一种林蛙油的DNA提取及鉴定方法技术

本发明专利技术公开了一种林蛙油的DNA提取及鉴定方法，东北林蛙COI3基因，它的碱基序列如SEQ ID NO.1所示；COI3基因在鉴定东北林蛙油方面的应用；它包括：用特异性引物和探针，PCR扩增目的基因；反应结束后取5μL PCR产物，琼脂糖凝胶电泳检测；扩增产物回收测序结果:16个东北林蛙样品经线粒体COI引物的PCR后得到的扩增产物经正向反向测序各得到两个311bp左右片段，经DNAstar软件比对校正后获得230bp左右大小的序列片段，每个东北林蛙样品的序列片段经BLAST比对其序列与东北林蛙COI序列一致性为99%。

【技术实现步骤摘要】
一种林蛙油的DNA提取及鉴定方法
本专利技术属于生物
，具体涉及一种林蛙油的DNA提取及鉴定方法。
技术介绍
中国林蛙，广泛分布在我国长白山山脉，以吉林省林区分布数量最多，黑龙江和辽宁等地也有分布。而东北林蛙主要产区在吉林省的通化、白山、桦甸等县市，是所有林蛙种类中营养价值最丰富的。林蛙油即雌性林蛙输卵管的干制品，它具有珍贵的医疗保健价值，是名贵的中药材。由于地域条件差异，各地林蛙的生态差异较大，各地林蛙油的品质也不同。Che等通过线粒体12S和16S部分基因片段证实了2n=24林蛙物种确为一个单系群体并得到广泛认可。谢峰等使用形态数据对中国境内的中国林蛙居群做了对比研究，结果显示中国东北地区的中国林蛙居群为东北林蛙（Ranadybowskii），并且将中国西北地区的中国林蛙居群恢复为高原林蛙，并且重新定义了中国林蛙的分部区为中国华北，华中。但这种观点现在仍存在很大争议，东北林蛙系统地位位于中国林蛙种种组。现有市场作为哈蟆油的商品，从形式上为干燥原只和已剥好的油(雌蛙输卵管)两种。作为伪劣仿制品，出现黑龙江林蛙、中华蟾蜍、黑斑侧褶本文档来自技高网...

【技术保护点】
1. 东北林蛙基因COI3，它的碱基序列与如SEQ ID NO.1所示的基因同源性大于97%。/n

【技术特征摘要】
1.东北林蛙基因COI3，它的碱基序列与如SEQIDNO.1所示的基因同源性大于97%。


2.权利要求1所述的东北林蛙基因COI3在鉴定东北林蛙油方面的应用。


3.鉴定东北林蛙油的试剂盒，它包括：
COI3-F：5'-cccctttagctggcaaccta-3'；
COI3-R：5'-gtgctggtagagaactgggt-3'；
COI3-P：5'-atcaatcctgggggcaatca-3'。


4.一种林蛙油DNA提取方法，它包括：
1）称取10~100mg林蛙油，加入裂解液0.5~1.0mL，加入20~100μL蛋白酶K，混匀，在50~60℃下，温育55~65分钟；
2）降温到室温，加等体积的氯仿-异戊醇，轻轻上下颠倒10-15分钟，在常温、10000~15000rpm下离心，时间为13~17分钟；
3）取出上清液，加入上清液2/3体积的异丙醇，所述异丙醇提前预冷，上下轻轻颠倒4~6分钟，在-10~4℃下静置25~35分钟，常温条件下离心，转速为10000~15000rpm，时间8~12分钟；
4）弃上清，异丙醇挥发净，加入550~650μL的75%乙醇，3~5℃漂洗；常温条件下离心，转速为10000~15000rpm，时间8~12分钟，弃乙...

【专利技术属性】
技术研发人员：聂丹丹，刘阳，姜佳颖，曲辉，母润红，于淼淼，
申请(专利权)人：长春海关技术中心，
类型：发明
国别省市：吉林;22