一种金莲花汤抗流感病毒有效成分群及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种金莲花汤的抗流感病毒有效成分群及其制备方法。其中包括按照金莲花汤中各药材的配比，将适量组方药材用溶剂回流提取，提取液上样大孔树脂柱，先用蒸馏水洗脱至Molish反应为阴性，然后分别用20％，40％，60％，80％，95％乙醇洗脱，高浓度乙醇洗脱部分浓缩干燥后即为金莲花汤的抗流感病毒有效成分群。通过抗病毒实验证明，该有效成分群具有明显的抗流感病毒活性，可用于医药和食品领域。

【技术实现步骤摘要】
一种金莲花汤抗流感病毒有效成分群及其制备方法
本专利技术涉及医药
，具体地说是一种金莲花汤抗流感病毒有效成分群及其制备方法。
技术介绍
金莲花汤是2003年非典型肺炎(SARS)流行期间采用的防治非典的处方，由金莲花、蒲公英、大青叶、葛根、苏叶按照一定比例组方而成。其中，金莲花性寒、味苦，能清热解毒、消肿利咽。蒲公英性寒、味苦，能清热解毒、消肿散结(谢沈阳等.天然产物研究与开发，2012，24：141-151；施亚琴等.中国医院药学杂志，2013，33(9)：677-680)；大青叶性寒、味苦，能清热解毒、凉血消斑(阮金兰等.中国中药杂志，2005，30(19)：1525-1526；武彦文等.中草药，2006，37(5)：793-796)；葛根性凉、味甘辛，能升阳透疹、解热生津(秦红英等.食品科学，2015，35(14)：102-105；赵茜等.广西植物，2014，34(6)：865-868)；苏叶性温、味偏辛，能解表散寒、理气和营(李国辉等.中国中药杂志，2010，35(23)：3156-3159；尹丽红等.黑龙江医药，2010，03(23)：371-373)。全方具有清热解毒、散风透邪的功效，可用于风温病的治疗。流行性感冒是由流感病毒引起的常见上呼吸道感染疾病，也属于中医风温病的范畴。我们已通过实验研究证明，金莲花汤具有明显的抗流感病毒活性，且该处方组方合理(王腾宇等.中国现代中药，2020，22(2)：202-206)。目前，关于金莲花汤的有效成分及其精制工艺的研究未见报道。为了进一步对金莲花汤的抗流感病毒有效成分进行富集和精制，以便开发成治疗流感的现代中药，本专利技术对金莲花汤的抗流感病毒有效成分群的制备工艺进行了研究。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种源于金莲花汤的抗流感病毒有效成分群及其制备方法。其特征为：按照金莲花汤中各药材的配比，将适量组方药材用乙醇回流提取，提取液上样大孔树脂柱，先用蒸馏水洗脱至Molish反应为阴性，然后分别用20％，40％，60％，80％，95％乙醇洗脱，高浓度乙醇洗脱部分，即60％、80％、95％乙醇洗脱部分浓缩干燥后即为金莲花汤的抗流感病毒有效成分群。本专利技术采用的乙醇回流提取法得到的金莲花汤的总提取物的抗流感病毒活性明显高于水提取法所得总提取物，乙醇提取物大孔树脂柱色谱的高浓度乙醇洗脱部分，即60％、80％、95％乙醇洗脱部分的抗流感病毒活性明显高于总提取物和低浓度乙醇洗脱部分，即20％、40％乙醇洗脱部分。本专利技术制备工艺简单，得率高，所得金莲花汤的抗流感病毒有效成分群的抗流感病毒作用优于原方，可作为金莲花汤的有效成分，用于进一步的药物开发。本专利技术采用10～20倍量的70％～95％乙醇对金莲花汤进行回流提取，提取液上样大孔树脂柱，先用蒸馏水洗脱至Molish反应为阴性，然后依次用20％，40％，60％，80％，95％乙醇洗脱，收集各部分洗脱液，减压浓缩并冷冻干燥。经抗流感病毒活性实验证明，高浓度乙醇即60％、80％、95％乙醇洗脱部分及其混合物的活性明显高于低浓度乙醇洗脱部分即20％、40％乙醇洗脱部分和总提取物，因此高浓度乙醇洗脱部分，即60％、80％、95％乙醇洗脱部分即为金莲花汤的抗流感病毒有效成分群。本专利技术优选采用18倍量的80％乙醇对金莲花汤进行回流提取两次，每次1h，合并提取液。提取液浓缩至0.5g生药/mL，上样D101大孔树脂柱，先用蒸馏水洗脱至MoLish反应为阴性，然后依次用20％，40％，60％，80％，95％乙醇洗脱，收集各部分洗脱液，减压浓缩并冷冻干燥，高浓度乙醇洗脱物，即60％、80％、95％乙醇洗脱物即为金莲花汤的抗流感病毒有效成分群。附图说明图1为金莲花汤水提物和80％乙醇提取物的抗流感病毒有效率水提物指金莲花汤的水提物；醇提取物指金莲花汤的80％乙醇提取物。