高应答患者的方法包括：（ａ）从测试受试者中分离含有ＣＴＬ前体细胞的生物学样品；（ｂ）测定（ａ）中生物学样品的ＷＴ１－特异性ＣＴＬ前体细胞的存在频度或数量；和（ｃ）判断（ｂ）的测定值相对于健康受试者是否高，并评价对ＷＴ１疫苗的应答性。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种选择对WT1疫苗高应答患者的方法以及包括所述选择方法的用于治疗癌症的治疗方法。更具体地，本专利技术涉及一种在作为指标的WT1-特异性CTL前体频度等基础上选择对WT1疫苗高应答患者的方法。
技术介绍
业已鉴定WT1基因(Wilms肿瘤基因1)是Wilms肿瘤即小儿肾肿瘤的致病基因之一(Cell 60509，1990，Nature 343774，1990)。WT1基因编码转录因子WT1，WT1在诸如细胞增殖、分化、凋亡以及组织发育的众多过程中起重要作用(Int.Rev.Cytol.181151，1998)。最初WT1基因被解释是一种肿瘤抑制基因。然而，后续研究揭示WT1基因在白血病和包括肺癌和乳腺癌的多种实体瘤中高表达，因而，表明WT1基因更确切地发挥着促进肿瘤生长的致癌功能。另外，证实用WT1-衍生的肽体外刺激对HLA-A*0201或HLA*-A0202阳性的外周血单核细胞诱导了肽-特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)，并且CTLs杀死了内源性表达WT1的白血病和实体瘤细胞。这些结果证实WT1是癌症免疫治疗有希望的靶分子(Int.J.Hematol 76127，2002)。已知体外测定抗原肽-特异性CTLs的方法，包括HLA单体方法、HLA二聚体方法和HLA四聚体方法(Science 27494，1996)、HLA五聚体方法和ELISPOT方法(J.Immunol.Methods 11029，1988)、实时RT-PCR技术(J.Immunol.Methods 210195，1997)、有限稀释方法(Br.J.Cancer 771907，1998)等等。通过生物素酰化复合物(HLA单体)制备HLA-四聚体，该复合物通过连接肽与HLAα-链和β2-微球蛋白形成，并使其单体与荧光标记的抗生物素蛋白结合以用于四聚化。CTLs频度可通过用HLA四聚体染色肽-特异性CTLs并用流式细胞仪分析而得到测定。通过HLA单体方法、HLA二聚体方法和HLA五聚体方法对CTL频度的测定都可根据相同的原理进行。未被疫苗刺激的CTLs称为“CTL前体细胞”。认为对给定癌抗原特异的CTL前体细胞存在的频度越高，则诱导特异性CTLs的效率也越高，当所述抗原作为癌疫苗施用时，更易获得癌疫苗治疗的临床应答。换句话说，如果在疫苗接种前选择出表现高频度存在对所选择的给定癌抗原特异的CTLs前体细胞的患者，则使用所述癌抗原治疗可能更有效。使用HLA四聚体和黑素瘤患者的外周血单核细胞(PBMC)以及在几篇文章中所报道的测定了CTL前体细胞频度，然而，它们显示了对癌抗原肽特异的CTL前体细胞的频度低(J.Immunother.2466，2001、Hum.Gene.Ther.13569，2002)。从这些结果可以看出对抗原特异的CTL前体细胞的存在频度通常很低，因此以CTL前体细胞频度作为指标，难以选择适于癌症疫苗的患者。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种在作为指标的WT1-特异性CTL前体细胞频度等基础上选择对WT1疫苗高应答患者的方法。本专利技术人使用来自WT1的癌抗原肽制备了HLA四聚体，并在造血恶性肿瘤或肺癌患者中，在疫苗施用前CTL前体细胞频度的测定中使用所产生的四聚体。令人吃惊的是，较迄今为止已知的健康个体，发现CTL前体细胞(WT1-特异性CTL前体细胞)以高频度存在。该结果揭示了，只要与癌抗原相关，以WT1-特异性CTL前体细胞频度为指标即有可能选择对WT1疫苗高应答患者或鉴定WT1疫苗靶分子。同样地，既然患多种癌症的患者显示了高频度的WT1-特异性CTL前体细胞，那么很清楚癌症的诊断可基于作为指标的WT1特异性CTL前体细胞频度。