【技术实现步骤摘要】
食蚊鱼Nrf2基因及其提取方法及特异性一抗抗体制备方法
本专利技术涉及基因提取及特异性抗体制备
，具体涉及一种食蚊鱼Nrf2基因及其提取方法及特异性一抗抗体制备方法。
技术介绍
食蚊鱼(Gambusiaaffinis)是一种小型淡水鱼，原产于南美洲，归属于胎鳉科食蚊鱼属。雌鱼和雄鱼体型明显区别：雌鱼体型普遍大于雄鱼，雌鱼臀鳍呈扇形，雄鱼臀鳍呈剑型。食蚊鱼又名大肚鱼、柳条鱼，其繁殖方式为卵胎生。食蚊鱼因其极强的环境适应性和广谱的食性，而在全球各地被广泛引进用以控制蚊虫相关的疫情。近些年来，食蚊鱼作为入侵种，已广泛存在于中国的河流水域中。由于其性别差异明显、在自然水域广泛分布、容易捕获以及易于实验室驯养，食蚊鱼适合作为生态环境研究方面的实验动物。目前已有一些以食蚊鱼作为实验动物的研究和报道。但由于食蚊鱼非模式实验动物，也不是珍稀保护物种，对于我国来说甚至属于入侵物种，其强大的环境适应力和繁殖力，甚至侵占了很多中国本地生态位相近的物种(如青鳉)的生存空间，大多数科研人员对其研究还停留在浅表层面。此外，食蚊鱼遗传背景不清晰，N...
【技术保护点】
1.一种食蚊鱼Nrf2基因，其特征在于，该基因片段序列如SEQ ID NO.1所示。/n
【技术特征摘要】
1.一种食蚊鱼Nrf2基因，其特征在于，该基因片段序列如SEQIDNO.1所示。
2.一种如权利要求1所述的食蚊鱼Nrf2基因提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)提取食蚊鱼肝脏总RNA；
2)根据食蚊鱼肝脏总RNA，反转录获得食蚊鱼第一链cDNA；
3)以食蚊鱼第一链cDNA为模板，进行普通PCR扩增以获得食蚊鱼Nrf2核心片段；
4)将已完成PCR扩增的产物与5×LoadingBuffer按混匀后，注入凝胶上的点样孔中，并加入Marker，电泳仪电压90V运行40min；
5)将电泳结束后的凝胶用ChemiDocXRS+凝胶成像系统紫外光检测电泳结果，将符合设计长度的条带位置的凝胶切下，并进行测序。
3.根据权利要求2所述的一种食蚊鱼Nrf2基因提取方法，其特征在于，所述提取食蚊鱼肝脏总RNA包括以下步骤：
1)RAN提取：将食蚊鱼的肝脏放入无菌处理过的圆底离心管内，并加入TrizolReagent溶液，用0一次性无菌注射器抽吸吹打，至溶液为均匀粉红色匀浆，用针头吸取溶液无堵塞情况，无明显块状物；将均匀粉红色匀浆在圆底离心管室温静置5min；加入200μL氯仿，盖好离心管盖后，摇离心管混匀，室温静置5min；再将圆底离心管在4℃，12000g下离心15min；
2)RNA沉淀：吸取上清液到无菌尖底离心管，加入异丙醇，盖好管盖轻轻上下颠倒几次，于室温静置10min，尖底离心管在4℃，12000g下离心10min，离心后管底会形成白色凝胶样沉淀；
3)RNA净化：尖底离心管弃去上清，加入75％无菌处理乙醇，用手指轻弹管底，使沉淀悬浮；尖底离心管在4℃，7500g下离心5min，用移液枪小心吸走上清；在室温状态下干燥5～10min，使乙醇挥发；加入RNaseFreeH2O，溶解RNA。
4.根据权利要求2所述的一种食蚊鱼Nrf2基因提取方法，其特征在于，在进行普通PCR扩增以获得食蚊鱼Nrf2核心片段时，普通PCR的反应体系为ddH2O17.25μL，10×PCRBuffer2.5μL，dNTPMixture2μL，cDNA模板0.75μL，上下游引物各1μL，rTaq酶0.5μL，反应总体系为25μL，普通PCR反应在ABIVeriti96孔梯度PCR仪进行，反应条件为95℃，预变性4min；94℃，变性30s，55℃，退火40s，72℃，延伸1min，循环35次；72℃，延伸10min；4℃保存。
5.根据权利要求4所述的一种食蚊鱼Nrf2基因提取方法，其特征在于，所述引物需根据NCBI数据库和EnsemblASIA数据库现有数据，选择与食蚊鱼亲缘关系近的鱼类的基因序列为参考，并寻找与食蚊鱼亲缘关系近的几个物种之间的保守区域，并在保守区域中根据普通PCR引物设计要求设计引物。
6.根据权利要求1所述的一种食蚊鱼Nrf2基因提取方法，其特征在于，在进行电泳时需要加入...
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