本发明专利技术涉及一种犬、猫科动物重要疫病病原胶体金银联合检测试纸及其
制备方法，将胶体金标记的鼠源RV、CDV、FPV和CPV等单抗混合包被
在玻璃纤维素膜上，制成结合垫；分别将纯化的犬抗RV、CDV、FPV和
CPV等的IgG包被在硝酸纤维素膜(NC)的检测线R、D、F、P处，将兔
抗鼠IgG包被在硝酸纤维素膜的质控线C处，制成检测膜；当被检样品中
含有相应病毒时，可先与相应金标鼠源单抗结合，然后在层析作用下与相
应检测线上的二抗结合并富集，再经银染液加强染色后形成肉眼可见的色
带，进而根据显色结果进行判定。本发明专利技术不需要借助其它仪器设备，并可
同时对多种犬猫科动物重要疫病抗体进行检测，特别适用于现场检测和流
行病学调查。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种犬、猫科动物重要疫病病原胶体金银联合检测试纸及其制备方法，用于犬、猫科动物狂犬病、犬瘟热、猫瘟热和犬细小病毒病等重要疫病的快速检测、诊断，属于动物疫病检测
技术介绍
犬狂犬病、犬瘟热、猫瘟热和犬细小病毒病等犬、猫科动物重要疫病不仅严重危害我国毛皮经济动物产业，而且严重威胁着虎、狮、狼等多种珍希野生动物的健康，有的还可导致人的发病死亡。要从根本上控制这些疫病，首要的是对上述疫病的发生、流行作出及时、准确的监测。对于犬猫科动物重要疫病，目前国际上常用的病原检测方法有病毒分离、电镜观察、PCR或RT-PCR等方法，但这些方法都需要一定的仪器设备和较高的操作技术，影响了其在流行病学监测方面的应用。胶体金是近年来发展起来的一种检测技术，由Faulk和Taylor(1971)首先用于免疫电镜，现在成了荧光素、放射性同位素和酶标记以外的一大补充。胶体金试纸是利用抗原抗体反应及免疫层析原理，将抗原或抗体以胶体金标记，当待检样品中含有与抗原或抗体特异结合的抗体或抗原时，就会发生聚集而产生肉眼可见的色带，具有简便、快速，结果直观、准确等优点。
技术实现思路
本专利技术提供了一种犬、猫科动物重要疫病病原胶体金银联合检测试纸，能够简便、快速、准确地对犬、猫科动物体内含有的狂犬病病毒(RV)、犬瘟热病毒(CDV)、猫瘟热病毒(FPV)和犬细小病毒(CPV)等病原作出检测。本专利技术还公开了上述检测试纸的制备工艺，适合于工业化生产。本专利技术的解决方案是根据抗原抗体能特异结合的免疫学基本原理，利用胶体金免疫层析技术和银染加强技术，将胶体金标记的鼠源RV、CDV、FPV和CPV等单抗混合包被在玻璃纤维素膜上，制成结合垫；分别将纯化的犬抗RV、CDV、FPV和CPV等的IgG包被在硝酸纤维素膜(NC)的检测线R、D、F、P处，将兔抗鼠IgG包被在硝酸纤维素膜的质控线C处，制成检测膜；当被检样品中含有相应病毒时，可先与相应金标鼠源单抗结合，然后在层析作用下与相应检测线上的二抗结合并富集，再经银染液加强染色后形成肉眼可见的色带，进而根据显色结果进行判定。本专利技术的具体制备工艺如下是按附图1所示位置分别将相应试剂与材料喷点或包被于玻璃纤维素膜和硝酸纤维素膜，组成犬、猫科动物重要疫病病原联合检测试纸。将由玻璃纤维素膜制成的样品垫置于加样孔下；样品垫连接由玻璃纤维素膜制成的结合垫，结合垫上包被有胶体金标记的鼠源抗RV、CDV、FPV和CPV等单克隆抗体；结合垫后连接由NC膜制成的检测膜，检测膜上可有根据需要设置多条检测线和1条质控线，其中检测线R、D、F、P等分别为纯化的犬抗RV、CDV、FPV和CPV等IgG包被而成，质控线(C)为兔抗鼠二抗；检测膜后面连接有吸收垫；最后再按金标层析试纸制备要求，进行粘连、压制和裁切，制成该抗体联合检测试纸。本专利技术与现有的技术相比较具有如下优点检测试纸简便、适用、快速、经济、无污染、易操作和判读，不需要借助其它仪器设备，并可同时对多种犬、猫科动物重要疫病病原进行检测，特别适用于现场检测和流行病学调查等。本专利技术的制备方法科学、成本低、稳定性高、重复性好，易于制造、保存和运输。附图说明图1是本专利技术检测试纸的结构示意图图2是本专利技术检测试纸剖面图。1-塑料夹、2-加样孔、3-观察孔、4-样品垫、5-结合垫(由玻璃纤维素膜制成，上包被有金标RV、CDV、FPV和CPV等鼠源单抗)、6-检测膜(由硝酸纤维素膜制成，上喷点有多条检测线和1条质控线，其中R、D、F、P等为检测线，分别包被有纯化犬抗RV、CDV、FPV和CPV等IgG；C为质控线，包被有兔抗鼠二抗)、7-吸收垫、8-衬板。