一种多菌复合增效液体灭蚊菌剂及其制备方法与应用技术

本发明专利技术提供一种多菌复合增效液体灭蚊菌剂及其制备方法与应用。所述液体灭蚊菌剂包括可侵染杀灭蚊子的五种好氧菌组成的A菌液和可抑制菌群拮抗的四种厌氧菌组成的B菌液；A菌液由苏云金芽孢杆菌以色列亚种，灭蚊链霉菌，球孢白僵菌，金龟子绿僵菌和玫烟色棒束孢组成；B菌液由保加利亚乳杆菌，嗜酸乳杆菌，植物乳杆菌和德氏乳杆菌组成；是通过将分别发酵培养的五种液体好氧菌A菌液，缓慢注入到，先分别再混合发酵培养的四种液体厌氧菌B菌液中，静置均质后得到的。作为灭蚊菌剂安全无害可直接大规模喷洒灭蚊；其弱酸气味利于诱蚊，可配制成多种诱杀灭蚊菌剂广泛应用；特别是多菌复合互不拮抗的方法，使灭蚊菌活力持久专长得以增效发挥。

【技术实现步骤摘要】
一种多菌复合增效液体灭蚊菌剂及其制备方法与应用
本专利技术属于微生物防治蚊媒害虫领域，具体涉及一种多菌复合增效液体灭蚊菌剂及其制备方法与应用。
技术介绍
以蚊子为媒介传播给人的疾病多达80余种，而且其中大都是致死致残率很高的烈性疾病，如疟疾、霍乱、登革热，丝虫病、黄热病、黑斑纹病、乙型脑炎等等。千百年来人类与蚊子的战斗不仅没有获得决定性的胜利，反而愈演愈烈。时至今日全世界还有约一半的人口，面临由蚊子作为媒介传播的烈性疾病的威胁，每年被蚊子夺走的生命高达83万人之多。2019年世卫组织公布，仅由蚊媒传染的疟疾每年新发病例就超过2亿人，平均每一到两分钟就有一名儿童死于疟疾。全球有32亿人面临罹患虐疾的风险。蚊媒如此肆虐，是对当代科技和人类文明进步的严重挑战。用什么办法既能大面积大规模彻底灭杀蚊媒，消除这些重大疾病的传染源，又不对生态环境造成破坏，不影响人类的生存与健康，这是摆在人们面前迫切需要解决的重大课题。由于蚊媒对化学杀虫剂抗性的增加，化学杀虫剂在制造和使用过程中对生态环境的污染和破坏，以及化学杀虫剂对非标把生物的危害，使化学杀虫剂大规模灭蚊受到了极大限制。蚊香和驱蚊剂含有拟除虫菊脂类毒素，可导致人吸入性危害，伤及人的健康，不便于对蚊虫的持久性大量灭杀。灭蚊灯中的长波紫外线，可穿透人皮肤的真皮层，长时间使用会加速皮肤的老化，还会引起人的眼部损伤；经灭蚊灯电击或风干的蚊虫碎片以及病菌扩散到空气中，对人体不利。当前的微生物液体灭蚊制剂中，单一菌制剂寄主有限，浸染灭杀蚊媒的种类不全；多菌混合的制剂多菌混合而发生菌菌拮抗，有效期短，效果不佳；个别经过基因改造或嫁接的菌种，其变异的菌种对人类健康及生态环境的影响在加以科学验证前也难以大面积推广。而且以上这些液体制剂都存在因好氧菌互相争夺氧气养分，互相拮抗，饱和态畸形增长而出现的有效期短，性能不稳定，效果不佳的共性问题。常规的微生物好氧菌（包括细菌、真菌、放线菌）剂在液态条件下，菌株数分钟至数小时就繁殖一世代，由于不断繁殖形成饱和性增长，菌株在争夺养分氧气的竞争过程中发生拮抗，很快就会畸形死亡，菌剂就会变黑发臭，这种菌剂在稀释后，多数菌群已经变得畸形乏力，无法发挥其有效功能，在常温条件下有效期很短，一般细菌只有数月，真菌只有数天。若采用好氧菌多菌株混配，在氧气、养分的争夺消耗过程中，多种好氧菌相互拮抗更加激烈，菌剂腐败衰亡地更快。
技术实现思路
针对现有技术中的不足之处，本专利技术的目的是提供一种多菌复合增效液体灭蚊菌剂及其制备方法与应用。该专利技术选用灭蚊各有专长的五种好氧菌组合，目的是解决菌种单一效果不佳的问题；该专利技术还选用可抑制好氧菌畸形增长的四种厌氧菌，与五种好氧菌复合，目的是解决液体菌剂中好氧菌互相拮抗有效期短容易腐败失效的问题；该专利技术还设计与多种诱蚊剂结合使用及单独应用的方法，目的是为蚊媒的多渠道大规模灭杀提供了实际应用的可能。为了达到上述目的，本专利技术技术方案如下：一种多菌复合增效液体灭蚊菌剂，包括杀灭蚊子的五种好氧菌组成的A菌液和抑制拮抗的四种厌氧菌组成的B菌液；A菌液由以下五种好氧菌组成：苏云金芽孢杆菌以色列亚种，灭蚊链霉菌，球孢白僵菌，金龟子绿僵菌，玫烟色棒束孢；B菌液由以下四种厌氧菌组成：保加利亚乳杆菌，嗜酸乳杆菌，植物乳杆菌，德氏乳杆菌。