一种疫苗组合物及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供一种疫苗组合物及其制备方法和应用，所述疫苗组合物包括乳液佐剂和疫苗抗原，所述乳液佐剂包括离子液体、生物相容性油脂和乳化剂。所述乳液佐剂中通过离子液体替代传统乳液中的水相，利用离子液体对抗原的稳定作用显著提高了疫苗抗原的稳定性和乳液体系自身的均一性和稳定性，使乳液佐剂中无需使用其它稳定剂，避免乳液佐剂中复杂的助剂体系对抗原活性的影响，简化了疫苗组合物的成分和制备工艺。所述疫苗组合物中离子液体的引入抑制了疫苗抗原的裂解或聚集，在保证了抗原的免疫活性的同时，还增强了机体对抗原的免疫应答，对于不同类型的疫苗抗原和免疫途径均具有很好的效果。

【技术实现步骤摘要】
一种疫苗组合物及其制备方法和应用
本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种疫苗组合物及其制备方法和应用。
技术介绍
接种疫苗是目前预防和治疗疾病尤其是传染性疾病的主要手段，抗原是疫苗中最重要的组分，根据疫苗中抗原的类型可将疫苗分为减毒活病毒疫苗、灭活病毒疫苗、裂解疫苗或亚单位疫苗等。随着对疫苗研究的不断深入，灭活疫苗、裂解疫苗、亚单位疫苗等抗原纯度和安全性更高的疫苗正逐渐替代传统减毒活疫苗。但是，安全性提高同时也导致抗原的免疫活性的降低，因此，为了增强疫苗对机体的保护作用，通常会加入佐剂来帮助提高抗原的免疫活性。佐剂在疫苗制剂中能同时对抗原和机体起作用，适当运用佐剂可以调节甚至改变机体免疫系统产生抗原特异性的体液或细胞的免疫应答类型，理想的佐剂应该能满足如下条件：在有效剂量内无毒，无致癌、致突变和致畸形作用，能刺激机体产生强大的免疫应答，具有持久的免疫力，不诱导自身免疫等。目前被证明可以发挥佐剂功能的物质包括铝佐剂、油乳佐剂(乳液佐剂)和生物分子佐剂等。乳液佐剂是目前人用和兽用疫苗中最常见的佐剂类型，乳液佐剂能使抗原在注射部位形成“抗原库”，创造免疫环境，促进细胞因子和趋化因子的产生，增强DC细胞对抗原的摄取，提高机体的体液免疫应答水平。乳液佐剂按照乳液类型分为油包水型(W/O型)、水包油型(O/W型)和水包油包水型(W/O/W型)；其中，已经被公开的W/O型佐剂包括弗氏佐剂、AF03佐剂、MontanideISA720和ISA51佐剂等；O/W型佐剂包括MF59佐剂、AS03佐剂、GLA-SE佐剂、AS02佐剂和W805EC佐剂等；W/O/W型佐剂包括MontanideISA201和ISA206佐剂等。但是，上述乳液佐剂在稳定性、抗原释放以及免疫应答方面仍然存在问题，目前有很多研究工作致力于乳液佐剂的组分和性能研究。CN105148266A公开了一种W/O型疫苗油佐剂制剂及其制备方法，所述制剂为W/O型乳液，水相为含有抗原的溶液，油相包含白油、乳化剂和稳定剂；所述乳化剂选自司盘60、司盘80和司盘83中的1种或至少2种的组合，所述稳定剂选自硬脂酸、硬酯酸铝和单硬酯酸甘油酯中的1种或至少2种的组合。所述W/O型乳液的平均粒径在0.1～8.22μm之间，尺寸均一可控。CN104147599A公开了一种水包油型疫苗佐剂、其制备及应用，所述水包油型纳米乳疫苗佐剂按照质量百分比包括0.1～10％的油相、0.1～10％的乳化剂、0.1～3％的稳定剂、0.1～3％的络合剂以及0.01～10％的免疫增强剂；其中，稳定剂为可溶性的二价无机盐，络合剂为乙二胺四乙酸和/或聚丙烯酸钠，免疫增强剂为具有免疫增强作用的蜂胶、多肽、多糖或黄酮类。所述疫苗佐剂副反应小，尤其适用于猪瘟活疫苗，稳定性高，免疫效果好。CN105688207A公开了一种动物疫苗用复合佐剂及其应用，所述复合佐剂包括注射用大豆油70％、卵磷脂5％、六聚甘油单油酸酸1％、丙二醇1％、聚乙烯吡咯烷酮2％、聚富马酸-癸二酸0.8％、注射用水溶液20％和紫锥菊提取物0.2％，具有良好的免疫效果和安全性。在现有的乳液佐剂中，为了控制乳液的粒径、维持乳液体系的均一稳定，通常会使用两种以上的乳化剂组合，同时还会增加乳化剂的用量，过量和复杂的乳化剂使用仍可能增加体内代谢的负担。而且，乳液佐剂中通常还需要在包含抗原的水相中加入糖、多元醇或无机盐等作为稳定剂来保持抗原的稳定，而稳定剂的添加会增加乳液体系的复杂程度、改变乳液体系的组成，影响乳液佐剂的免疫效果，甚至会影响抗原的免疫活性。因此，开发一种在增强抗原免疫活性的同时还能稳定抗原结构的佐剂及包含其的疫苗，是本领域的研究重点。