具体实施例方式通过以下实施例进一步举例描述本专利技术，并不以任何方式限制本专利技术，在不背离本专利技术的技术解决方案的前提下，对本专利技术所作的本领域普通技术人员容易实现的任何改动或改变都将落入本专利技术的权利要求范围之内。实施例1根据图1所示，本专利技术检测试纸结构如下衬板8封套在塑料夹1内，塑料夹1的表面开设有加样孔2和观察孔3，衬板8的表面上组装有经过处理的样品垫4、结合垫5、检测膜6和吸收垫7。其中，结合垫5由玻璃纤维素膜制成，上包被有金标RV、CDV、FPV和CPV等鼠源单抗；检测膜6由硝酸纤维素膜制成，上喷点有多条检测线和1条质控线，R、D、F、P等为检测线，分别包被有纯化犬抗RV、CDV、FPV和CPV等IgG；C为质控线，包被有兔抗鼠二抗；检测膜与吸收垫7连接。实施例21)RV、CDV、FPV与CPV等病原单抗和多抗IgG的制备分别用RV、CDV、FPV与CPV等病原接种各自敏感细胞，培养增殖各病毒，经浓缩提纯后分别免疫Balb/c小鼠和家犬，制备各病毒的单抗和多抗血清，并以此进一步制备其单抗与多抗IgG，于-30℃保存备用。2)RV、CDV、FPV与CPV等病原固相免疫吸附载体的制备应用所制备的RV、CDV、FPV与CPV等病原多抗IgG包被磁珠、乳胶颗粒等固相载体，分别制备上述病原的高效免疫吸附载体，并按适当比例混合，制成联合病原固相免疫吸附载体，加入防腐剂，于4℃保存备用。在样品前处理时，取待检样品3-5ml，加入适量固相免疫吸附载体，室温作用20-30分钟，离心或置于磁珠架沉淀磁珠，弃去上清，于所留免疫吸附载体中加50-100ml抗原抗体解离液用于检测。3)金标RV、CDV、FPV与CPV单抗IgG的制备采用胶体金蛋白标记技术，分别用胶体金标记所制备的RV、CDV、FPV与CPV单抗IgG，制得上述病毒的金标IgG，按一定比例混合，制成抗原捕捉剂，加防腐剂，于4℃保存备用。4)兔抗鼠IgG制备以Balb/c小鼠IgG免疫家兔制备兔抗鼠血清，并从中提取IgG，制备兔抗鼠IgG，加防腐剂，于-30℃保存备用。5)结合垫制备将所制金标抗原捕捉剂喷涂于玻璃纤维素膜上，制成反应膜。4℃干燥保存备用。6)检测膜制备将所制备的RV、CDV、FPV与CPV多抗IgG和兔抗鼠IgG，分别喷点于硝酸纤维素膜(NC)的检测线R、D、F、P处和质控线C处，制成检测膜。4℃干燥保存备用。7)检测试纸组装按胶体金层析检测试纸制备要求，如图将上述所制备和选购的材料进行粘连、压制和裁切成检测试纸条，装入塑料夹内制成的检测卡，加干燥剂并分装、封闭于的塑料小袋，4℃干燥保存。8)银加强法相应试剂的配制活化液的配制以去离子水配制0.05mol/L、PH3.8的柠檬酸盐缓冲液。银染液的配制将乙酸银、对苯二酚、阿拉伯树胶溶于去离子水中，使其终浓度分别为0.11％、0.35％-1.7％和7％-10％。定影液的配制20％的硫代硫酸钠水溶液。权利要求1.一种犬、猫科动物重要疫病抗原胶体金银联合检测测试纸，其特征在于衬板8封套在塑料夹1内，塑料夹1的表面开设有加样孔2和观察孔3，衬板8的表面上组装有经过处理的样品垫4、结合垫5、检测膜6和吸收垫7。其中，结合垫5由玻璃纤维素膜制成，上包被有金标RV、CDV、FPV和CPV等鼠源单抗；检测膜6由硝酸纤维素膜制成，上喷点有多条检测线和1条质控线，R、D、F、P等为检测线，分别包被有纯化犬抗RV、CDV、FPV和CPV等IgG；C为质控线，包被有兔抗鼠二抗；检测膜与吸收垫7连接。2.根据权利要求1所述检测试纸的制备方法，包括本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种犬、猫科动物重要疫病抗原胶体金银联合检测测试纸，其特征在于：衬板８封套在塑料夹１内，塑料夹１的表面开设有加样孔２和观察孔３，衬板８的表面上组装有经过处理的样品垫４、结合垫５、检测膜６和吸收垫７。其中，结合垫５由玻璃纤维素膜制成，上包被有金标ＲＶ、ＣＤＶ、ＦＰＶ和ＣＰＶ等鼠源单抗；检测膜６由硝酸纤维素膜制成，上喷点有多条检测线和１条质控线，Ｒ、Ｄ、Ｆ、Ｐ等为检测线，分别包被有纯化犬抗ＲＶ、ＣＤＶ、ＦＰＶ和ＣＰＶ等ＩｇＧ；Ｃ为质控线，包被有兔抗鼠二抗；检测膜与吸收垫７连接。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：夏咸柱，杨松涛，黄耕，王承宇，高玉伟，王铁成，侯小强，高明华，苏建青，
申请(专利权)人：夏咸柱，杨松涛，黄耕，王承宇，高玉伟，王铁成，侯小强，高明华，苏建青，
类型：发明
国别省市：82
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