上述五种好氧菌菌种的安全级别均为四级，对人畜禽和生态环境安全无伤害，对蚊媒及幼虫各菌有不同的侵染杀灭作用：1.菌种名称：苏云金芽孢杆菌以色列亚种，拉丁学名：Bacillusthuringiensisisraelensis，Bti，细菌，好氧菌；菌种保藏于中国普通微生物菌种保藏中心，编号：CGMCC1.1754，功能：对38种蚊子及库蚊幼虫有很强的毒杀作用；2.菌种名称：灭蚊链霉菌，拉丁学名：Streptomycesculiciclicus，细菌，放线菌，好氧菌；菌种保藏于中国农业微生物菌保中心，编号：ACCC41132，功能：对按蚊、库蚊、阿蚊幼虫有显著毒杀效果；3.菌种名称：球孢白僵菌，拉丁学名：Beauveriabassiana，真菌，好氧菌；菌种保藏于中国普通微生物菌种保藏中心，编号：ACCC30110，功能：对库蚊、伊蚊及幼虫具有良好的杀灭作用；4.菌种名称：金龟子绿僵菌，拉丁学名：Metarhiziumanisopliae，真菌，好氧菌；菌种保藏于中国农业微生物菌种保藏中心，编号：ACCC30798，功能：对伊蚊及幼虫具有良好的灭杀作用；5.菌种名称：玫烟色棒束孢，拉丁学名：Fumosoroseawize，真菌，好氧菌；菌种保藏于中国普通微生物菌种保藏中心，编号：ACCC37775，功能：可侵染蚊子等同翅目昆虫。上述四种厌氧菌菌种的安全级别均为四级，对人畜禽和生态环境安全无伤害，可抑制好氧菌饱和性增长；1.菌种名称：保加利亚乳杆菌，拉丁学名：Lactobacillusbulgaricus，细菌，厌氧菌；菌种保藏于中国农业微生物菌种保藏中心，编号：ACCC19940；2.菌种名称：嗜酸乳杆菌，拉丁学名：Lactobacillusacidophilus，细菌，厌氧菌；菌种保藏与中国普通微生物菌种保藏中心，编号：ATCC4357；3.菌种名称：植物乳杆菌，拉丁学名：Lactobacillusplantarum，细菌，厌氧菌；菌种保藏与中国农业微生物菌种保藏中心，编号：ACCC1101；4.菌种名称：德氏乳杆菌，拉丁学名：Lactobacillusdelbrueckiisubsp，细菌，厌氧菌；菌种保藏与中国普通微生物菌种保藏中心，编号：ACCC05468。一种多菌复合增效液体灭蚊菌剂的制备方法，包括以下步骤：第一步：将A菌液中的五种好氧菌，分别发酵培养成五种液体好氧菌液，（1）分别配制苏云金芽孢杆菌、灭蚊链霉菌、球孢白僵菌、金龟子绿僵菌、玫烟色棒束孢五种液体培养基，向五种培养基中接种各自对应的菌种；然后在25-37℃、120-140r/min、好氧发酵的条件下进行菌种的一级扩大培养，得到五种一级扩大培养的好氧菌液；（2）再分别取五种一级发酵的好氧菌液，向五种所述液体好氧菌培养基中接种各自对应的菌液，在同上的条件下，进行菌剂的二级扩大培养，得到五种二级扩大好氧发酵的菌液，其中每种一级菌液的接种量为其培养基质量的2-10%；（3）再分别取五种二级发酵的好氧菌液，向五种所述液体好氧菌培养基中接种各自对应的菌液，在同上的条件下，进行菌剂的三级扩大培养，得到五种三级扩大好氧发酵的菌液，其中每一种二级菌液的接种量为其培养基质量的2-10%；（4）五种经三级培养的菌液，按各10-30%的比例混合并静置均质24小时后，即做为A菌液，五种灭蚊好氧菌液所占的实际比例，可在具体实施中依据蚊子的种类和灭蚊菌的专长适当调整；第二步：将B菌液中的四种厌氧菌剂，发酵培养成四种液体混合的厌氧菌本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种多菌复合增效液体灭蚊菌剂，其特征在于：包括杀灭蚊子的五种好氧菌组成的A菌液和抑制拮抗的四种厌氧菌组成的B菌液；按A菌液50-70%、B菌液50-30%配比；/nA菌液由以下五种好氧菌组成：/n苏云金芽孢杆菌以色列亚种，/n灭蚊链霉菌，/n球孢白僵菌，/n金龟子绿僵菌，/n玫烟色棒束孢；/nB菌液由以下四种厌氧菌组成：/n保加利亚乳杆菌，/n嗜酸乳杆菌，/n植物乳杆菌，/n德氏乳杆菌。/n

