一种基于纳米酶检测葡萄糖-6-磷酸含量的方法技术

本发明专利技术公开了一种基于纳米酶检测葡萄糖‑6‑磷酸含量的方法，属于纳米生物分析检测领域。本发明专利技术方法通过偶联葡萄糖‑6‑磷酸脱氢酶(G6PD)/对羟基苯甲酸羟化酶(PHBH)原位生成光活性纳米材料模拟酶，具有多重信号放大作用，实现对葡萄糖‑6‑磷酸(G‑6‑P)的灵敏检测；具体是由G6PD/PHBH酶级联反应生成的3,4‑二羟基苯甲酸(PCA)与钛酸锶(SrTiO

【技术实现步骤摘要】
一种基于纳米酶检测葡萄糖-6-磷酸含量的方法
本专利技术涉及纳米生物分析检测领域，尤其涉及一种基于纳米酶检测葡萄糖-6-磷酸含量的方法。
技术介绍
磷酸化碳水化合物是生化途径中的关键中间体，葡萄糖的不同磷酸化与不同的生物过程有关。葡萄糖-6-磷酸(G-6-P)是糖酵解和糖原生成的中心点，也是戊糖磷酸途径中的起始代谢产物[NguyenA.H.；DeutschJ.M.；XiaoL.；SchultzZ.D.Anal.Chem.2018,90,11062-11069]。监测血液或人体组织中的G-6-P浓度特别重要，因为它可以直接反映与许多分解代谢途径相关的酶的相对活性，如磷酸葡萄糖苷酶，己糖激酶，和磷酸葡萄糖异构酶等[BanerjeeS.；SarkarP.；TurnerA.Anal.Biochem.2013,439,194–200]。此外，G-6-P水平的监测已被用于深入了解人红细胞[KirkmanH.N.；GaetaniG.F.J.Biol.Chem.1986,261,4033–4038.]和大鼠肝细胞中葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PDH)的调节[S本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种测定葡萄糖-6-磷酸含量的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：/n(1)将不同浓度的葡萄糖-6-磷酸分别与葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、氧化型辅酶混合，孵育；然后分别加入对羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸羟化酶和缓冲液，继续进行孵育，获得相应混合溶液；/n(2)孵育结束后，分别向混合溶液中加入钛酸锶、特征显色底物和缓冲溶液，在可见光照射下，使用酶标仪进行光谱扫描，获得不同浓度下的吸光度的增量；所述的吸光度增量为不同葡萄糖-6-磷酸浓度相对葡萄糖-6-磷酸浓度为0时的吸光度增量；/n(3)利用葡萄糖-6-磷酸的浓度与吸光度的增量构建线性关系，得到线性测定模型。/n

【技术特征摘要】
1.一种测定葡萄糖-6-磷酸含量的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
(1)将不同浓度的葡萄糖-6-磷酸分别与葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、氧化型辅酶混合，孵育；然后分别加入对羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸羟化酶和缓冲液，继续进行孵育，获得相应混合溶液；
(2)孵育结束后，分别向混合溶液中加入钛酸锶、特征显色底物和缓冲溶液，在可见光照射下，使用酶标仪进行光谱扫描，获得不同浓度下的吸光度的增量；所述的吸光度增量为不同葡萄糖-6-磷酸浓度相对葡萄糖-6-磷酸浓度为0时的吸光度增量；
(3)利用葡萄糖-6-磷酸的浓度与吸光度的增量构建线性关系，得到线性测定模型。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述特征显色底物为3,3’,5,5’-四甲基联苯胺和/或2,2’-联氮基双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐。


3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述氧化型辅酶选自氧化型辅酶Ⅰ和/或氧化型辅酶Ⅱ。


4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，步骤(1)是将0.05mM的氧化型辅酶，14U/mL的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶，不同浓度的葡萄糖-6-磷酸混合，在30～40℃...

【专利技术属性】
技术研发人员：王光丽，孙冬雪，刘田利，顾萌萌，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32