技术实现思路
针对现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种疫苗组合物及其制备方法和应用，所述疫苗组合物的乳液佐剂中含有离子液体，具有稳定疫苗抗原和增强机体对抗原的免疫应答的作用，使所述疫苗组合物在不添加其它稳定剂的情况下仍具有优异的稳定性、均一性和免疫活性，简化了疫苗组合物的成分和制备工艺。为达到此专利技术目的，本专利技术采用以下技术方案：第一方面，本专利技术提供一种疫苗组合物，所述疫苗组合物包括乳液佐剂和疫苗抗原，所述乳液佐剂包括离子液体、生物相容性油脂和乳化剂。本专利技术提供的疫苗组合物包括乳液佐剂和疫苗抗原，所述乳液佐剂中使用离子液体替代传统乳液中的水相，使疫苗抗原分散于离子液体中，利用离子液体对蛋白的稳定作用来稳定乳液中疫苗抗原，同时通过离子液体来增强机体对抗原的免疫应答；所述疫苗组合物中疫苗抗原的含量可以根据实际需求设定，所述疫苗组合物可以包含任意比例的疫苗抗原。本专利技术所述乳液佐剂相比于传统乳液具有如下优势：(1)疫苗抗原分散于离子液体中，离子液体对疫苗抗原具有良好的稳定作用，因此本专利技术所述疫苗组合物中无需加入其它稳定剂，从而简化了疫苗组合物中乳液佐剂的成分，避免稳定剂对抗原活性和体系稳定性的影响，同时也简化了疫苗组合物的制备工艺；(2)所述离子液体结合了有机和无机盐的特性，使其在相同的条件下，相比于传统的水相，更有利于和生物相容性油脂形成稳定均一的乳液佐剂，从而可以减少乳化剂的使用量和种类，进一步简化了疫苗组合物的制备工艺；(3)所述离子液体具有可设计性，通过离子液体阴阳离子的选择，可以针对不同的免疫途径设计出更有利于提高免疫活性的离子液体和乳液佐剂。综上，本专利技术提供的疫苗组合物中，包含离子液体的乳液佐剂可以提高所述疫苗组合物和疫苗抗原的稳定性，有效改善机体对抗原的免疫应答，且适用于不同的免疫途径，具有广阔的应用前景。本专利技术中，所述疫苗组合物为乳液体系。优选地，所述乳液体系的类型包括油包离子液体型(IL/O型)、离子液体包油型(O/IL型)、油包离子液体包油型(O/IL/O型)或离子液体包油包离子液体型(IL/O/IL型)。本专利技术中，所述疫苗组合物的乳液类型为油包离子液体型的结构示意图如图1所示，所述疫苗组合物的乳液类型为离子液体包油型的结构示意图如图2所示，所述疫苗组合物的乳液类型为油包离子液体包油型的结构示意图如图3所示，所述疫苗组合物的乳液类型为离子液体包油包离子液体型的结构示意图如图4所示；图1～4中，1为疫苗抗原，2为离子液体，3为生物相容性油脂，4为乳化剂。优选地，所述乳液体系中分散相的粒径为1nm～100μm，例如5nm、10nm、30nm、50nm、60nm、80nm、100nm、200nm、300nm、400nm、500nm、600nm、800nm、1μm、1.5μm、2μm、2.5μm、3μm、5μm、8μm、10μm、20μm、30μm、40μm、50μm、60μm、70μm、80μm、90μm或95μm，以及上述点值之间的具体点值，限于篇幅及出于简明的考虑，本专利技术不再穷尽列举所述范围包括的具体点值，进一步优选为0.05～3μm。优选地，所述乳液体系的类型为油包离子液体型，所述乳液体系中分散相的粒径为0.8～3μm，例如0.9μm、1μm、1.1μm、1.3μm、1.5μm、1.7μm、1.9μ本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种疫苗组合物，其特征在于，所述疫苗组合物包括乳液佐剂和疫苗抗原，所述乳液佐剂包括离子液体、生物相容性油脂和乳化剂。/n

