一种链霉亲和素磁性微球结合游离生物素载量的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种链霉亲和素磁性微球结合游离生物素载量的检测方法，所述方法包括如下步骤：将链霉亲和素磁性纳米微球溶液预处理后分别加入到多组生物素溶液中进行亲和吸附，形成一种较稳定的络合物，用清洗液清洗多组络合产物；加入生物素标记的辣根过氧化物(Biotin‑HRP)吸附；在标记后的产物中加入显色液进行显色反应；测定显色反应后溶液的OD(optical density，光密度)值；根据获取的多组OD值计算得到该种链霉亲和素磁性纳米微球结合游离生物素载量检测的方法，能够更为准确、快捷的检测出链霉亲和素结合游离生物素的载量，为下游链霉亲和素磁性纳米微球的使用量提供依据，该方法操作简便、成本低、灵敏性高。

【技术实现步骤摘要】
一种链霉亲和素磁性微球结合游离生物素载量的检测方法
本专利技术涉及纳米微球检测及分子生物学应用
，具体涉及一种链霉亲和素磁性微球结合游离生物素载量的检测方法。
技术介绍
：生物素又称为维生素H,是水溶性维生素，属于B族维生素，是含硫的一种维生素，也是生物体内羧基转化酶作用的一种辅酶，故又称为辅酶R。链霉亲和素磁性纳米微球由超顺磁性微球与高纯度链霉亲和素共价结合而成。链霉亲和素-生物素(SA-Biotin)系统具有极高的结合亲和力(Kd＝10^-15)，在生物领域具有广泛的应用。链霉亲和素磁性纳米微球可简便快捷、有效地与许多生物素化复合物结合，如：小分子，肽类，蛋白，抗体，糖类，凝集素，寡合核苷酸，DNA/RNA等。链霉亲和素磁性纳米微球的应用越来越广，通常有几种指标可反映微球的载量，如游离生物素载量、生物素化抗体载量、生物素化核酸载量，由于抗体或核酸分子量较大，测试它们的载量时，存在较大空间位阻，导致有一部分链霉亲和素的结合位点不能够被充分占据，所以反映出来的微球载量并不充分。游离生物素由于分子量小，能够充分的与链霉亲和素本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种链霉亲和素磁性微球结合游离生物素载量的检测方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：/n将磁性纳米微球溶液预处理后分别加入到多组生物素溶液中进行络合，得到多组混合液；/n对多组混合液分别清洗并进行标记反应；/n在标记后的产物中加入显色液进行显色反应；/n测定显色反应后溶液的OD值；/n根据获取的多组OD值计算得到生物素结合载量。/n

【技术特征摘要】
1.一种链霉亲和素磁性微球结合游离生物素载量的检测方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
将磁性纳米微球溶液预处理后分别加入到多组生物素溶液中进行络合，得到多组混合液；
对多组混合液分别清洗并进行标记反应；
在标记后的产物中加入显色液进行显色反应；
测定显色反应后溶液的OD值；
根据获取的多组OD值计算得到生物素结合载量。


2.根据权利要求1所述的一种链霉亲和素磁性微球结合游离生物素载量的检测方法，其特征在于：对磁性纳米微球溶液进行预处理的方法包括如下步骤：
对磁性纳米微球溶液进行磁性分离，去除上清；
通过PBST对磁性纳米微球进行重悬，进行至少两次磁性分离后去除上清。


3.根据权利要求1所述的一种链霉亲和素磁性微球结合游离生物素载量的检测方法，其特征在于：将磁性纳米微球溶液预处理后分别加入到多组生物素溶液中进行络合的方法包括如下步骤：
根据生物素的含量分成多组不同浓度的生物素溶液，
在生物素溶液中加入磁性纳米微球溶液得到多组混合液；
将混合液进行恒温震荡络合，震荡时间为30-70min，温度设定为20-40℃，震荡时的转速为800-1200r/min。


4.根据权利要求1所述的一种链霉亲和素磁性微球结合游离生物素载量的检测方法，其特征在于：所述生物素溶液包括D-Biotin(D-生物素)工作液。


5.根据权利要求1所述的一种链霉亲和素磁性微球结合游离生物素载量的检测方法，其特征在于：对多组混合液分别清洗并进行标记反应的方法包括如下步骤：
在混合液中加入PBST，并进行恒温震荡；
震荡后进行磁吸...

【专利技术属性】
技术研发人员：余浩，程思瑶，
申请(专利权)人：南京瑞贝西生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32