瑞香素在制备治疗糖皮质激素诱导骨质疏松药物中的用途制造技术

本发明专利技术公开了瑞香素在制备治疗糖皮质激素诱导骨质疏松药物中的用途，包括：(1)瑞香素抑制糖皮质激素导致的骨量丢失，并抑制糖皮质激素激活的破骨细胞活性和功能，具有显著改善糖皮质激素诱导骨丢失、骨质疏松的作用；(2)瑞香素通过上调β‑catenin的表达及GSK‑3β的磷酸化水平，即激活经典的Wnt/β‑catenin信号通路，促进成骨细胞增殖，促进成骨基因表达，并同时抑制破骨基因表达，最终促使成骨细胞矿化成熟，具有较高的临床应用价值和开发前景。

【技术实现步骤摘要】
瑞香素在制备治疗糖皮质激素诱导骨质疏松药物中的用途
本专利技术属于制药领域，涉及瑞香素的用途，尤其是瑞香素在制备治疗糖皮质激素诱导骨质疏松中的用途。
技术介绍
糖皮质激素诱导骨质疏松(Glucocorticoidinducedosteoporosis，GIOP)是最常见的继发性骨质疏松，其导致的骨折发生率约为5％，严重影响生活质量。GIOP发生的病理生理特点为骨吸收增加，同时骨生成减少，瑞香素在临床上具有抗炎症、抗氧化、抗肿瘤、神经保护和抗风湿等药理作用，因此，研究制备以抗骨吸收和(或)促骨形成为基础的药物是目前防治GIOP的关键，但是瑞香素在GIOP中的研究尚无报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，提供一种瑞香素在制备治疗糖皮质激素诱导骨质疏松的药物中的新用途，具体包括：瑞香素在制备治疗糖皮质激素诱导骨质疏松药物中的用途。瑞香素促进成骨细胞增殖、成骨基因表达，抑制破骨基因表达和破骨细胞功能活性，进而抑制糖皮质激素诱导的骨丢失、骨质疏松。瑞香素通过激活经典Wnt/β-catenin信号通路发挥抗糖皮质激素诱导骨质疏松的作用。进一步的，以GIOP大鼠为研究模型，瑞香素为研究对象，分别用两种不同浓度瑞香素(1mg/kg和4mg/kg)干预模型，采用micro-CT检测股骨远端骨量变化。结果表明地塞米松(糖皮质激素)(Hexadecadrol，DEX)应用能显著降低骨量，而联合4mg/kg浓度的瑞香素能够显著提升大鼠骨量至接近正常组水平，说明瑞香素具有抗GIOP的作用。更进一步的，采用组织形态学染色观察成骨和破骨情况发现：地塞米松(糖皮质激素)促进破骨细胞生成基因TRAP表达，抑制成骨基因碱性磷酸酶(ALP)、Osterix(OST)和osteocalcin(OCN)表达，而瑞香素能够逆转这一表型，血清检测同样发现瑞香素显著增加OCN表达和提升ALP活性，同时抑制TRAP活性。更进一步的，采用westernblots检测Wnt/β-catenin信号相关蛋白表达：与对照组比较，地塞米松(糖皮质激素)组细胞核内β-catenin表达降低，而胞外β-catenin表达增多，同时GSK-3β的磷酸化水平、Wnt/β-catenin靶基因cyclinD1和c-Myc蛋白表达均降低，而高浓度瑞香素能够逆转这一表型。体外培养MC3T3-E1成骨细胞，瑞香素促进细胞增殖和矿化，而Wnt/β-catenin能抑制瑞香素的作用。综上，本专利技术的有益效果是：申请人以实验数据证明瑞香素通过上调β-catenin的表达及GSK-3β的磷酸化水平，即激活经典的Wnt/β-catenin信号通路，促进成骨细胞增殖和成骨基因表达，并同时抑制破骨基因表达，最终促使成骨细胞矿化成熟，具有显著改善糖皮质激素诱导骨丢失，是GIOP(糖皮质激素诱导骨质疏松)防治的特效药物。