【技术特征摘要】
1.一种疫苗组合物，其特征在于，所述疫苗组合物包括乳液佐剂和疫苗抗原，所述乳液佐剂包括离子液体、生物相容性油脂和乳化剂。


2.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其特征在于，所述疫苗组合物为乳液体系；
优选地，所述乳液体系的类型包括油包离子液体型、离子液体包油型、油包离子液体包油型或离子液体包油包离子液体型；
优选地，所述乳液体系中分散相的粒径为1nm～100μm，进一步优选为0.05～3μm；
优选地，所述乳液体系的类型为油包离子液体型，所述乳液体系中分散相的粒径为0.8～3μm；
优选地，所述乳液体系的类型为离子液体包油型，所述乳液体系中分散相的粒径为50～500nm；
优选地，所述乳液体系的类型为离子液体包油包离子液体型，所述乳液体系中分散相的粒径为0.2～3μm。


3.根据权利要求1或2所述的疫苗组合物，其特征在于，所述乳液佐剂由离子液体溶液、生物相容性油脂和乳化剂组成；
优选地，所述离子液体溶液的浓度为0.001～6mol/L，进一步优选为1～5mol/L；
优选地，所述乳液佐剂中离子液体溶液的体积百分含量为10～90％，进一步优选为40～60％；
优选地，所述疫苗组合物中乳化剂的体积百分含量为0.1～30％；
优选地，所述离子液体溶液的pH值为3.0～9.0；
优选地，所述离子液体溶液的溶剂包括水或缓冲液；
优选地，所述缓冲液包括磷酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、Tris-HCl缓冲液、HEPES缓冲液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液、甘氨酸-盐酸缓冲液、醋酸盐缓冲液、磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液、巴比妥钠-盐酸缓冲液、硼酸-硼砂缓冲液、甘氨酸-氢氧化钠缓冲液、硼砂-氢氧化钠缓冲液或碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液中的任意一种或至少两种的组合；
优选地，所述缓冲液的浓度为1～200mmol/L。


4.根据权利要求1～3任一项所述的疫苗组合物，其特征在于，所述离子液体的阳离子包括含氮有机阳离子和/或含磷有机阳离子；
优选地，所述含氮有机阳离子包括咪唑类离子、吡啶类离子、季铵类离子、吡咯类离子或胆碱类离子中的任意一种或至少两种的组合；
优选地，所述含磷有机阳离子包括季磷类离子；
优选地，所述离子液体的阴离子包括有机阴离子和/或无机阴离子；
优选地，所述有机阴离子包括乳酸根离子、甲酸根离子、C1～C10烷基羧酸根离子、三氟甲磺酰亚胺离子、多库酯酸根离子、烟碱酸离子或香叶酸根离子中的任意一种或至少两种的组合；
优选地，所述无机阴离子包括硫酸根离子、碳酸根离子、碳酸氢根离子、卤素离子、磷酸氢根离子或磷酸二氢根离子中的任意一种或至少两种的组合。


5.根据权利要求1～4任一项所述的疫苗组合物，其特征在于，所述生物相容性油脂包括肉豆蔻酸异丙酯、生育酚、生育酚类似物、维生素E、角鲨烯、大豆油、花生油、油酸乙酯、油酸、亚油酸乙酯、月桂酸异丙酯、丁酸乙酯、乳酸乙酯、辛酸甘油三酯、杏仁油、薏仁油、月见草油、芝麻油、棉籽油、蓖麻油、低芥酸菜子油、肉桂酸甘油酯、棕榈酸甘油酯、鲸蜡醇十六酸酯或葵花籽油中的任意一种或者至少两种的组合；
优选地，所述生物相容性油脂选自角鲨烯、大豆油、肉豆蔻酸异丙酯或生育酚中的任意一种或者至少两种的组合。


6.根据权利要求1～5任一项所述的疫苗组合物，其特征在于，所述乳化剂包括油溶性乳化剂和/或水溶性乳化剂；
优选地，所述乳化剂包括离子型乳化剂和/或非离子型乳化剂；
优选地，所述离子型乳化剂包括十二烷基苯磺酸钠、硬脂酸、季铵类化合物、卵磷脂、氨基酸型乳化剂、甜菜碱型乳化剂、硫酸化蓖麻油、油酸、月桂酸或三乙醇胺皂中的任意一种或者至少两种的组合；
优选地，所述非离子型乳化剂包括烷基葡萄糖苷、脂肪酸酯、司盘、吐温、蔗糖酯、聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物或脂肪醇中的任意一种或者至少两种的组合。


7.根据权利要求1～6任一项所述的疫苗...

【专利技术属性】
技术研发人员：张松平，苏志国，林旋，杨延丽，
申请(专利权)人：中国科学院过程工程研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11