纵坐标表示抗流感病毒有效率。图2为金莲花汤80％乙醇提取物大孔树脂柱色谱各洗脱部分的抗流感病毒有效率横坐标中，20％，40％，60％，80％，95％分别表示20％，40％，60％，80％，95％乙醇洗脱部分；20％+40％表示20％和40％洗脱部分的混合物，60％+80％+95％表示60％，80％，95％洗脱部分的混合物。纵坐标表示抗流感病毒有效率。具体实施方式下面结合具体实施例来进一步描述本专利技术，本专利技术的优点和特点将会伴随着描述而更为清楚。但是应该理解所述实施例仅是范例性的，不对本专利技术的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本专利技术的精神和范围的条件下，可以对本专利技术技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改或替换均落入本专利技术的保护范围。实施例1.金莲花汤水提物和醇提物的制备按照金莲花汤中各药材的配比取适量组方药材混合，然后分别加18倍量的蒸馏水和80％乙醇回流提取两次，每次1h，合并提取液，分别得金莲花汤水提物和醇提物。2.金莲花汤醇提物大孔树脂柱各洗脱部分的制备按照金莲花汤中各药材的配比取适量组方药材，加18倍量的80％乙醇回流提取两次，每次1h，合并提取液，浓缩至0.5g生药/mL。上样D101大孔树脂柱，先用蒸馏水洗脱至Molish反应为阴性，然后依次用20％，40％，60％，80％，95％乙醇洗脱，收集各部分洗脱液，减压浓缩并冷冻干燥成干膏，即得各部分洗脱物。3.抗病毒活性测试(1)各样品的细胞毒性检测取MDCK细胞，用完全培养基制成浓度为1.0×105/mL的细胞悬液，接种到96孔板中，每孔100μL，于37℃，5％CO2培养箱中培养约24h至细胞在96孔板底部长成单层。弃去细胞培养基，分别依次加入100μL上述各个稀释度的样品，空白对照组加等量的细胞维持液，空白对照设置8个平行孔，其余每组设4个平行孔。在37℃，5％CO2培养箱中培养72h，弃去含药培养基，PBS清洗两遍，每孔加入0.5mg/mL的MTT溶液100μL，混匀。继续在相同条件下培养4h，弃去上清液，每孔加入DMSO150μL，震荡10min，使96孔板底部结晶充分溶解。用酶标仪检测每孔的吸光度(A)值，检测波长为490nm。根据测得的A值计算细胞存活率。细胞存活率％＝实验组吸光度值(A)/细胞对照组吸光度值(A)×100％。利用SAS9.30进行数据处理和统计学分析。根据测定结果确定每种样品的最大无毒浓度，并据此设置抗病毒实验用浓度。(2)体外抗病毒有效率测定将剂量为100TCID50的流感病毒(A/FM/1/47)接种于已长成单层的MDCK细胞的96孔培养板上，在37℃，5％CO2恒温恒湿培养箱内吸附2h。弃去病毒液，加入按照最大无毒浓度稀释得到的各样品溶液，继续在37℃，5％CO2恒温恒湿培养箱内培养72h。同时设置阳性药组(利巴韦林)，正常细胞对照组(阴性对照)、病毒对照组(空白对照)，每组8个平行孔。连续观察3d，观察CPE。弃去含药培养基，每孔加入0.5mg/mL的MTT溶液100μL，混匀。继续在相同条件下培养本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种金莲花汤的有效成分群及其在医药和食品领域中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.一种金莲花汤的有效成分群及其在医药和食品领域中的应用。


2.根据权利要求1所述的金莲花汤有效成分群及其应用，其中之应用领域涉及制药、食品和保健品领域。


3.根据权利要求1和2所述的金莲花汤有效成分群及其应用，其中之应用是指在生产抗病毒药物和健品中的应用。


4.根据权利要求1和2所述的金莲花汤有效成分群及其应用，其中之应用是指在生产抗流感病毒药物和健品中的应用。


5.一种金莲花汤的有效成分群的制备方法，包括以下步骤：按照金莲花汤中各药材的配比，将适量组方药材用溶剂回流提取，提取液上样大孔树脂柱，先用蒸馏水洗脱至Molish反应为阴性，然后分别用20％，40％，60％，80％，95％乙醇洗脱，高浓度乙醇洗脱部分浓缩干燥后即为金莲花汤的抗流感病毒有效成分群。


6.根据权利要求5所述的制备方法，其中提取溶剂为水或乙醇。

【专利技术属性】
技术研发人员：王如峰，王腾宇，赓迪，庞月笙，
申请(专利权)人：北京中医药大学，
类型：发明
国别省市：北京;11