一种表面分子印迹聚合物、固相萃取柱及含有该固相萃取柱的试剂盒制造技术

本发明专利技术属于分子印迹聚合物技术领域，公开了一种表面分子印迹聚合物，通过模板和功能单体经印迹聚合反应后洗脱制备而成，模板可单独或同时识别α‑鹅膏毒肽、β‑鹅膏毒肽、γ‑鹅膏毒肽、二羟鬼笔毒肽和羧基二羟鬼笔毒肽中的一种或者多种，模板结构为，

【技术实现步骤摘要】
一种表面分子印迹聚合物、固相萃取柱及含有该固相萃取柱的试剂盒
本专利技术属于生物制品
，具体涉及一种表面分子印迹聚合物、固相萃取柱及含有该固相萃取柱的试剂盒。
技术介绍
蘑菇中含有丰富的植物蛋白、氨基酸和维生素，正是因为它的营养和美味，在日常饮食中越来越受到人们的喜爱。它们当中的一些还是生物活性次生代谢产物的来源，这些代谢产物含有抗氧化、抗肿瘤和抗菌成分。蘑菇中毒主要是由于人们误食了野生毒蘑菇引起的，这是很多国家都存在的一个公共卫生问题。因为蘑菇中毒的症状通常会表现的比较晚而且不明显，所以蘑菇中毒的早期诊断和治疗仍然是临床实践中的重大挑战。大部分蘑菇中毒事件主要是由于误食了鹅膏菌毒素，包括黑鹅膏菌、鬼笔鹅膏菌、鳞柄白鹅膏菌和白毒鹅膏菌。鹅膏菌毒素主要被分为三类：一种是反应慢但毒性高的毒伞肽，另外两种是反应快的鬼笔毒肽和病毒毒素。鹅膏毒肽是毒伞肽家族中的主要成员，主要是由剧毒蘑菇的子实体产生的，是致死率最高的一种蘑菇毒素，半数致死量为50-100μg/kg。其作用机理如下：鹅膏毒肽抑制DNA依赖性RNA聚合II酶活性，导致蛋白质合成遭到破环，从而导致细胞坏死。而且鹅膏毒肽具有良好的热稳定性，常规的存放不会降低其毒性。据估计，由鹅膏毒肽引起的急性肝衰竭占世界蘑菇中毒相关死亡人数的90％以上。在蘑菇中毒的临床治疗中，蘑菇毒素的准确检测对其精确诊断和康复监测发挥着至关重要的作用。高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)具有其他分析仪器无可比拟的灵敏度，并且可以提供分子结构信息，这使它成为复杂样品中痕量化合物定性和定量分析检测的金标准。Leite等报道了基于蛋白沉淀和固相萃取(SPE)样品前处理技术协同UPLC-MS/MS用于尿液和肝脏样品中α-和β-鹅膏毒肽的测定。Helfer等报道了一种在线湍流色谱串联HPLC-MS/MS用于人尿中α-和β-鹅膏毒肽的检测。Tomková等报道了一种基于弱阳离子聚合物作为SPE吸着剂结合和TOF串联UPLC用于人尿中毒蝇碱、α-和β鹅膏毒肽的检测。这些方法都包括了以下几个步骤：有机溶剂沉淀蛋白质、SPE和HPLC-MS/MS分析。尽管高灵敏质谱的发展迅速，但高效的样品制备仍然需要进一步降低基质效应、提高回收率、减少杂质干扰。此外，大部分研究集中在鹅膏毒肽分析检测上，而对生物样品中鬼笔毒肽测定的研究相对较少。基于色谱床分离和富集目标分析物，化学家们认为SPE技术可以满足不同的分析需求，从简单的基质去除到解决高选择性富集的挑战。通常，C8-和C18-化学键合的二氧化硅吸附剂的pH稳定性较差，残留的硅醇基团对目标分析物的保留有负效应。亲水亲脂平衡聚合物是最具商业价值的吸附剂，它由亲水单体和疏水交联剂聚合而成，但它不具备特异性。同时，固相萃取柱的回收率受分析物与固体吸附剂的吸附效果以及杂质的去除率的影响。开发新的具有专一吸附效果的吸附剂引起了越来越多科学工作者的兴趣，各种不同结构、组成和形貌的材料被研发成为了SPE吸附剂。分子印迹技术是通过自组装的功能单体和交联物在模板分子周围发生聚合反应，生成具有选择性识别能力的分子印迹聚合物。当模板去除后，就会产生特定的识别位点和印迹空穴。因为分子印迹技术的简单制备、选择性强、化学稳定性好等优点，近年来引起了人们的广泛关注，并且在许多领域得到了广泛的应用，包括固相萃取吸附剂、固相微萃取涂料、色谱固定相、化学和生物传感元件、酶和催化剂。但是，分子印迹聚合物在水环境中的识别能力不强。其主要原因是非共价分子印迹中最常用的氢键作用在水环境中容易受到破坏，从而降低了MIPs的识别性能。MIPs的合成中一个非常重要的过程是模板分子和功能单体之间形成的特定空间结构的聚合物，因此功能单体的选择对提高MIPs的亲和力和选择性具有至关重要的作用。环糊精是一种双亲性大分子，其外层带有亲水性基团-羟基，可修饰不同官能团；内腔具有疏水性，可利用其非极性或者空穴形成包合物。环糊精已被广泛应用于催化、化学传感、样品制备、色谱分离、废水处理、药物输送等各个领域。特别是近期有关于环糊精修饰的功能单体在分子印迹技术中对提高水溶液中MIPs的识别性能综述进行了报道。
