一种多靶标miRNA检测微流控芯片、检测方法及其快速定量检测系统技术方案

本发明专利技术提出一种多靶标miRNA检测微流控芯片，检测微流控芯片在预环化腔室和环化腔室间设有第一微混合器，在环化腔室、扩增腔室间通道设有第二微混合器，在扩增腔室和试纸条腔室间通道设有第三微混合器；预环化腔室完成环化体系的进样，环化腔室完成锁式探针与目标miRNA的环化反应，扩增腔室完成目标miRNA与锁式探针环化产物的滚环扩增；试纸条腔室内设有荧光侧流向层析试纸条。本系统为miRNA的快速检测提供了一种微流控芯片检测平台，可以实现核酸提取‑扩增‑检测一体化，在缩小样本量的同时极大地提高检测效率。

【技术实现步骤摘要】
一种多靶标miRNA检测微流控芯片、检测方法及其快速定量检测系统
本专利技术属于生物医学检测领域，具体涉及一种多靶标miRNA检测微流控芯片、检测方法及其快速定量检测系统。
技术介绍
MicroRNA(miRNA)是一类内源单链非编码的小RNA分子，长度为18—25nt。迄今为止，已有超过2500种miRNA被报道为基因表达的关键调节因子，涉及诸如细胞增殖、迁移和癌变等细胞过程。大量研究表明miRNA可作为细菌/病毒感染、精确肿瘤诊断和预后的重要生物标志物。因此，miRNA的定量检测技术研究对于提高疾病的早期诊断率、快速分诊、危险分层和预后评估等均具有重要意义。迄今为止，已有许多研究报道关于miRNA检测的分析方法。其中，微阵列分析、Northern印记、实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)被认为是传统标准方法。(1)微阵列分析，RNA纯化后，通常使用T4RNA连接酶在miRNA的3'末端标记带有荧光基团的核苷酸。在载玻片上，通过标记的miRNA与离散排列的探针(互补的DNA寡核苷酸)杂交发现特定的miRNA。miRN本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种多靶标miRNA检测微流控芯片，包括预环化腔室、环化腔室、扩增腔室、试纸条腔室，其特征在于，所述检测微流控芯片将预环化腔室、环化腔室、扩增腔室和试纸条腔室通过通道依次连通；/n在预环化腔室和环化腔室之间设有第一微混合器，在环化腔室、扩增腔室之间的通道上设有第二微混合器，在扩增腔室和试纸条腔室之间的通道上设有第三微混合器；/n所述预环化腔室完成环化体系的进样，所述环化腔室完成锁式探针与目标miRNA的环化反应，所述扩增腔室完成目标miRNA与锁式探针环化产物的滚环扩增；所述试纸条腔室内通过荧光侧流向层析试纸检测目标miRNA。/n

【技术特征摘要】
1.一种多靶标miRNA检测微流控芯片，包括预环化腔室、环化腔室、扩增腔室、试纸条腔室，其特征在于，所述检测微流控芯片将预环化腔室、环化腔室、扩增腔室和试纸条腔室通过通道依次连通；
在预环化腔室和环化腔室之间设有第一微混合器，在环化腔室、扩增腔室之间的通道上设有第二微混合器，在扩增腔室和试纸条腔室之间的通道上设有第三微混合器；
所述预环化腔室完成环化体系的进样，所述环化腔室完成锁式探针与目标miRNA的环化反应，所述扩增腔室完成目标miRNA与锁式探针环化产物的滚环扩增；所述试纸条腔室内通过荧光侧流向层析试纸检测目标miRNA。


2.根据权利要求1所述的检测微流控芯片，其特征在于，在所述层析试纸的结合垫上设有荧光微球-核酸探针偶联物，检测线上设置检测核酸序列。


3.根据权利要求1所述的检测微流控芯片，其特征在于，所述微混合器设置为进液和出液均为螺旋线路且底部有颗粒的通道。


4.一种根据权利要求1所述的miRNA检测微流控芯片，其特征在于，所述检测微流控芯片将结合腔室、洗脱腔室、预环化腔室、环化腔室、扩增腔室和试纸条腔室通过通道依次连通，
在所述结合腔室内设有磁铁薄片和磁珠冻干粉，在预环化腔室和环化腔室之间设有第一微混合器，在环化腔室、扩增腔室之间的通道上设有第二微混合器，在扩增腔室和试纸条腔室之间的通道上设有第三微混合器；
所述结合腔室中目标miRNA与磁珠上的寡聚dT序列碱基配对，完成目标miRNA的提取；所述洗脱腔室完成目标miRNA的洗脱；所述预环化腔室完成环化体系的进样，所述环化腔室完成锁式探针与目标miRNA的环化反应，所述扩增腔室完成目标miRNA与锁式探针环化产物的滚环扩增；所述试纸条腔室内通过荧光侧向流层析试纸检测目标miRNA。


5.一种根据权利要求4所述的miRNA检测微流控芯片的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一在与结合腔室连通的进样通道注入磁珠复苏缓冲液，并注入待测样品与裂解液的混合液；
步骤二从结合腔室进样通道注入洗涤缓冲液，从结合腔室侧面的废液通道吸出废液；
步骤三打开结合腔室下游的第一阀门，从结合腔室进样通道注入洗脱缓冲液，液体进入洗脱腔室后，关闭第一阀门；
步骤四打开洗脱腔室下游的第二阀门，洗脱液进入预环化腔室，关闭第二阀门，向预环化腔室进样通道注入锁式探针、DNA连接酶，打开预环化腔室下游和第一微混合器下游的第三、第四阀门，液体从第一微混合器中经过到达环化腔室，关闭第三、第四阀门；
步骤五在环化腔室内完成环化，从环化腔室进样通道注入DNA聚合酶、dNTPs，打开环化腔室下游和第二微混合器下游的第五、第六阀门，液体从第二微混合器中经过到达扩增腔室，关闭第五、第六阀门；
步骤六完成扩增后，向扩增进样通道中注入上样缓冲液和表面活性剂；
步骤七打开扩增腔室下游的第七阀门，液体从第三微混合器中经过到达试纸条腔室，经层析，目标miRNA扩增产物在结合垫上与荧光微球-核酸探针偶...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕雪飞，何芳兰，邓玉林，姚梦迪，李堃杰，李晓琼，
申请(专利权)人：北京理工大学，
类型：发明
国别省市：北京;11