山楂精降脂分散片中熊果酸的测定方法技术

本发明专利技术涉及一种山楂精降脂分散片中熊果酸的测定方法，该方法以高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）测定山楂精降脂分散片及其他剂型中熊果酸的含量并制订相应的含量限度标准。本发明专利技术山楂精降脂分散片及其他剂型中熊果酸的测定方法其操作简便，结果准确，灵敏度高，重现性好，回收率好，干扰小，熊果酸对照品在０．２５３～５．０５２μｇ范围内，进样量与峰面积Ａ呈良好线性关系，可以作为控制山楂精降脂分散片内在质量的有效方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物制药
，具体说是一种。
技术介绍
山楂精降脂分散片及其系列制剂是以山楂药材为原料，经70％乙醇回流提取、盐酸水解，将苷类进一步水解成苷元而沉淀，从而提取其中的主要成分三萜类及黄酮类化合物，制成山楂精，再加入适宜的辅料制成的纯中药制剂，包括山楂精降脂片(糖衣片、薄膜衣片、素片)、分散片、泡腾片、口腔崩解片、缓释片、咀嚼片、含片、硬胶囊、颗粒剂等剂型，其主要有效成分为熊果酸、齐墩果酸等三萜酸类及黄酮类化合物。《中华人民共和国卫生部药品标准》第九册收载的山楂精降脂片质量标准以槲皮素作对照，采用比色法测定总黄酮含量作为该品种的含量测定方法，由于该方法专属性及准确性均较差，因此不能很好地控制该制剂的内在质量。而由于熊果酸与齐墩果酸结构相似，极性相差很小，分离难度较大，给HPLC法测定熊果酸含量带来了困难；加之分子结构无共轭双键系统，在紫外区没有吸收峰，只能靠紫外末端吸收来进行测定，易受杂质的干扰，从而进一步增加了测定难度。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服上述现有技术的不足，提供一种能够有效提高测量准确性的山楂精降脂分散片中熊果酸的测量方法，该方法保证了山楂精降脂分散片及其相关制剂熊果酸含量测定方法的科学性、先进性及测定结果的准确性，能够有效控制山楂精降脂分散片及其系列制剂的质量。本专利技术的技术方案为一种，其特征在于采用高效液相色谱法进行测定，具体测定过程为(1)色谱条件色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相甲醇-0.15％磷酸溶液(85∶15)～(91∶9)或甲醇-水-乙酸胺(86∶14∶0.4)～(90∶10∶0.4)，检测波长215nm；(2)对照品溶液的制备精密称取熊果酸对照品适量，加乙醇配制成每ml含0.1～0.3mg的溶液；(3)供试品溶液的制备取样品，精密称定，研细(过三号筛)，取0.05g～0.5g(相当于含山楂精15mg～150mg)，精密称定，置索氏提取器中，加入乙醚适量，加热回流提取8小时，提取液回收乙醚至干，残渣用30～60℃石油醚浸泡两次，倾去石油醚，残渣用甲醇溶解，转移至25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液；(4)熊果酸的含量测定方法分别吸取供试品溶液及对照品溶液各10μl，注入色谱仪测定熊果酸的的含量；(5)每片含山楂以熊果酸(C30H48O3)计，不得少于2.0mg；所述的色谱柱为Kromasil C18；所述的流动相为甲醇-0.15％磷酸溶液(88∶12)；所述的流动相为甲醇-水-乙酸胺(88∶12∶0.4)；所述的对照品溶液浓度为每ml含0.2mg；所述的供试品的取样量为0.2g(即1片，相当于含山楂精60mg)；上述测定方法还可用于山楂精降脂片、山楂精降脂泡腾片、山楂精降脂口腔崩解片、山楂精降脂缓释片、山楂精降脂咀嚼片、山楂精降脂含片、山楂精降脂胶囊或山楂精降脂颗粒中熊果酸的测定。本专利技术采用高效液相色谱法来测定山楂精降脂分散片及其他剂型中含量较高成分——熊果酸，该方法的建立是基于以下几点1.熊果酸无共轭双键系统，紫外无吸收，利用紫外检测器测定，主要利用的是它的末端吸收，即在紫外末端时，任何一个成分均可产生一末端吸收。越靠近紫外末端，液相基线越不稳定，杂质干扰越严重。这样就要求，对供试品溶液的处理要非常好，即不能造成待测成分流失(或提取不充分)，又要尽可能地减少杂质。本专利技术选择215nm作为测定波长，相对比较合理，因为215nm与210nm相比相对远离紫外末端，基线稳定，测定操作简便易行，结果准确可靠。2.流动相的选择在215nm波长测定熊果酸含量，流动相的选择至关重要，当采用乙腈为有机相时，信噪比较大，但分离度明显降低，而采用甲醇作为有机相时，分离度虽然有所提高，但依然难以将熊果酸峰(保留时间18.1min)与前面的杂峰(经以齐墩果酸对照品证实，为齐墩果酸峰)分离。为改善分离度，本专利技术采用甲醇-0.15％磷酸溶液(88∶12)作为流动相，其基线平稳，基线噪音小，保留时间延长，分离度可以达到2.133，平衡时间明显缩短。