一种妇科肿瘤原代细胞的培养方法技术

本发明专利技术公开了一种妇科肿瘤原代细胞的培养方法。本发明专利技术提供了妇科肿瘤原代细胞培养方法及配套试剂，该技术核心是：用温和细胞解离试剂处理妇科肿瘤实体瘤组织，最大程度保证了组织中肿瘤细胞活力；配制特殊无血清培养基，利用悬浮培养体系对妇科肿瘤来源的实体瘤细胞进行体外培养，保证肿瘤细胞正常扩增的同时最大限度的排除正常细胞的干扰。利用本发明专利技术方法得到的妇科肿瘤原代细胞培养物可用于多种细胞水平体外实验、二代测序、构建动物模型、构建细胞系等等。可预见，这种培养方法在妇科肿瘤的研究和临床诊断治疗领域具有广泛的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种妇科肿瘤原代细胞的培养方法
本专利技术涉及生物
，具体涉及一种妇科肿瘤原代细胞的培养方法。
技术介绍
常见的妇科肿瘤有乳腺癌、卵巢癌和子宫内膜癌等。据国家癌症中心2018年数据统计，2014年，我国乳腺癌占女性恶性肿瘤发病率的16.5％，死亡率达7.8％，分别排女性肿瘤的第一位和第五位。当前，我国乳腺癌5年生存率仅73.1％vs90％(美国)，与发达国家还有较大差距。此外，我国卵巢癌发病率占据女性恶性肿瘤的2.5％，过去十年增低加了30％。这些妇科肿瘤对我国女性的生命健康提出了严峻的挑战。尽管世界各国的科研和医疗机构对妇科肿瘤的病因以及发生发展过程的研究都有很大力度的投入，但是人类对这种疾病仍然知之甚少。妇科肿瘤是一类复杂疾病，其发生、发展是一个动态的过程，涉及到诸多信号分子相互作用，形成了一个复杂的分子调控网络，同时还受到外界环境因素的影响。妇科肿瘤的病因和发生发展过程有很强的个体差异性，不能一概而论。因此将妇科肿瘤实体瘤原代细胞培养物作为模型进行个体化精准研究是妇科肿瘤研究领域乃至妇科肿瘤诊断治疗领域的趋势。现有的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种培养妇科肿瘤原代细胞的方法，包括如下步骤：利用妇科肿瘤原代细胞培养基悬浮培养妇科肿瘤原代细胞；/n所述妇科肿瘤原代细胞培养基由抗菌抗真菌剂三抗、HEPES、GlutaMax、人重组蛋白EGF、人重组蛋白bFGF、人重组蛋白HGF、人重组蛋白MSP、皮质醇、N-2Supplement、Y-27632、孕酮、β-雌二醇和Advanced DMEM/F12培养基组成；其中，所述抗菌抗真菌剂三抗中的青霉素的终浓度为100-200U/mL；所述抗菌抗真菌剂三抗中的链霉素的终浓度为100-200μg/mL；所述抗菌抗真菌剂三抗中的两性霉素B的终浓度为250-250ng/mL；所述HEPES的终浓度...

【技术特征摘要】
1.一种培养妇科肿瘤原代细胞的方法，包括如下步骤：利用妇科肿瘤原代细胞培养基悬浮培养妇科肿瘤原代细胞；
所述妇科肿瘤原代细胞培养基由抗菌抗真菌剂三抗、HEPES、GlutaMax、人重组蛋白EGF、人重组蛋白bFGF、人重组蛋白HGF、人重组蛋白MSP、皮质醇、N-2Supplement、Y-27632、孕酮、β-雌二醇和AdvancedDMEM/F12培养基组成；其中，所述抗菌抗真菌剂三抗中的青霉素的终浓度为100-200U/mL；所述抗菌抗真菌剂三抗中的链霉素的终浓度为100-200μg/mL；所述抗菌抗真菌剂三抗中的两性霉素B的终浓度为250-250ng/mL；所述HEPES的终浓度为8-12mM；所述GlutaMax的终浓度为0.8-1.2％(体积百分含量)；所述人重组蛋白EGF的终浓度为10-100ng/mL；所述人重组蛋白bFGF的终浓度为10-50ng/mL；所述人重组蛋白HGF的终浓度为5-25ng/mL；所述人重组蛋白MSP的终浓度为5-25ng/mL；所述皮质醇的终浓度为1-10μg/mL；所述N-2Supplement的终浓度为1％(体积百分含量)；所述Y-27632的终浓度为5-20μM；所述孕酮的终浓度为50-100nM；所述β-雌二醇的终浓度为10-50nM；余量均为AdvancedDMEM/F12培养基。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述妇科肿瘤原代细胞为妇科肿瘤实体瘤原代细胞或妇科肿瘤胸腹水样本原代肿瘤细胞；
进一步地，所述妇科肿瘤实体瘤原代细胞是用样本解离液对妇科肿瘤实体瘤组织进行解离处理后获得的；
所述样本解离液由胶原酶I、胶原酶III、胶原酶IV和PBS组成；其中，所述胶原酶I在所述样本解离液中的终浓度为150-250U/mL；所述胶原酶III在所述样本解离液中的终浓度为250-350U/mL；所述胶原酶IV在所述样本解离液中的终浓度为150-250U/mL；余量均为PBS；
更进一步地，是按照包括如下步骤的方法用所述样本解离液对所述妇科肿瘤实体瘤组织进行解离的：按0.1-0.3mL所述样本解离液每mg组织的用量，将剪碎后的所述妇科肿瘤实体瘤组织用事先37℃预热的所述样本解离液进行处理，在37℃条件下进行样本解离，解离时间15分钟至3小时；
和/或
进一步地，所述妇科肿瘤胸腹水样本原代肿瘤细胞是用细胞分离缓冲液从妇科肿瘤胸腹水样本中分离获得的；
所述细胞分离缓冲液由双抗P/S、肝素钠和PBS组成；其中，所述双抗P/S中的青霉素的终浓度为100-200U/mL；所述双抗P/S中的链霉素的终浓度为100-200μg/mL；所述肝素钠的终浓度为10IU/mL；余量均为PBS；
进一步地，是按照包括如下步骤的方法用所述分离缓冲液对所述妇科肿瘤胸腹水样本进行分离的：用所述细胞分离缓冲液悬浮所述妇科肿瘤胸腹水样本中的细胞，然后通过密度梯度离心获得所述妇科肿瘤胸腹水样本原代肿瘤细胞。


3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述方法中，是按照包括如下步骤的方法用所述妇科肿瘤原代细胞培养基悬浮培养所述妇科肿瘤原代细胞的：使用细胞培养容器M，利用所述妇科肿瘤原代细胞培养基悬浮培养所述妇科肿瘤原代细胞，37℃，5％CO2条件下进行培养，每2-4天更换一次培养基；
所述细胞培养容器M为如下任一：(I)聚苯乙烯材质的细胞培养容器、聚碳酸酯材质的细胞培养容器、聚甲基丙烯酸甲酯材质的细胞培养容器、COC树脂材质的细胞培养容器、环烯烃聚合物材质的细胞培养容器或低吸附表面的细胞培养容器；(II)对(I)中的细胞培养容器进行CYTOP修饰后的细胞培养容器；
进一步地，所述细胞培养容器为细胞培养皿、细胞培养孔板或用于细胞培养的微孔板芯片；
进一步地，所述(II)中，是按照包括如下步骤的方法对所述(I)中的细胞培养容器进行CYTOP修饰的：对所述(I)中的...

【专利技术属性】
技术研发人员：尹申意，张函槊，
申请(专利权)人：北京基石生命科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11