一种天冬组培快繁新方法技术

本发明专利技术涉及药用植物组织培养领域，具体公开了一种天冬组培快繁新方法,包括以下步骤：外植体的选择：选择天冬雄株幼嫩枝芽，去掉叶片，将其剪成2～3厘米的带芽茎段；外植体的消毒：为75%酒精15～20s，饱和漂白粉溶液10～20min，0.05%升汞溶液5～7min；以及初代诱导培养、继代增殖培养和生根培养等步骤，采用的本发明专利技术的组培方法，获得生根苗，表现为矮壮、有部分叶片展开、根系中部略有膨大，天冬组培苗在驯化过程中成活率高，同时可在驯化期内形成少量块根。

【技术实现步骤摘要】
一种天冬组培快繁新方法
本专利技术涉及药用植物组织培养领域，具体涉及一种天冬组培快繁新方法。
技术介绍
天冬（Asparaguscochinchinensis（Lour.）Merr.）又名天门冬，为百合科天门冬属多年生草本植物，以块根入药，有养阴润燥，清肺生津的功效，常用于治疗肺燥干咳，咽干口渴，肠燥便秘等症状，也可用作滋补品。自2001年，天门冬的种植开始逐渐发展起来，目前主要在广西、云南、贵州等省市开始规模化种植，按目前各区域进行的种植品种分类主要分为广西小天冬以及云南大天冬。《中国药典》2015版对天冬的分种来看天冬药材的植物来源只有天冬一个种，而天门冬属植物在我国有24个种，且形态相似、差异较小、极易混淆，导致许多种植户种植的天冬很大一部分不是《中国药典》规定的品种；另外，天冬为雌雄异株植物，同品种的天冬种植3～4年后雄株产量一般比雌株高20～30%。因此，在天冬的种植上，应选择纯化的优质天冬品种进行繁殖，同时用雄株来进行种植。目前天冬主要采用种子繁殖来获得种苗，不能通过种子性状来区分各种、各品种，在品种方面可以通过母株筛选后获得纯化的优良种子，但周期极长，成本极高；而在选择雄株方面，不论是天冬种子还是天冬小种苗，均不能被识别，因此，种植过程中选择采用种子繁殖的方式选择天冬雄株按目前技术几乎不能达到。天冬还可用分株繁殖的方式来进行繁殖，此种繁殖方式的优点在于缩短种植周期（缩短1年左右），能选择优良植株进行种植，可直接筛选雄株进行种植，但其存在繁殖率低，病虫害积累严重并易导致流行，种质退化等缺点。>综上所述的天冬传统繁殖的优缺点，天冬组培技术的研究就逐步发展起来。而就目前的组培技术看，组培过程中存在增殖系数不高，增殖与分化不能同步进行，且所获得的组培苗生根率低。
技术实现思路
本专利技术的主要目的针对以上天冬传统繁殖技术的缺点以及现有组培技术的不足，提供了一种增殖系数高，增殖与分化同步进行以减少组培程序及成本，生根率高的一种天冬组培新方法。为实现上述目的，本专利技术具体提供了以下技术方案：一种天冬组培快繁新方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）外植体的选择：选择天冬雄株幼嫩枝芽，去掉叶片，将其剪成2～3厘米的带芽茎段；（2）外植体的消毒：为75%酒精15～20s，饱和漂白粉溶液10～20min，0.05%升汞溶液5～7min；（3）初代诱导培养，使用的初代诱导培养基为MS+NAA0.2～0.4mg/L+2,4-D0.05～0.2mg/L+6-BA1.0～3.0mg/L+活性炭1.0g/L+糖30g/L；（4）继代增殖培养，使用的继代增殖培养基为MS+NAA0.05～0.2mg/L+TDZ1.0～3.0mg/L+椰子水100～150ml/L+糖30g/L；（5）生根培养，使用的生根培养基为MS+NAA0.5～1.0mg/L+KT0.05～0.1mg/L+PP3330.4～0.8mg/L+椰子水100～150ml/L+活性炭1.0g/L+糖15g/L。进一步地，所述步骤（1）中外植体选择后，还包括外植体清洁，将剪短的外植体置于肥皂液中清洗10min，后清水冲洗2～3次至无肥皂液残留，加入1～2滴吐温-80，振摇10min，再用流水冲淋60～120min。进一步地，所述步骤（3）中初代诱导培养还包括在温度25±2℃，前15d为暗培养，后35天以光照强度2000～3000lx，单日光照时间10h进行光暗交替培养。进一步地，所述步骤（4）中继代增殖培养还包括在温度25±2℃，光照强度2000～3000lx，单日光照时间10h进行光暗交替培养。根据权利要求1所述的一种天冬组培快繁新方法，其特征在于，进一步地，所述步骤（5）中生根培养还包括以温度25±2℃，光照强度2000～3000lx，单日光照时间12h进行光暗交替培养。进一步地，所述步骤（3）中使用的初代诱导培养基为MS+NAA0.2mg/L+2,4-D0.1mg/L+6-BA1.0mg/L+活性炭1.0g/L+糖30g/L。进一步地，所述步骤（4）使用的继代增殖培养基为MS+NAA0.05mg/L+TDZ3mg/L+椰子水150ml/L+糖30g/L。进一步地，所述步骤（5）使用的生根培养基为MS+NAA0.5mg/L+KT0.05mg/L+PP3330.8mg/L+椰子水150ml/L+活性炭1.0g/L+糖15g/L本专利技术的有益效果在于：（1）本专利技术所述的一种天冬组培快繁技术新方法，增殖过程中培养基添加了0.05～0.2mg/LNAA、1.0～3.0mg/LTDZ以及100～150ml/L椰子水，可在增殖过程中同步形成愈伤以及从生苗，不需单独进行愈伤增殖以及愈伤分化成从生苗，为常规的天冬组培程序中减少了一个程序，从而降低了天冬组培成本；（2）本专利技术所述的一种天冬组培快繁技术新方法，增殖过程中培养基添加了100～150ml/L椰子水，使其在增殖培养过程中的增殖系数从不添加椰子水的7.2升到12.5，且增殖苗色泽亮绿，能发出少许叶片；（3）本专利技术所述的一种天冬组培快繁技术新方法，生根培养过程中，添加了0.4～0.8mg/LPPP333以及100～150ml/L椰子水，与0.5～1.0mg/LNAA+0.2～1.0mg/LKT复配使用，35天生根率可达92%，解决了天冬组培过程中生根难，生根率低的困境；（4）本专利技术所述的一种天冬组培快繁技术新方法，采用的上述生根培养基配方获得生根苗，表现为矮壮、有部分叶片展开、根系中部略有膨大（有形成肉质块根的趋势），天冬组培苗在驯化过程中成活率高，同时可在驯化期内形成少量块根。具体实施方式以下将对本专利技术的具体实施方式进行详细描述。为了避免过多不必要的细节，在以下实施例中对属于公知技术将不进行详细描述。除有定义外，以下实施例中所用的技术和科学术语具有与本专利技术所属领域技术人员普遍理解的相同含义。以下实施例中所用的试验试剂耗材，如无特殊说明，均为常规生化试剂；所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；以下实施例中的％，如无特别说明，均为质量百分含量。一种天冬组培快繁技术新方法：外植体的选择：选择新发出来的天冬雄株幼嫩枝芽，去掉叶片，将其剪成2～3厘米的带芽茎段；然后进行外植体清洁，一般的清洁方法是将外植体置于流水下冲洗，本专利技术将剪短的外植体置于肥皂液中清洗10min，后清水冲洗2～3次至无肥皂液残留，加入1～2滴吐温-80，振摇10min，再用流水冲淋60～120min，采用该方法，外植体清洁度较高，后期污染率低。外植体的消毒：将清洁后的外植体，在超净台内用75%酒精消毒15～20s，无菌水涮洗2～3次，饱和漂白粉溶液10～20min，无菌水涮洗3～4次，0.05%升汞溶液5～7min，无菌水涮洗6～8次，7天污染率为23%左右，且外植体损伤较小，无菌体系的构建是植物组织培养关键因素，对外植体的消毒包括消毒剂和消毒时间的选择（吕校石，2004），本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种天冬组培快繁新方法，其特征在于，包括以下步骤：/n（1）外植体的选择：选择天冬雄株幼嫩枝芽，去掉叶片，将其剪成2～3厘米的带芽茎段；/n（2）外植体的消毒：为75%酒精15～20s，饱和漂白粉溶液10～20min，0.05%升汞溶液5～7min；/n（3）初代诱导培养，使用的初代诱导培养基为MS+NAA0.2～0.4mg/L+2,4-D0.05～0.2mg/L +6-BA 1.0～3.0 mg/L +活性炭1.0 g/L +糖30 g/L；/n（4）继代增殖培养，使用的继代增殖培养基为MS+NAA0.05～0.2mg/L+TDZ1.0～3.0mg/L+椰子水100～150ml/L +糖30 g/L；/n（5）生根培养，使用的生根培养基为MS+NAA0.5～1.0mg/L +KT0.05～0.1 mg/L +PP3330.4～0.8 mg/L +椰子水100～150ml/L +活性炭1.0 g/L +糖15 g/L。/n

