使用CRISPR-Cas9系统对间充质干细胞进行CKIP-1基因敲除的方法技术方案

本发明专利技术提供了一种采用CRISPR‑Cas9系统对间充质干细胞进行CKIP‑1基因编辑，特别是涉及一种构建CKIP‑1基因敲除的人骨髓间充质干细胞细胞系的建立，用于骨组织生理功能以及创伤修复再生后续研究。其中构建并获得了一个特异的gRNA，能够显著提高间充质干细胞内CRISPR‑Cas9针对CKIP‑1的基因编辑效率。本发明专利技术构建的CKIP‑1基因敲除是在基因组水平上形成移码突变，故可以随着细胞分裂、增殖传递到下一代，形成稳定的CKIP‑1基因敲除细胞系。

【技术实现步骤摘要】
使用CRISPR-Cas9系统对间充质干细胞进行CKIP-1基因敲除的方法
本专利技术涉及基因工程
，具体的涉及一种利用CRISPR-Cas9技术敲除间充质干细胞CKIP-1基因的方法。
技术介绍
间充质干细胞(mesenchymalstemcell,MSC)，又称间充质基质细胞(mesenchymalstromalcells)，源于发育早期的中胚层和外胚层，几乎存在于所有生物组织类型中，如骨髓、脂肪组织和牙髓等。MSC是具有自我更新能力和分化为多种细胞类型的多能干细胞，包括成骨细胞、脂肪细胞、肌细胞、肝细胞、类固醇生成细胞、骨骼肌细胞、平滑肌细胞、运动神经元和内皮细胞等。同时能分泌产生大量细胞因子和生长因子等生物活性因子，以旁分泌方式作用于微环境，发挥促血管生成、抗纤维化、抗凋亡和免疫调节功能。此外，MSC备显著归巢能力，可迁移至损伤部位进行免疫调节、位点特异性分化和支持造血等。更为重要的是，不论是自体还是同种异源的MSC，一般都不会引起宿主的免疫反应。这些特性使MSC成为细胞治疗的优秀候选细胞，广泛用于实验、临床研究和基因工程本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种CRISPR-Cas9靶向敲除CKIP-1基因及其特异性的sgRNA，其特征在于，首先设计获得特异性靶向CKIP-1基因第6外显子的sgRNA；其次构建CKIP-1基因的sgRNA到表达载体系统，然后将此载体系统转染间充质干细胞，得到CKIP-1基因敲除细胞株。/n

【技术特征摘要】
1.一种CRISPR-Cas9靶向敲除CKIP-1基因及其特异性的sgRNA，其特征在于，首先设计获得特异性靶向CKIP-1基因第6外显子的sgRNA；其次构建CKIP-1基因的sgRNA到表达载体系统，然后将此载体系统转染间充质干细胞，得到CKIP-1基因敲除细胞株。


2.根据权利要求1所述的特异性靶向CKIP-1基因第6外显子的sgRNA，其DNA序列如SEQIDNO：7和SEQIDNO：8所示，所述sgRNA在CKIP-1基因上的靶序列是唯一的。


3.根据权利要求2所述的特异性靶向CKIP-1基因第6外显子的sgRNA，其引物包括针对CKIP-1基因第6外显子上的引物对：
CKIP-1.F：如SEQIDNO：1所...

【专利技术属性】
技术研发人员：王兴，杨旭源，张新慧，
申请(专利权)人：沈阳万类生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：辽宁;21