Diels-Alder型加合物合成代谢途径中的FAD依赖氧化酶Ma-1及应用制造技术

本发明专利技术公开了Diels‑Alder型加合物合成代谢途径中的FAD依赖氧化酶Ma‑1及应用。本发明专利技术提供如下蛋白：SEQ ID No.3所示Ma‑1蛋白和/或SEQ ID No.4所示Ma‑2蛋白。Ma‑1和Ma‑2具FAD依赖氧化酶特征结构域，Ma‑1能催化异戊烯基酚类化合物的异戊烯基侧链脱氢重排形成二烯体，催化异戊烯基酚类化合物的异戊烯基侧链脱氢后与异戊烯基邻位羟基反应成环；Ma‑2能催化二烯体与查尔酮类化合物双键间发生[4+2]环化反应形成Diels‑Alder型加合物。本发明专利技术对于生产Diels‑Alder型加合物及研究酶促Diels‑Alder型[4+2]环化反应机制具重要理论及实际意义。

【技术实现步骤摘要】
Diels-Alder型加合物合成代谢途径中的FAD依赖氧化酶Ma-1及应用
本专利技术涉及药用植物基因工程领域，具体涉及Diels-Alder型加合物合成代谢途径中的FAD依赖氧化酶Ma-1及应用。
技术介绍
药用植物有效成分的形成是植物次生代谢途径中特有基因的产物。随着植物功能基因组研究的广泛与深入，独具特色又有广阔应用前景的药用植物次生代谢合成相关功能基因的研究逐渐成为研究的热点，这些基因的克隆将为诠释药用植物有效成分的生物合成途径及其调控机制，为药材品质的形成提供理论基础，同时为利用生物技术提高目标成分含量或直接生产有效成分或中间体带来广阔的应用空间。桑是我国重要的传统中药材，含有桑药用部位的中药复方达200种以上。桑叶、桑椹、桑根皮、桑枝均可入药，其中桑叶祛风清热，凉血明目；桑葚补血滋阴，生津润燥；桑白皮(桑除去栓皮的干燥根皮)清肺平喘，行水消肿；桑枝祛风湿，利关节。20世纪70年代以来，国内外学者系统研究了白桑、山桑、鲁桑、蒙桑等桑种的化学成分，分离鉴定芳香类、多羟基生物碱类、香豆素类和三萜类等多种具有良好生物活性的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.蛋白质或成套蛋白质，其特征在于：/n所述蛋白质为如下(A1)-(A4)中任一所示的蛋白质：/n(A1)氨基酸序列如SEQ ID No.3所示的蛋白质；/n(A2)将(A1)所限定的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白质；/n(A3)与(A1)或(A2)所限定的氨基酸序列具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同源性且具有相同功能的蛋白质；/n(A4)在(A1)-(A3)中任一所限定的蛋白质的N端和/或C端连接标签后得到的融合蛋白；/n所述成套蛋白质由蛋白质A和蛋白质B组成；/n所述蛋白质A为如上(A1)-(A4)中任一所示...

【技术特征摘要】
1.蛋白质或成套蛋白质，其特征在于：
所述蛋白质为如下(A1)-(A4)中任一所示的蛋白质：
(A1)氨基酸序列如SEQIDNo.3所示的蛋白质；
(A2)将(A1)所限定的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白质；
(A3)与(A1)或(A2)所限定的氨基酸序列具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同源性且具有相同功能的蛋白质；
(A4)在(A1)-(A3)中任一所限定的蛋白质的N端和/或C端连接标签后得到的融合蛋白；
所述成套蛋白质由蛋白质A和蛋白质B组成；
所述蛋白质A为如上(A1)-(A4)中任一所示的蛋白质；
所述蛋白质B为如下(B1)-(B4)中任一所示的蛋白质：
(B1)氨基酸序列如SEQIDNo.4所示的蛋白质；
(B2)将(B1)所限定的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白质；
(B3)与(B1)或(B2)所限定的氨基酸序列具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同源性且具有相同功能的蛋白质；
(B4)在(B1)-(B3)中任一所限定的蛋白质的N端和/或C端连接标签后得到的融合蛋白。


2.核酸分子或成套核酸分子，其特征在于：所述核酸分子为编码权利要求1或2所述蛋白质的核酸分子；
所述成套核酸分子由核酸分子A和核酸分子B组成；
所述核酸分子A为编码权利要求1或2中所述蛋白质A的核酸分子；
所述核酸分子B为编码权利要求1或2中所述蛋白质B的核酸分子。


3.根据权利要求2所述的核酸分子或成套核酸分子，其特征在于：
所述核酸分子为如下(a1)-(a3)中任一所示的DNA分子：
(a1)核苷酸序列如SEQIDNo.1所示的DNA分子；
(a2)在严格条件下与(a1)限定的DNA分子杂交且编码权利要求1中所述(A1)-(A4)中任一所示的蛋白质的DNA分子；
(a3)与(a1)或(a2)所限定的DNA序列具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同源性且编码权利要求1中所述(A1)-(A4)中任一所示的蛋白质的DNA分子；
所述核酸分子A为如上(a1)-(a3)中任一所示的DNA分子；
所述核酸分子B为如下(b1)-(b3)中任一所示的DNA分子：
(b1)核苷酸序列如SEQIDNo.2所示的DNA分子；
(b2)在严格条件下与(b1)限定的DNA分子杂交且编码权利要求1中所述蛋白质B的DNA分子；
(b3)与(b1)或(b2)所限定的DNA序列具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同源性且编码权利要求1中所述蛋白质B的DNA分子。


4.如下生物材料中的任一种：
(c1)重组载体，为含有权利要求2或3所述核酸分子的重组载体；
(c2)表达盒，为含有权利要求2或3所述核酸分子的表达盒；
(c3)转基因细胞系，为含有权利要求2或3所述核酸分子的转基因细胞系；
(c4)重组菌，为含有权利要求2或3所述核酸分子的重组菌；
(c5)成套重组载体，由重组载体A和重组载体B组成；所述重组载体A为含有权利要求2或3中所述核酸分子A的重组载体；所述重组载体B为含有权利要求2或3中所述核酸分子B的重组载体；
(c6)成套表达盒，由表达盒A和表达盒B组成；所述表达盒A为含有权利要求2或3中所述核酸分子A的表达盒；所述表达盒B为含有权利要求2或3中所述核酸分子B的表达盒；
(c7)成套转基因细胞系，由转基因细胞系A和转基因细胞系B组成；所述转基因细胞系A为含有权利要求2或3中所述核酸分子A的转基因细胞系；所述转基因细胞系B为含有权利要求2或3中所述核酸分子B的转基因细胞系；
(c8)成套重组菌，由重组菌A和重组菌B组成；所述重组菌A为含有权利要求2或3中所述核酸分子A的重组菌；所述重组菌B为含有权利要求2或3中所述核酸分子B的重组菌。


5.试剂盒，含有如下任一：权利要求1所述蛋白质或成套蛋白质、权利要求2或3所述核酸分子或成套核酸分子、权利要求4所述生物材料。


6.根据权利要求4所述的生物材料或权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：所述重组菌为含有权利要求2或3所述核酸分子的重组酵母；
所述重组菌A为含有权利要求2或3所...

【专利技术属性】
技术研发人员：王瑞杉，戴均贵，王升，郭娟，康传志，黄璐琦，
申请(专利权)人：中国中医科学院中药研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11