CRISPR支持的多路基因组工程化制造技术

本文描述了用于理性、多路操作开放阅读框(例如，蛋白质文库中)中的染色体或者细胞或细胞群体中染色体的任何区段的方法和载体，其中使用不同的CRISPR系统。

【技术实现步骤摘要】
CRISPR支持的多路基因组工程化本申请是申请日为2015年2月11日、申请号为201580018819.3、专利技术名称为“CRISPR支持的多路基因组工程化”的中国专利申请(PCT申请号为PCT/US2015/015476)的分案申请。相关申请根据35U.S.C.§119，本申请要求2014年2月11日提交的美国临时申请61/938,608的权益，该申请的全部教导均通过引用并入本文。
技术介绍
大的DNA构建体的理性操作是当前合成生物学和基因组工程工作的主要挑战。近年来，已经开发了多种技术来应对这一挑战并提高能生成突变的特异性和速度。此外，适应性突变是进化的核心驱动因素，但其丰度和对细胞表型的相对贡献即使在大部分充分研究的生物中也知之甚少。这在很大程度上可以归因于与观察和重建这些基因型以及将其存在与感兴趣的表型进行关联相关的技术挑战。例如，依赖于随机诱变的基因组编辑方法导致包含许多突变的复杂的基因型，每一个突变的相对贡献难以解析。而且，由于缺乏关于各个突变的信息，难以确定等位基因之间的上位相互作用(epistaticinteractions)。<本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种文库，其包含细胞群体，所述细胞群体包含载体，所述载体包含：/n(i)编辑盒，其包含与细胞中核酸的靶区域同源并且包含相对于该靶区域的至少一个核苷酸的突变的区域，和赋予核酸酶介导的编辑免疫力的位点；/n(ii)启动子；以及/n(iii)至少一个指导RNA(gRNA)，所述gRNA包含与所述靶区域的一部分互补的区域(RNA)和募集内切酶的区域。/n

【技术特征摘要】
20140211 US 61/938,6081.一种文库，其包含细胞群体，所述细胞群体包含载体，所述载体包含：
(i)编辑盒，其包含与细胞中核酸的靶区域同源并且包含相对于该靶区域的至少一个核苷酸的突变的区域，和赋予核酸酶介导的编辑免疫力的位点；
(ii)启动子；以及
(iii)至少一个指导RNA(gRNA)，所述gRNA包含与所述靶区域的一部分互补的区域(RNA)和募集内切酶的区域。


2.根据权利要求1所述的文库，其中所述文库进一步包含含有靶区域的核酸。


3.根据权利要求1或2所述的文库，其中所述文库进一步包含可通过所述gRNA募集的内切酶。


4.根据权利要求1所述的文库，其中所述启动子是诱导型启动子。


5.根据权利要求1所述的文库，其中所述启动子是阻抑型启动子。

【专利技术属性】
技术研发人员：R·T·吉尔，安德鲁·加斯特，
申请(专利权)人：科罗拉多州立大学董事会法人团体，
类型：发明
国别省市：美国;US