一种循环肿瘤细胞的富集方法及其装置制造方法及图纸

本发明专利技术涉及分子生物学领域，具体涉及一种循环肿瘤细胞的富集方法及其装置，包括：将样本和可与白细胞结合的免疫磁珠混合孵育；向所述样本中加入红细胞裂解液进行孵育；将孵育后的所述样本进行稀释，然后依次进行磁分离、膜过滤；上述方法将阴性富集技术与膜过滤技术结合，综合了阴性富集和膜过滤的优势，在保证CTCs的高回收率同时又能保证CTC的纯度和活力，避免因离心、转移液体等步骤造成CTCs回收率降低和细胞破损活力降低，同时使用膜过滤截留循环肿瘤细胞去除其他杂质和细胞，尽可能的保留循环肿瘤细胞，并且流程简化，能够在2h内完成5ml全血的分离，实现90％以上CTC的捕获和95％以上的白细胞去除。

【技术实现步骤摘要】
一种循环肿瘤细胞的富集方法及其装置
本专利技术涉及分子生物学领域，具体涉及一种循环肿瘤细胞的富集方法及其装置。
技术介绍
1869年ThomasAshworth首先发现了循环肿瘤细胞，伴随着重复性检测技术的发展，循环肿瘤细胞受到越来越多的重视。循环肿瘤细胞(CTCs)，是外周血中各种类型肿瘤细胞的统称，它们从原发性肿瘤组织中脱落并释放到血液中，并在远处发展成新的肿瘤从而实现转移。因此，CTCs被认为是肿瘤能够发生转移的必要前提，进而可以作为肿瘤疾病诊断、预后评估以及个性化单抗药物筛选的核心研究对象，成为转移性肿瘤的“液体活检”。然而，由于CTCs的极度稀有性和高度异质性，将其从全血中分离并检测存在着巨大挑战。因此，开发高效、高回收率和高纯度的CTC分离技术是未来的发展方向。目前，已开发的有效分离和检测技术主要基于特定肿瘤标志物和物理性质，在CTCs捕获的背景下，根据分离是否基于亲和力，将这些方法分为“基于亲和力的策略”和“无标记策略”。基于亲和力的捕获取决于抗原抗体之间的免疫化学相互作用，例如在细胞表面表达的EpCAM和CD45抗原及其本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种循环肿瘤细胞的富集方法，其特征在于，包括：/n将样本和可与白细胞结合的免疫磁珠混合孵育；/n向所述样本中加入红细胞裂解液进行孵育；/n将孵育后的所述样本进行稀释，然后依次进行磁分离、膜过滤。/n

【技术特征摘要】
1.一种循环肿瘤细胞的富集方法，其特征在于，包括：
将样本和可与白细胞结合的免疫磁珠混合孵育；
向所述样本中加入红细胞裂解液进行孵育；
将孵育后的所述样本进行稀释，然后依次进行磁分离、膜过滤。


2.根据权利要求1所述的循环肿瘤细胞的富集方法，其特征在于，
所述样本以1/12ml/min-1/4ml/min的流速依次进行磁分离和膜过滤。


3.根据权利要求1或2所述的循环肿瘤细胞的富集方法，其特征在于，将所述样本稀释至原始体积的5-10倍。


4.根据权利要求1-3任一项所述的循环肿瘤细胞的富集方法，其特征在于，还包括利用缓冲液清洗滤膜的步骤，清洗体积10-15ml。


5.根据权利要求1-4任一项所述的循环肿瘤细胞的富集方法，其特征在于，膜过滤后，还包括对滤膜中富集的循环肿瘤细胞进行染色标记的步骤。


6.根据权利要求5所述的循环肿瘤细胞的富集方法，其特征在于，所述染色标记的步骤中，在染色标记前，向富集循环肿瘤细胞的滤膜中加入封闭液进行封闭，然后清洗并抽干液体。


7.根据权利要求5或6所述的循环肿瘤细胞的富集方法，其特征在于，在染色标记时，向富集循环肿瘤细胞的滤膜中加入细胞染色液，避光孵育，然后清洗并抽干液体；细胞染色液体积与滤膜直径的比例为100-150：13,比例关系为μl/mm。


8.根据权利要求7所述的循环肿瘤细胞的富集方法，其特征在于，染色标记两次，第一次染色标记时使用细胞染色液A，于4℃避光孵育30-40分钟；第二次染色标记时使用细胞染色液B，于4℃避光孵育10分钟；
优选的，所述细胞染色液A中为含有CD45-FITC和EpCAM-PE，CD45-FITC的体积百分比为3.33％～5.00％，EpCAM-PE的体积百分比为0.67％～1.00％；
优选的，所述细胞染色液B中含有1/15ug/ml...

【专利技术属性】
技术研发人员：张威，李豪，李金泽，周连群，张芷齐，李超，李传宇，姚佳，郭振，
申请(专利权)人：中国科学院苏州生物医学工程技术研究所，
类型：发明
国别省市：江苏;32