一种DC-CIK细胞制剂及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种DC‑CIK细胞制剂及其制备方法，DC‑CIK细胞制剂包括DC‑CIK细胞、20％人血白蛋白和溶剂，制备方法包括以下制备步骤：1)采集外周血至含肝素钠抗凝剂的采血袋中；2)向外周血离心后的下层红色液体中加入等体积的生理盐水进行稀释吹打混匀；3)用10ml培养基将上述外周血单个核细胞重悬接种到含5ml培养基的T75培养瓶中，置于37℃、5％CO

【技术实现步骤摘要】
一种DC-CIK细胞制剂及其制备方法
本专利技术涉及一种DC-CIK细胞制剂及其制备方法。
技术介绍
乙型肝炎(CHB)是由HBV感染所致的一种传染性疾病，主要损害人体的肝细胞，使肝细胞出现纤维化、炎性反应、坏死及肝硬化。临床上常采用抗病毒药物来控制病情进一步发展，但何种药物更有利于提高治疗效果，改善肝功能，目前临床仍无统一定论。随着科技的进步，免疫治疗已成为手术治疗，化疗和放疗之外最重要的、最有希望的治疗手段。树突状细胞(DendriticCells，DC细胞)是体内功能最强的抗原递呈细胞(Antigenpresentingcell，APC)，能够刺激初始的T淋巴细胞增殖，启动免疫应答；还能够呈递抗原给MHC-I类限制性CD3+和MHC-II类限制性CD4+T淋巴细胞，诱导特异性免疫反应，被称为“天然免疫佐剂”，因此在诱导免疫应答中具有独特的地位。近年来，以DC细胞为基础的免疫治疗在临床应用中得到越来越广泛的关注，是国内外研究的热点。细胞因子诱导的杀伤细胞(CytokineinducedkillerCells，CIKCells本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种DC-CIK细胞制剂，其特征在于：包括DC-CIK细胞、20％人血白蛋白和溶剂。/n

【技术特征摘要】
1.一种DC-CIK细胞制剂，其特征在于：包括DC-CIK细胞、20％人血白蛋白和溶剂。


2.根据权利要求1所述的一种DC-CIK细胞制剂，其特征在于：所述DC-CIK细胞的浓度为每毫升(0.5-2)×107个细胞，所述20％人血白蛋白的含量为体积分数1％-4％，所述溶剂为120-200ml的0.9％生理盐水。


3.根据权利要求2所述的一种DC-CIK细胞制剂，其特征在于：所述的DC-CIK细胞是通过将自体来源的外周血分离的单个核细胞分别诱导培养成DC细胞和CIK细胞，再共同培养获得，所述DC细胞在培养过程中添加粒细胞-巨噬细胞集落刺激生长因子、白细胞介素-4和HBsAg；所述CIK细胞在培养过程中添加抗CD3单克隆抗体、γ-干扰素、白细胞介素-2和自体血浆，所述DC-CIK细胞在培养过程中添加白细胞介素-2和自体血浆，所述培养基为添加80000单位庆大霉素的GT-T551基础培养基。


4.根据权利要求3所述的一种DC-CIK细胞制剂，其特征在于：所述的DC细胞在T75培养瓶中培养，所述的CIK细胞前期在T175培养瓶中培养，待细胞数量达到3×108后将部分细胞转移到2L培养袋中扩大培养，所述DC-CIK细胞的培养在T175培养瓶和2L培养袋中进行。


5.一种由权利要求1-4任一项所述的一种DC-CIK细胞制剂的制备方法，其特征在于，包括以下制备步骤：
1)采集外周血至含枸橼酸钠抗凝剂的采血袋中，无菌条件下转移至50ml离心管中，利用离心机进行离心，离心条件：4℃，1800-2200rpm，12-20min，取上层淡黄色血浆至新的50ml离心管中置于56℃水浴锅中灭活30min，利用离心机进行离心分离，离心条件：4℃，3000-3500rpm，离心3-8min收集上清液，即为自体血浆，置于4℃冰箱备用；
2)向外周血离心后的下层红色液体中加入等体积的生理盐水进行稀释吹打混匀，用移液器缓慢地将20-25ml稀释后的血液缓慢加入到含20ml淋巴细胞分离液的离心管中，使血液和淋巴细胞分离液形成明显分层，利用离心机进行离心分离，离心条件：4℃，1800-2500rpm离心15-25min，吸取底部红细胞上层的所有液体并转移至新的50ml离心管中，再次利用离心机进行离心分离，离心条件：4℃，1800-2500rpm离心3-8min；弃上清液，用40ml生理盐水清洗细胞，取0.5ml细胞悬液用于细胞计数计算细胞回收率，剩余细胞悬液利用离心机离心洗涤，离心条件：4℃，1800-2500rpm离心3-8min，离心所得沉淀即为外周血单个核细胞；
3)用10ml培养基将上述外周血单个核细胞重悬接种到含5ml培养基的T75培养瓶中，置于37℃、...

【专利技术属性】
技术研发人员：王晓宇，李崴，郭康合，李翠云，林冠妃，
申请(专利权)人：海南优尼科尔生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：海南;46