【技术特征摘要】
1.一种多菌复合增效液体灭蚊菌剂，其特征在于：包括杀灭蚊子的五种好氧菌组成的A菌液和抑制拮抗的四种厌氧菌组成的B菌液；按A菌液50-70%、B菌液50-30%配比；
A菌液由以下五种好氧菌组成：
苏云金芽孢杆菌以色列亚种，
灭蚊链霉菌，
球孢白僵菌，
金龟子绿僵菌，
玫烟色棒束孢；
B菌液由以下四种厌氧菌组成：
保加利亚乳杆菌，
嗜酸乳杆菌，
植物乳杆菌，
德氏乳杆菌。


2.如权利要求1所述的一种多菌复合增效液体灭蚊菌剂的制备方法，其特征在于：所述A菌液中五种好氧菌各占10-30%；所述B菌液中四种厌氧菌各占25%。


3.如权利要求1或2任一所述一种多菌复合增效液体灭蚊菌剂的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
第一步：将A菌液中的五种好氧菌，分别发酵培养成五种液体好氧菌液，
（1）分别配制苏云金芽孢杆菌、灭蚊链霉菌、球孢白僵菌、金龟子绿僵菌、玫烟色棒束孢五种液体培养基，向五种培养基中接种各自对应的菌种；然后在25-37℃、120-140r/min、好氧发酵的条件下进行菌种的一级扩大培养，得到五种一级扩大培养的好氧菌液；
（2）再分别取五种一级发酵的好氧菌液，向五种所述液体好氧菌培养基中接种各自对应的菌液，在同上的条件下，进行菌剂的二级扩大培养，得到五种二级扩大好氧发酵的菌液，其中每种一级菌液的接种量为其培养基质量的2-10%；
（3）再分别取五种二级发酵的好氧菌液，向五种所述液体好氧菌培养基中接种各自对应的菌液，在同上的条件下，进行菌剂的三级扩大培养，得到五种三级扩大好氧发酵的菌液，其中每一种二级菌液的接种量为其培养基质量的2-10%；
（4）五种经三级培养的菌液，按各10-30%的比例混合并静置均质24小时后，即做为A菌液；
第二步：将B菌液中的四种厌氧菌剂，发酵培养成四种液体混合的厌氧菌液，
（1）分别配制保加利亚乳杆菌，嗜酸乳杆菌，植物乳杆菌以及德氏乳杆菌的液体厌氧菌培养基，再分别向四种液体厌氧菌培养基中接种各自对应的菌种，在25-37℃条件下静置密闭发酵10-30天，进行菌种的一级扩大培养，得到四种一级厌氧菌液；
（2）把四种一级培养的厌氧菌液按各25%的比例混合在一起，密闭、静置24小时，即为一级发酵的厌氧混合菌液；
（3）配制混合发酵的液体厌氧菌培养基，将经一级发酵的厌氧混合菌液，接种到混合发酵的液体厌氧菌培养基中，接种量为培养基质量的5-10%，在30-37℃条件下静置密闭厌氧发酵10-30天，进行菌种的二级扩大培养，得到混合发酵的二级厌氧菌液；
（4）重复步骤（3），得到混合发酵的三级厌氧菌液，测定pH值小于等于5后，得到混合B菌液；
第三步：配比：按A菌液50-70%、B菌液50-30%的配比，把五种A菌液缓慢注入到混合B菌液中，搅拌均匀，静置24小时均质稳定后，得到多菌复合增效液体灭蚊菌剂。


4.如权利要求3所述多菌复合增效液体灭蚊菌剂的制备方法，其特征在于：
（一）组成A菌液的五个菌液的发酵培养基配方如下：
（a1）苏云金芽孢杆菌培养基配方：蔗糖20g，蛋白胨5g，酵母膏5g，磷酸氢二钾0.3g，磷酸氢二钠1g，硫酸镁1g，硫酸亚铁0.02g，氯化钙0.02g，无菌水补足1L；培养条件：初始pH值7.2，25-37℃，120-140r/min，不封口好氧震荡发酵60-80小时；
（a2）灭蚊链霉菌培养基配方：可溶性淀粉20g，硝酸钾1g，磷酸氢二钾0.5g，硫酸镁0.5g，氯化钠0.5g，硫酸亚铁0.01g，无菌水补足1L；培养条件：初始pH值7.0，遮光，25-37℃，120-140r/min，不封口好氧震荡发酵72-96小时；
（a3）球孢白僵菌培养基配方：蔗糖50g，磷酸氢二钾1g，1%玉米浸提液补足1L；培养条件：初始pH值7.0，遮光，25-37℃，120-140r/min，不封口好氧震荡发酵72-96小时；其中，1%玉米浸提液采用鲜玉米粒10g加水1L，煮沸30分钟，滤除渣，无菌水补足1L；
（a4）金龟子绿僵...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘文，韩莉华，刘海龙，
申请(专利权)人：刘文，
类型：发明
国别省市：广西;45