一种富集和分离四氯乙烯脱氯菌的方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种富集和分离四氯乙烯脱氯菌的方法及应用。本发明专利技术实现了四氯乙烯完全脱氯菌的高效富集培养，采用本发明专利技术富集方法得到的脱氯混合菌在第26天可将PCE完全脱氯，表现出优异的脱氯效果，且脱氯混合菌中Dehalococcoides的丰度达到68.87％；并进一步利用生态学原理，从富集的脱氯混合菌中分离纯化获得高效PCE脱氯菌地杆菌Geobacter。本发明专利技术为实现高效富集和分离卤代有机物脱卤功能微生物和获得工程菌剂提供了有利的技术指导，对于卤代有机物厌氧微生物修复技术领域具有重要的应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种富集和分离四氯乙烯脱氯菌的方法及应用
本专利技术属于卤代有机污染原位微生物修复领域，具体涉及一种富集和分离四氯乙烯脱氯菌的方法及应用。
技术介绍
四氯乙烯(PCE)因其良好的溶解性、挥发性，被广泛用作化工合成过程的溶剂和金属加工、干洗行业洗涤剂等。在生产使用时，由于操作和处理不当导致大量PCE进入环境中，造成严重的环境污染，特别是土壤和地下水环境。同时PCE因其较强的环境毒性和对人体的致癌效应，被列为2A类致癌物。目前针对PCE污染的原位修复主要有原位物理修复(如原位热修复)、原位化学修复(过氧化氢、零价铁等)和原位微生物修复(如原位生物刺激和生物添加)等。其中原位生物修复法以其修复成本低，反应条件温和，无二次污染等优势，在修复领域备受关注。但现有的研究表明，仅投加电子供体和碳源，刺激原位生物天然衰减的效果不如高效生物添加的明显，所以高效的工程微生物对于原位生物修复十分重要。针对PCE污染严重的土壤和地下水厌氧环境的修复，厌氧微生物脱卤过程在原位微生物修复中起关键作用。PCE的厌氧脱氯主要分为两个过程：PCE逐步脱去两个氯原子产生二本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高效富集四氯乙烯完全脱氯混合菌的方法，其特征在于，是从四氯乙烯污染物中采集沉积物样品，接种至以0.5～1mM四氯乙烯为唯一电子受体的DL-乳酸钠厌氧脱氯液体培养基中完全厌氧培养，待培养液中四氯乙烯完全脱氯后，保持同等培养条件，进行2～3次传代至培养液中无沉积物残留；/n所述DL-乳酸钠厌氧脱氯液体培养基包含盐、微量元素供体、pH调节剂、缓冲试剂、氧指示剂、有机还原剂、维他命、DL-乳酸钠和L-半胱氨酸；/n所述缓冲试剂为NaHCO

【技术特征摘要】
1.一种高效富集四氯乙烯完全脱氯混合菌的方法，其特征在于，是从四氯乙烯污染物中采集沉积物样品，接种至以0.5～1mM四氯乙烯为唯一电子受体的DL-乳酸钠厌氧脱氯液体培养基中完全厌氧培养，待培养液中四氯乙烯完全脱氯后，保持同等培养条件，进行2～3次传代至培养液中无沉积物残留；
所述DL-乳酸钠厌氧脱氯液体培养基包含盐、微量元素供体、pH调节剂、缓冲试剂、氧指示剂、有机还原剂、维他命、DL-乳酸钠和L-半胱氨酸；
所述缓冲试剂为NaHCO3和Tris乙磺酸。


2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述沉积物样品与DL-乳酸钠厌氧脱氯液体培养基的体积比为4～5：400～500。


3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述培养温度为30～35℃，所述液体培养基的pH为7～7.5。


4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述厌氧培养是通过向培养基加入Na2S来保证培养环境的完全厌氧。


5.权利要求1～4任一所述方法在富集四氯乙烯完全脱氯菌方面的应用。


6.权利要求1～4任一所述方法富集得到的四氯乙烯完全脱氯混合菌。


7.根据权利要求6所述混合菌，其特征在于，所述混合菌包含Dehalococcoides。


8....

【专利技术属性】
技术研发人员：汪善全，梁咏颐，鲁祺鸿，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：广东;44