附图说明图1为micro-CT检测瑞香素对GIOP大鼠模型骨量的影响的示意图；图2为骨矿物含量统计示意图；图3为骨体积分数统计示意图；图4为皮质骨厚度统计示意图；图5为骨小梁数目统计示意图；图6为骨小梁厚度统计示意图；图7为骨小梁间距统计示意图；图8为骨小梁中破骨细胞染色(TRAP)示意图；图9为TRAP+细胞数目统计示意图；图10为免疫组化检测成骨基因ALP、OCN、OST表达示意图；图11为ALP+、OCN+、OST+细胞数目统计示意图；图12为检测外周血碱性磷酸酶(ALP)活性示意图；图13为ELISA检测外周血OCN含量示意图；图14为Westernblots检测骨组织细胞中β-catenin蛋白表达示意图；图15为β-catenin蛋白相对表达量统计示意图；图16为Westernblots检测骨组织细胞中GSK-3β和p-GSK-3β蛋白表达示意图；图17为GSK-3β和p-GSK-3β蛋白相对表达量统计示意图；图18为Westernblots检测骨组织细胞中Wnt靶基因CyclinD1和c-Myc蛋白表达示意图；图19为CyclinD1和c-Myc蛋白相对表达量统计示意图；图20为不同浓度瑞香素对MC3T3-E1成骨细胞增殖的影响示意图；图21为不同时间处理的瑞香素对MC3T3-E1成骨细胞增殖的影响示意图；图22为茜素红染色检测瑞香素对MC3T3-E1成骨细胞矿化影响示意图；图23为瑞香素对MC3T3-E1成骨矿化定量统计示意图；图24为茜素红染色检测Wnt/β-catenin抑制剂XAV939对瑞香素促进成骨矿化影响示意图；图25为Wnt/β-catenin抑制剂XAV939对瑞香素促进成骨矿化定量统计示意图。具体实施方式下面的动物实验研究说明本专利技术中瑞香素治疗糖皮质激素诱导骨质疏松的作用：实验例1：S1、通过以下方法制备GIOP大鼠模型，并建立药物干扰和实验分组：取12周龄雄性SpragueDawley大鼠随机分为对照组、DEX组、DEX+L-Daph组和DEX+H-Daph组。具体实施方案：除对照组外，其余3组大鼠每天肌内注射DEX(1mg/kg)；同时，DEX+L-Daph组大鼠每天腹腔注射瑞香素(1mg/kg)，DEX+H-Daph组大鼠每天腹腔注射瑞香素(4mg/kg)；对照组大鼠每天给予注射等剂量生理盐水；连续给药8周后用于后续实验；S2、micro-CT检测分析骨量变化：大鼠给药8周后安乐处死，取双侧胫腓骨，4％多聚甲醛固定48h，75％酒精中储存，用micro-CT扫描设备分层扫描股骨骨微结构并进行三维重建(分辨率为15um)，计算骨矿物含量(Bonemineralcontent,BMC)、骨体积分数(Bonevolume/totalvolume,BV/TV)、皮质骨厚度(Corticalthickness)、骨小梁数目(Trabecularnumber)、骨小梁厚度(Trabecularthickness)和骨小梁间距(Trabecularseparation)等参数。结果参阅附图-1所示，CT三维重建显示与对照组比较，DEX组骨小梁结构稀疏，说明GIOP模型构建成功，而联合应用瑞香素(Daph)能够显著增加GIOP大鼠骨小梁结构致密性，继续参阅附图2-附图7所示，进一步分析瑞香素在GIOP中发挥的作用，结果发现，每天给予1mg/kg剂量(L-Daph)和4mg/kg剂量(H-Daph)的瑞香素能够逆转DEX导致的大鼠骨量降低，且4mg/kg剂量(H-Daph)的瑞香素能够显著逆转DEX导致的大鼠骨量降低，说明瑞香素对大鼠GIOP具有治疗作用。实验例2：组织形态学分析，通过以下实验方法实现：(1)、骨组织脱钙：新鲜大鼠股骨组织固定于4％多聚甲醛48h。将组织从固定液取出置于10％EDTA脱钙液内脱本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.瑞香素在制备治疗糖皮质激素诱导骨质疏松药物中的用途。/n

【技术特征摘要】
1.瑞香素在制备治疗糖皮质激素诱导骨质疏松药物中的用途。


2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，瑞香素促进成骨细胞增殖、成骨基因表达，抑制破骨基因表达和破骨细胞功能活性，进而...

【专利技术属性】
技术研发人员：王永魁，陈健，陈松峰，董超，朱忠培，
申请(专利权)人：郑州大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：河南;41