用于从生物样品、优选加工过的植物籽粕分离膜结合的蛋白质的方法和手段技术

本发明专利技术提供了从生物样品中，例如在来自粗的或加工过的植物材料、优选脱脂的植物籽粕例如卡诺拉油菜籽粕的样品中有效分离膜结合蛋白的方法和手段。所述生物样品可以被高度加工，例如通过施加高温、压力或化学处理，并且可以来自种子基质以及其他典型的植物组织，例如种子、谷粒、叶片、根或花粉。本发明专利技术包括提供新的提取缓冲液(MEB)以及其在本发明专利技术方法中的应用，其中所述缓冲液具有10‑12.5的强碱性pH并且包含0.5％‑5％水平的可溶浓度的去污剂。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于从生物样品、优选加工过的植物籽粕分离膜结合的蛋白质的方法和手段为了从生物组织和样品中成功和有效地提取难处理的蛋白质，有必要确定最佳的裂解缓冲液成分和裂解条件。提取蛋白质遇到的最具挑战性的组织类型是谷粒粕(meal)，例如从油料种子植物例如芸苔属物种(Brassicasp.)如卡诺拉油菜的高度加工过的种子基质得到的粕。粕是油提取的副产品，可含有大量蛋白质。通过施加高温(在80-120℃下蒸煮和烘烤)、压力(加压)和苛刻的化学(己烷溶剂萃取)条件，对粕进行高度加工。粕中所含的与膜结合的蛋白质会变性，并且使用常规的提取缓冲液非常难以提取。定量免疫测定法用于产生对农业生物技术产品的解除管制至关重要的数据。经过验证的免疫测定方法最重要的方面之一是从给定基质中提取分析物。由于其高度加工过的特性，从卡诺拉油菜籽粕(canolameal)中获得蛋白质的高提取性非常具有挑战性。此外，膜结合蛋白质的难处理性质对从卡诺拉油菜籽粕中提取的困难性具有复合作用。因此，开发一种可以从生物样品例如植物粕(plantmeal)中有效提取膜蛋白的方法非常重要。已经发现，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于从生物材料中提取膜结合蛋白质的方法，包括：在pH 10至12.5的缓冲剂中温育样品，所述缓冲剂包含0.5％至5％的可溶浓度的去污剂(膜提取缓冲液(MEB))。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171222 EP 17210241.01.用于从生物材料中提取膜结合蛋白质的方法，包括：在pH10至12.5的缓冲剂中温育样品，所述缓冲剂包含0.5％至5％的可溶浓度的去污剂(膜提取缓冲液(MEB))。


2.根据权利要求1所述的方法，其应用pH11.5至12.5的所述裂解缓冲液MEB。


3.根据权利要求1所述的方法，其将样品在温育温度35℃至55℃下温育。


4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，包括应用含有1.5-5％的可溶浓度的离子型去污剂的裂解缓冲液MEB。


5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，包括应用含有1.5-3％LDS的裂解缓冲液MEB。


6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其中所述裂解缓冲液MEB包含还原剂。


7.根据权利要求6所述的方法，其中所述裂解缓冲液MEB包含DTT、BME或TCEP-HCL。


8.根据权利要求6或7所述的方法，其中所述裂解缓冲液MEB包含相当于20mM-70mMTCEP的一种或多种还原剂。


9.根据权利要求1-8任一项所述的方法，其中所述MEB缓冲液包含20mM-70mMTCEP或30-120nMDTT或1-5％BME。


10.根据权利要求1-9任一项所述的方法，包含pH依赖性缓冲剂或盐溶液。


11.根据权利要求10所述的方法，其中所述缓冲剂是Tris-CL、HEPES、CAPS和/或磷酸钠缓冲液NaH2PO4/Na2HPO4。


12.根据权利要求10或11所述的方法，其中所述缓冲剂是：
i.5-300mMTris-CL，
ii.20-40mMHEPES，
iii.10-40mM磷酸钠(NaH2PO4/Na2HPO4)，和/或
iv.50mM-500mMCAPS。


13.根据权利要求1-12任一项所述的方法，包含粘度剂。


14.根据权利要求1-13任一项所述的方法，包含粘度剂，其中所述粘度剂为10％-25％的甘油。


15.根据权利要求1-14任一项所述的方法，包括：pH10至12.5的缓冲剂，其中该缓冲剂为100mM至150mMTris-Cl，优选为120mM，LDS含量为1.5％至2.5％，还原剂为20至70mMTCEP，优选为50mM，以及10％至20％的甘油。


16.根据权利要求1-15任一项所述的方法，其中在所述温育温度下的温育时间为10min至180min。


17.根据权利要求1-16任一项所述的方法，其中提取是以多...

【专利技术属性】
技术研发人员：M·K·威瑞克，M·夏，J·斯莱萨列娃，
申请(专利权)人：巴斯夫植物科学有限公司，
类型：发明
国别省市：德国;DE