一种利尿活性药物细胞筛选模型及其建立方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种利尿活性药物细胞筛选模型及其建立方法和应用，该方法包括以下步骤：1)MDCK细胞的培养；2)药物的配制；3)NaCl转运浓度的筛选；4)分组、给药与NaCl转运实验；5)统计学分析。本方法采用肾小管细胞模拟氯化钠转运的模型，来筛选利尿活性药物，并在石韦提取单体利尿活性筛选实验证明行之有效，为较为快捷的细胞模型利尿药物筛选模型。

【技术实现步骤摘要】
一种利尿活性药物细胞筛选模型及其建立方法和应用
本专利技术涉及药学领域，具体涉及一种利尿活性药物细胞筛选模型及其建立方法和应用。
技术介绍
根据现有文献报道，药物筛选指的是采用适当的方法，对可能作为药物使用的物质(采样)进行生物活性、药理作用及药用价值的评估过程。药物筛选是生化水平和细胞水平的筛选。筛选模型就是在药物筛选实验中所应用的药理实验模型，由于药物筛选要求实验方案有标准化和定量化的特征，因而在传统药理实验中常见的动物实验在药物筛选中较少应用，根据实验模型的不同，药物筛选可以分为生化水平的筛选和细胞水平的筛选。细胞水平的药物筛选是更接近生理条件的一种药物筛选模型，其模型是拟设计药物作用的靶细胞，应用细胞培养技术获取所需细胞，将这些细胞与候选化合物相互作用，通过与生化水平筛选类似的检测技术测定化合物的作用能力，从而对化合物进行筛选。当各种疾病原因引起排尿困难时就会借助药物治疗，以解决排尿难的问题，但如何筛选利尿活性的药物是医药界普遍关注的难题。传统筛选利尿活性药物没有有效快捷的方法，如公开的文献：叶潇等，川木通对大鼠本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种利尿活性药物细胞筛选模型的建立方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：1)MDCK细胞的培养；2)药物的配制；3)NaCl转运浓度的筛选；4)分组、给药与NaCl转运实验；5)统计学分析。/n

【技术特征摘要】
1.一种利尿活性药物细胞筛选模型的建立方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：1)MDCK细胞的培养；2)药物的配制；3)NaCl转运浓度的筛选；4)分组、给药与NaCl转运实验；5)统计学分析。


2.根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于，MDCK细胞的培养具体为：购买MDCK细胞株，用含5～15％胎牛血清、0.5～1.5％青霉素-链霉素溶液、85～95％的DMEM高糖培养基，37℃、CO2培养箱MDCK细胞培养至对数生长期。


3.根据权利要求2所述的建立方法，其特征在于，MDCK细胞的培养具体为：购买MDCK细胞株，用含10％胎牛血清、1％青霉素-链霉素溶液、89％的DMEM高糖培养基，37℃、CO2培养箱MDCK细胞培养至对数生长期。


4.根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于，药物的配制具体为：取NaCl，DMEM高糖培养基分别成0.012、0.015、0.018、0.021、0.024、0.027、0.030、0.033、0.036g·mL-1NaCl备用，里白烯、22-羟基何伯烷、β-谷甾醇、cycloeucalenone、泽屋萜、dryocrassol、Hopan-28,22-olide、齐墩果酸、22,28-epoxyhopane、cyclohopenol、cycloeucalenol、木栓酮、(23E)-cycloart-23-ene-3β,25-diol、(23E)-cycloart-23，25-ene-3β-ol、cyclolaudenol、11-羰基-β-乙酰乳香酸、2',3'-dihydroxypropylpentadecanoate、β-胡萝卜苷和氢氯噻嗪用DMSO助溶后，DMEM高糖培养基分别稀释至100umol·L-1备用。


5.根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于，NaCl转运浓度的筛选具体为：
取对数生长期MDCK细胞体外培养，分为生理盐水组0.009g·mL-1和NaCl不同浓度梯度组：分别为0.012、0.015、0.018、0.021、0.024、0.027、0.030、0.033、0.036g·mL-1共9个浓度梯度，取相应浓度NaCl药液孵育MDCK细胞3～10小时，MTT法检测细胞存活率，确定研究NaCl转运的最佳NaCl孵育浓度。


6.根据权利要求5所述的建立方法，其特征在于，NaCl转运浓度的筛选具体为：取对数生长期MDCK细胞体外培养，分为生理盐水组0.009g·mL-1和NaCl不同浓度梯度组：分别为0.012、0.015、0.018、0.021、0.024、0.027、0.030、0.033、0.036g·mL-1共9个浓度梯度，取相应浓度NaCl药液孵育MDCK细胞8小时，MTT法检测细胞存活率，确定研究NaCl转运的最佳NaCl孵育浓度。


7.根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于，分组、给药与NaCl转运实验具体为：取Transwell板，规格：0.4um孔径，24孔，12小室，在小室内每孔接种200uL·孔-1密度为4×105个·mL-1的MDCK细胞，小室外每孔给予完全培养基1mL以适应细胞正常生长，细胞贴壁后，测定每孔电阻值，于37℃测得跨膜电阻值≥300Ω·cm2，即可用于下一步实验；取符合实验要求的MDCK细胞，随机分为模型组，给予DMEM培养基、各石韦提取单体组100umol·L-1、氢氯噻嗪组100umol·L-1，每组3个复孔，37℃二氧化碳培养箱培养20～28h，20～28h后吸弃小室内液体，于Transwell板小室内给予含NaCl0.015g·mL-1或含尿素15mmol·L-1的D...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨武德，隋怡，龙毅，罗国勇，於祥，
申请(专利权)人：贵州中医药大学，
类型：发明
国别省市：贵州;52