【技术特征摘要】
1.一种天冬组培快繁新方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）外植体的选择：选择天冬雄株幼嫩枝芽，去掉叶片，将其剪成2～3厘米的带芽茎段；
（2）外植体的消毒：为75%酒精15～20s，饱和漂白粉溶液10～20min，0.05%升汞溶液5～7min；
（3）初代诱导培养，使用的初代诱导培养基为MS+NAA0.2～0.4mg/L+2,4-D0.05～0.2mg/L+6-BA1.0～3.0mg/L+活性炭1.0g/L+糖30g/L；
（4）继代增殖培养，使用的继代增殖培养基为MS+NAA0.05～0.2mg/L+TDZ1.0～3.0mg/L+椰子水100～150ml/L+糖30g/L；
（5）生根培养，使用的生根培养基为MS+NAA0.5～1.0mg/L+KT0.05～0.1mg/L+PP3330.4～0.8mg/L+椰子水100～150ml/L+活性炭1.0g/L+糖15g/L。


2.根据权利要求1所述的一种天冬组培快繁新方法，其特征在于，所述步骤（1）中外植体选择后，还包括外植体清洁，将剪短的外植体置于肥皂液中清洗10min，后清水冲洗2～3次至无肥皂液残留，加入1～2滴吐温-80，振摇10min，再用流水冲淋60～120min。


3.根据权利要求1所述的一种天冬组培快繁新方法，其特征在于，所述步骤（3）中初代诱导培...

【专利技术属性】
技术研发人员：张金渝，曾祥飞，杨维泽，左应梅，沈孝明，许宗亮，
申请(专利权)人：云南省农业科学院药用植物研究所，云南珍逸德农业科技有限公司，
类型：发明
国别省市：云南;53