而且，流动相宜现配现用，试验中发现，配制经长时间放置后使用，会导致熊果酸峰保留时间延长。3.供试品的处理本专利技术以乙醚为溶媒采用索氏提取8小时，其供试品溶液杂质较少，基线较好，操作较简便，且熊果酸提取充分，在乙醚液蒸干后，残渣用石油醚洗两次，可以进一步除去极性小的杂质，既不影响熊果酸的含量，又可使熊果酸峰右侧的干扰杂峰消失，从而使测定条件符合要求，测定结果准确可靠。4.供试品的取样量由于本测定方法中，将熊果酸峰与齐墩果酸峰分离至关重要，而供试品的取样量对熊果酸提取是否完全及熊果酸峰与齐墩果酸峰的分离度有直接的影响。如果供试品取样量过大，则容易提取熊果酸提取不充分(完全)，且由于峰面积加大，熊果酸峰与齐墩果酸峰峰面积大而相互重叠，影响测定结果的准确性。取样量过小，则峰面积太小，导致测定误差加大。因此，经过试验研究，确定供试品的取样量范围应为相当于含山楂精15mg～150mg，最佳取样量约为1个制剂单位(即1片、1粒或1袋，相当于含山楂精60mg)。本专利技术以高效液相色谱法(HPLC)测定山楂精降脂分散片及其他剂型中熊果酸的含量并制订了相应的含量限度标准。该方法操作简便，结果准确，灵敏度高，重现性好，回收率好，干扰小，熊果酸对照品在0.253～5.052μg范围内，进样量与峰面积A呈良好线性关系，可以作为控制山楂精降脂系列制剂内在质量的有效方法。本专利技术适用于以山楂为原料制成的片剂(糖衣片、薄膜衣片、素片)、分散片、泡腾片、口腔崩解片、缓释片、咀嚼片、含片、硬胶囊、颗粒剂等剂型。具体实施例方式1、对照品溶液的制备熊果酸Ursolic acid(供含量测定用)由中国药品生物制品检定所提供。取减压干燥至恒重的熊果酸对照品10mg，置50ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml中含熊果酸0.2mg)。2、供试品溶液的制备取不同批次的山楂精降脂分散片10批，精密称定，研细(过三号筛)，取约0.2g(即1片、相当于含山楂精60mg)，精密称定，置索氏提取器中，加入乙醚适量，加热回流提取8小时，提取液回收乙醚至干，残渣用石油醚(30～60℃)浸泡两次，每次10ml，浸泡约2分钟，倾去石油醚，残渣用甲醇溶解，转移至25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取滤液，作为供试品溶液。3、色谱条件色谱柱Kromasil C18，5μm，4.6mm×200mm，大连依利特分析仪器有限公司；流动相甲醇-0.15％磷酸溶液(88∶12)，流速1.0ml/min；柱温室温；检测波长215nm；灵敏度0.01AUFS。4.精密量取供试品溶液及浓度为0.2mg/ml的对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，记录色谱峰面积，按外标一点法计算出供试品中熊果酸的百分含量。结果见表1。表1 十批山楂精降脂分散片中熊果酸的含量 10批山楂精降脂分散片中熊果酸的平均含量为2.5900mg/片(RSD为19.17％)，将此值下浮20％后的值为2.0720mg/片，而十批样品中含量最低为2.1420mg/片，据此规定山楂精降脂分散片中熊果酸的含量限度标准为“本品每片含山楂以熊果酸(C30H48O3)计，不得少于2本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种山楂精降脂分散片中熊果酸的测定方法，其特征在于采用高效液相色谱法进行测定，具体测定过程为：（１）色谱条件：色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：甲醇－０．１５％磷酸溶液（８５∶１５）～（９１∶９）或甲醇－水－乙酸胺（８ ６∶１４∶０．４）～（９０∶１０∶０．４），检测波长：２１５ｎｍ；（２）对照品溶液的制备：精密称取熊果酸对照品适量，加乙醇配制成每ｍｌ含０．１～０．３ｍｇ的溶液；（３）供试品溶液的制备：取样品，精密称定，研细，取０．０５ｇ～ ０．５ｇ，精密称定，置索氏提取器中，加入乙醚适量，加热回流提取８小时，提取液回收乙醚至干，残渣用３０～６０℃石油醚浸泡两次，倾去石油醚，残渣用甲醇溶解，转移至２５ｍｌ量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液；（４）熊 果酸的含量测定方法：分别吸取供试品溶液及对照品溶液各１０μｌ，注入色谱仪测定熊果酸的的含量；（５）每片含山楂以熊果酸（Ｃ↓［３０］Ｈ↓［４８］Ｏ↓［３］）计，不得少于２．０ｍｇ。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：丁建宝，格日勒，亓伟，
申请(专利权)人：宁夏启元药业有限公司，
类型：发明
国别省市：64[中国|宁夏]