本专利技术人接着根据相关的功能对WT1-特异性CTL前体细胞进一步分类，并发现，特别是效应物型CTL前体细胞(此后，可简称为“效应细胞”)在CTL前体细胞中以高比例存在。该结果表明对WT1疫苗高应答患者的选择或癌症的诊断也可在作为指标的效应物型WT1特异性CTL前体细胞的频度基础上进行。另外，本专利技术人测定了经历来自WT1癌抗原肽(“WT1肽”)治疗的患者中WT1-特异性CTLs的频度，并发现相对于给药之前所获得的结果，治疗效果与给药后CTL频度的增加相关，。在上述发现的基础上完成了本专利技术。因而，本专利技术提供了下列各项 (1)一种选择对WT1疫苗高应答的患者的方法，包括下列(a)、(b)和(c)步骤(a)从测试受试者中分离含有CTL前体细胞的生物学样品；(b)测定(a)中生物学样品的WT1-特异性CTL前体细胞的存在频度或数量；和(c)判断(b)的测定值相对于健康受试者是否高，并评价对WT1疫苗的应答性。(2)如上述(1)的选择方法，其中通过HLA单体方法、HLA二聚体方法、HLA四聚体方法、HLA五聚体方法、ELISPOT方法、实时RT-PCR技术和有限稀释方法的任一种进行WT1-特异性CTL前体细胞的存在频度或数量的测定。(3)如上述(2)的选择方法，其中通过HLA四聚体方法进行测定。(4)如上述(3)的选择方法，其包括下列(a)、(b)、(c)和(d)步骤(a)从测试受试者中分离含有CTL前体细胞的生物学样品；(b)将(a)中生物学样品与含有WT1-衍生的癌抗原肽的HLA四聚体接触；(c)测定与HLA四聚体结合的WT1-特异性CTL前体细胞的存在频度或数量；和(d)判断(c)的测定值相对于健康受试者是否高，并评价对WT1疫苗的应答性。(5)如上述(4)的选择方法，其中通过测定在CD8-阳性或CD8/CD3-阳性CTL前体细胞中HLA四聚体结合细胞的比例进行(4)中步骤(c)。(6)如上述(4)或(5)的选择方法，其中作为HLA四聚体组分的HLA抗原是HLA-A24抗原或HLA-A2抗原。(7)如上述(4)-(6)中任一项的选择方法，其中WT1-衍生的癌抗原肽选自下列肽 Cys Met Thr Trp Asn Gln Met Asn Leu(SEQ ID NO2)，Cys Tyr Thr Trp Asn Gln Met Asn Leu(SEQ ID NO3)，Arg Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu(SEQ ID NO4)和Arg Tyr Pro Ser Cys Gln Lys Lys Phe(SEQ ID NO5)。(8)如上述(1)-(7)中任一项的选择方法，其使用流式细胞仪进行。(9)如上述(1)-(8)中任一项的选择方法，其中使用与健康受试者相比为1.5倍或更高的WT1-特异性CTL前体细胞的存在频度或数量作为指标评价对WT1疫苗的应答性。(10)如上述(1)的选择方法，其中CTL前体细胞是效应物型CTL前体细胞。(11)如上述(10)的选择方法，其使用HLA单体方法、HLA二聚体方法、HLA四聚体方法、HLA五聚体方法、ELISPOT方法、实时RT-PCR技术和有限稀释方法的任一种测定效应物型的WT1-特异性CTL前体细胞的存在频度或数量。(12)如上述(11)的选择方法，其使用HLA四聚体方法。(13)如上述(12)的选择方法，其包括下列(a)、(b)、(c)和(d)步骤(a)从测试受试者中分离含有CTL前体细胞的生物学样品；(b)将(a本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种选择对ＷＴ１疫苗高应答的患者的方法，包括下列（ａ）、（ｂ）和（ｃ）步骤：　　　　（ａ）从测试受试者中分离含有ＣＴＬ前体细胞的生物学样品；　　　　（ｂ）测定（ａ）中生物学样品的ＷＴ１－特异性ＣＴＬ前体细胞的存在频度或数量；和　　　　（ｃ）判断（ｂ）的测定值相对于健康受试者是否高，并评价对ＷＴ１疫苗的应答性。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：杉山治夫，
申请(专利权)人：杉山治夫，
类型：发明
国别省市：JP[日本]