技术实现思路
为了解决现有技术存在的上述问题，本专利技术目的在于提供一种表面分子印迹聚合物、固相萃取柱及含有该固相萃取柱的试剂盒。本专利技术所采用的技术方案为：本专利技术提供了一种表面分子印迹聚合物，通过模板和功能单体经印迹聚合反应后洗脱制备而成，所述模板可单独或同时识别α-鹅膏毒肽、β-鹅膏毒肽、γ-鹅膏毒肽、二羟鬼笔毒肽和羧基二羟鬼笔肽中的一种或者多种，所述模板的结构式为优选的，上述表面分子印迹聚合物，所述功能单体包括甲基丙烯酸和乙烯基修饰的β-环糊精。优选的，上述表面分子印迹聚合物，模板∶甲基丙烯酸∶乙烯基修饰的β-环糊精功能单体的摩尔数量比为1∶1∶3。一种前述的表面分子印迹聚合物制得的固相萃取柱。优选的，上述固相萃取柱，所述固相萃取柱中表面分子印迹聚合物的吸附量与固相萃取柱的体积比为100mg∶6mL。本专利技术还提供一种试剂盒，包括前述固相萃取柱，还包括提取液和洗脱液。优选的，上述试剂盒，所述提取液为醋酸/醋酸钠缓冲溶液。优选的，上述试剂盒，所述醋酸/醋酸钠缓冲溶液的浓度为0.01mol/L，pH为5.0。优选的，上述试剂盒，所述洗脱液为甲醇和乙酸的混合液，甲醇∶乙酸的体积比为98∶2。优选的，上述试剂盒，所述洗脱液的体积为10mL。本专利技术的有益效果为：本专利技术提供的合成表面分子印迹聚合物，通过采用特定的模板分子，可单独或同时识别五种鹅膏菌毒素，包括α-鹅膏毒肽、β-鹅膏毒肽、γ-鹅膏毒肽、二羟鬼笔毒肽和羧基二羟鬼笔毒素中的一种或者多种。利用该表面分子印迹聚合物制备的固相萃取柱，采用超高效液相色谱串联质谱联用仪进行检测，仅需八分钟就可同时对5种鹅膏菌毒素进行定性和定量分析，具有较高的准确度和较低的检出限。本专利技术的检测方法对蘑菇中毒的日常检测，尤其是急性蘑菇中毒的诊断具有重要的应用前景。附图说明图1是本专利技术中五种蘑菇毒素和模板分子的化学结构式；图2是本专利技术中乙烯基修饰的β-环糊精功能单体的制备流程图；图3是本专利技术中MIPs合成路径图；图4是本专利技术中MAA-模板(A)、β-环糊精-模板(B)和MAA-鹅膏毒肽-环糊精复合物(C)的独立梯度模型图；图5是本专利技术中不同比例的二元功能单体对MIPs的吸附容量和印迹因子的影响；图6是本专利技术中SiO2微球和MIPs的扫描电镜(SEM)图；图7是本专利技术中SiO2、乙烯基修饰的SiO2和MIPs的FT-IR图(A)，TGA分析曲线(B)；图8是本专利技术中MIPs吸附剂用量、提取液pH值、甲醇洗脱液和乙腈洗脱液对固相萃取效果的影响；图9是本专利技术中不含目标物尿液为基质配制的不同浓度标准溶液的总离子色谱图(A)和疑似蘑菇中毒病人尿液的总离子色谱图(B)；图10是本专利技术中乙烯基修饰的β-本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种表面分子印迹聚合物，其特征在于，通过模板和功能单体经印迹聚合反应后洗脱制备而成，所述模板可单独或同时识别α-鹅膏毒肽、β-鹅膏毒肽、γ-鹅膏毒肽、二羟鬼笔毒肽和羧基二羟鬼笔肽中的一种或者多种，所述模板的结构式为/n

【技术特征摘要】
1.一种表面分子印迹聚合物，其特征在于，通过模板和功能单体经印迹聚合反应后洗脱制备而成，所述模板可单独或同时识别α-鹅膏毒肽、β-鹅膏毒肽、γ-鹅膏毒肽、二羟鬼笔毒肽和羧基二羟鬼笔肽中的一种或者多种，所述模板的结构式为





2.根据权利要求1所述的表面分子印迹聚合物，其特征在于，所述功能单体包括甲基丙烯酸和乙烯基修饰的β-环糊精。


3.根据权利要求2所述的表面分子印迹聚合物，其特征在于，模板∶甲基丙烯酸∶乙烯基修饰的β-环糊精功能单体的摩尔数量比为1∶1∶3。


4.一种权利要求1～3任意一项所述的表面分子印迹聚合物制得的固相萃取柱。


5.根据权利要求4所述的固相萃取柱...

【专利技术属性】
技术研发人员：谭磊，邓芬芳，杨智聪，张林，
申请(专利权)人：广州市疾病预防控制中心广州市卫生检验中心，广州市食品安全风险监测与评估中心，广州医科大学公共卫生研究院，
类型：发明
国别省市：广东;44