巯嘌呤纳米粒及其制备方法技术

本发明专利技术公开了巯嘌呤纳米粒及其制备方法。包括：(1)将PLGA溶解在有机溶剂中形成PLGA油相O；(2)将巯嘌呤固体溶解在包含稳定剂的内水相中形成巯嘌呤水溶液W1；(3)将其加入到PLGA油相O中形成W1/O初乳乳液；(4)将W1/O初乳乳液注入到外水相W2中得到W1/O/W2复乳乳液；(5)除去有机溶剂后固化形成纳米粒；(6)洗涤分散后加入冻干保护剂冻干，即得。本发明专利技术以PLGA为载体制备巯嘌呤纳米粒，可以根据PLGA分子量和聚合物的比例控制药物的释放，能有效提高水溶性差的药物的生物利用度，制备方法简单，所制备纳米粒粒径均匀、包封率好、载药量高、口服给药方便，冻干后纳米粒便于儿童分剂量。

【技术实现步骤摘要】
巯嘌呤纳米粒及其制备方法
本专利技术涉及巯嘌呤药物制剂，尤其涉及巯嘌呤/PLGA纳米粒及其制备方法，属于巯嘌呤纳米粒制剂领域。
技术介绍
巯嘌呤(Mercaptopurine，6-MP)属于细胞周期特异性药物，进入体内后，必须在细胞内由磷酸核苷糖转移酶代谢为6-巯基嘌呤核糖核苷酸后方具有活性，其通过干扰腺嘌呤核苷酸和鸟嘌呤核苷酸合成，影响DNA的合成过程而发挥作用。巯嘌呤在临床上是一种重要的抗代谢药物和抗肿瘤药，用于治疗人类白血病和许多其他疾病，例如炎症性肠病，系统性红斑狼疮和类风湿关节炎。然而，该药物具有水溶性差，血浆半衰期短(0.5-1.5h)，生物利用度较低(约16％-50％)以及明显的副作用(包括骨髓和肝脏毒性)等缺点，降低了疗效。为了提高巯嘌呤的生物利用度，增强疗效降低其毒副作用，近年来有学者不断寻找其他更安全有效的给药方式，目前关于巯嘌呤纳米粒的研究主要是利用交联剂将巯嘌呤和聚合物(包括壳聚糖和羧甲基壳聚糖)进行化学耦联制备巯嘌呤的前药纳米粒，还有利用金属载体和磁性材料制备巯嘌呤纳米粒，或者在这些纳米粒上进行叶酸或透明质酸的靶向修饰。但是，上述现有技术还存在如下诸多缺陷：巯嘌呤的前药纳米粒制备过程复杂，常用到有毒的交联剂、表面活性剂和有机溶剂，包封率较低。金属纳米粒和磁性纳米粒需要静脉给药，在临床上很难应用，亟待改进。
技术实现思路
本专利技术的主要目的是克服现有技术存在的缺陷提供一种粒径均匀、包封率好、可口服给药的巯嘌呤纳米粒及其制备方法；本专利技术的上述目的是通过以下技术方案来实现的：本专利技术的目的可以通过以下技术方案来实现：一种巯嘌呤纳米粒的制备方法，包括以下步骤：(1)将聚乳酸-羟基乙酸共聚物(polylacticacid-glycolicacidcopolymer，PLGA)溶解在有机溶剂中形成PLGA油相O；(2)将巯嘌呤固体溶解在包含稳定剂的内水相中形成巯嘌呤水溶液W1；(3)将巯嘌呤水溶液W1加入到PLGA油相O中形成W1/O初乳乳液；(4)将W1/O初乳乳液注入到由水和稳定剂组成的外水相W2中得到W1/O/W2复乳乳液；(5)将W1/O/W2复乳乳液除去有机溶剂后固化形成纳米粒；(6)将纳米粒洗涤、重新分散后加入冻干保护剂冻干，即得。优选的，步骤(1)中优选将聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶解在有机溶剂中通过涡旋溶解形成PLGA油相O；其中，所述的有机溶剂可以是乙酸乙酯或者二氯甲烷；所述的PLGA可以为不同分子量、不同末端基团以及不同的聚合比，具有不同的降解周期的PLGA；其中，PLGA与巯嘌呤的质量比例优选为3～10:1，最优选为6:1。优选的，步骤(2)中将巯嘌呤固体溶解在包含稳定剂的内水相中通过涡旋形成巯嘌呤水溶液W1；所述的内水相可以为氨水，所述内水相中包含的稳定剂优选为PVA，其浓度优选为0.5％～3％，最优选为0.5％；氨水与步骤(1)中有机溶剂体积比优选为1:5～10。本专利技术发现，采用内水相稳定剂浓度为0.5％，以乙酸乙酯为有机溶剂，使PLGA与巯嘌呤质量比例为6:1时，所制备的巯嘌呤纳米粒的粒径相对较小，分散最均匀且载药量和包封率最高。步骤(3)中将巯嘌呤水溶液W1加入到PLGA油相O中磁力搅拌混合后通过在冰浴中超声破碎法形成W1/O初乳乳液；所述的超声破碎功率优选为130W～200W，超声破碎时间优选为2min，超声破碎的开关时间优选为2.0s。步骤(4)中将W1/O初乳乳液注入到由水和稳定剂组成的外水相W2中通过在冰水浴中超声破碎法得到W1/O/W2复乳乳液；所述的外水相中的稳定剂可以为PVA或者帕洛沙姆188，其浓度优选为1～3％，最优选为1％；所述的超声破碎功率优选为300W～500W，超声破碎时间优选为2min，开关时间优选为2.0s。步骤(5)中将W1/O/W2复乳乳液通过搅拌或旋转蒸发除去有机溶剂，复乳乳滴固化形成纳米粒；步骤(6)中通过离心收集所形成的纳米粒用去离子水洗涤重新分散后加入冻干保护剂；其中，所述的冻干保护剂优选为甘露醇。本专利技术以水包油包水复乳法将巯嘌呤包封在PLGA中形成纳米粒制备得到的纳米粒粒径均匀，粒径在100-1000nm之间，包封率高达80.71％，释放性能良好(药物在2h之内的累积释放率超过70％)，这对于巯嘌呤而言，具有增溶效果，对其生物利用度的提高很有意义。另外，本专利技术可以通过选择具有不同降解速度的不同分子量的PLGA制备出释放时长有选择性的微球载药体系，在应用时，可根据实际情况的的需要，选择不同的PLGA种类达到不同时长的释药目的，同时可以通过改变处方的各个参数，筛选出最佳处方以进行药动学研究。本专利技术以PLGA为载体制备的的纳米粒的粒径在100-1000nm之间，口服给药方便，同时PLGA在生物体内可降解，制备方法相对简单，可以根据PLGA分子量和聚合物的比例控制药物的释放，同时包封率高，能提高水溶性差药物的生物利用度，冻干后纳米粒便于儿童分剂量。附图说明图1为实施例1制备得到巯嘌呤/PLGA纳米粒的TEM照片；图2为实施例1制备得到巯嘌呤/PLGA纳米粒的释放曲线；图3为实施例2制备得到巯嘌呤/PLGA纳米粒的释放曲线；图4为实施例3制备得到巯嘌呤/PLGA纳米粒的释放曲线；图5为实施例1制备得到巯嘌呤/PLGA纳米粒在1月龄大鼠中的药动学曲线；图6为实施例1制备得到巯嘌呤/PLGA纳米粒在2月龄大鼠中的药动学曲线；图7为实施例1制备得到巯嘌呤/PLGA纳米粒在4月龄大鼠中的药动学曲线。具体实施方式以下结合具体实施例来进一步描述本专利技术，本专利技术的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本专利技术的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本专利技术的精神和范围下可以对本专利技术的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本专利技术的保护范围内。实施例1巯嘌呤/PLGA纳米粒的制备(1)称取180mgPLGA(RG502H，控制PLGA与巯嘌呤质量比为,6:1)加入3ml的乙酸乙酯里，涡旋溶解形成油相O；(2)再准确称取30mg巯嘌呤和3mgPVA加入氨水中(控制PVA的浓度为0.5％)，涡旋后形成巯嘌呤水溶液W1；(3)然后将巯嘌呤水溶液在磁力搅拌下逐滴加入含PLGA的有机溶剂中，控制中等搅拌速度，搅拌1min-2min后，在冰水浴中以功率为130w超声2min，形成W1/O初乳乳液；(4)将上述W1/O初乳乳液迅速注入到12ml含1％P188的水溶液W2中，通过在冰水浴中以功率400w超声2min，得到W1/O/W2复乳乳液；(5)将上述复乳乳液在40℃旋转蒸发1h，除去乙酸乙酯，使复乳乳滴固化，从而形成纳米粒；(6)将上述形成的纳米粒通过离心收集，用去离子水洗涤3次，重新分散于纯水中，加入冻干保护剂甘露醇，在-80℃本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种巯嘌呤纳米粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)将PLGA溶解在有机溶剂中形成PLGA油相O；/n(2)将巯嘌呤固体溶解在包含稳定剂的内水相中形成巯嘌呤水溶液W1；/n(3)将巯嘌呤水溶液W1加入到PLGA油相O中形成W1/O初乳乳液；/n(4)将W1/O初乳乳液注入到由水和稳定剂组成的外水相W2中得到W1/O/W2复乳乳液；/n(5)将W1/O/W2复乳乳液除去有机溶剂后固化形成纳米粒；/n(6)将纳米粒洗涤、重新分散后加入冻干保护剂冻干，即得。/n

【技术特征摘要】
1.一种巯嘌呤纳米粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将PLGA溶解在有机溶剂中形成PLGA油相O；
(2)将巯嘌呤固体溶解在包含稳定剂的内水相中形成巯嘌呤水溶液W1；
(3)将巯嘌呤水溶液W1加入到PLGA油相O中形成W1/O初乳乳液；
(4)将W1/O初乳乳液注入到由水和稳定剂组成的外水相W2中得到W1/O/W2复乳乳液；
(5)将W1/O/W2复乳乳液除去有机溶剂后固化形成纳米粒；
(6)将纳米粒洗涤、重新分散后加入冻干保护剂冻干，即得。


2.按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中将PLGA溶解在有机溶剂中通过涡旋溶解形成PLGA油相O；其中，PLGA与巯嘌呤的质量比例为3～10:1，优选为6:1。


3.按照权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂是乙酸乙酯或者二氯甲烷。


4.按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中将巯嘌呤固体溶解在包含稳定剂的内水相中通过涡旋形成巯嘌呤水溶液W1；所述的内水相为氨水，所述内水相中包含的稳定剂为PVA，所述PVA的浓度为0.5％～3％，优选为0.5％。


5.按照权利要求4所述的制备方法，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵立波，邹亚茹，梅冬，
申请(专利权)人：首都医科大学附属北京儿童医院，
类型：发明
国别省市：北京;11