【技术实现步骤摘要】
稀有鮈鲫载脂蛋白ApoA1重组蛋白和抗兔多克隆抗体的制备方法
本专利技术属于分子生物学基因工程领域，具体涉及稀有鮈鲫(Gobiocyprisrarus)载脂蛋白ApoA1基因的核苷酸序列和所编码的氨基酸序列、以及密码子优化后的核苷酸序列，尤其涉及GrApoA1蛋白的重组表达制备方法和抗兔多克隆抗体的制备。通过重组表达GrApoA1蛋白可以进一步在体外分析该蛋白的结构和功能，另外多克隆抗体的制备能够为进一步检测鱼体内ApoA1的含量奠定基础。
技术介绍
ApoAl是高密度脂蛋白(HDL)的主要蛋白质组分，在脊椎动物广泛表达，约占HDL中蛋白总量的70％，其主要合成场所位于肝脏和小肠，具有抗炎、抗氧化及抗血栓、内皮保护的作用。ApoA1可通过高密度脂蛋白受体介导巨噬细胞中游离胆固醇的外流，启动胆固醇逆转运过程，在肝外组织清除过多胆固醇并选择性地促进脂质摄取发挥关键作用。在人类与动脉粥样硬化和其他心血管疾病紧密相关。稀有鮈鲫，属鲤科，鮈鲫属，较广泛地分布于我国四川省的成都平原及其西部边缘地区，是我国特有的小型鱼类。稀有鮈鲫...
【技术保护点】
1.一种稀有鮈鲫ApoA1基因，其特征在于，所述基因命名为GrApoA1，其核苷酸序列如SED ID NO：1所示。/n
【技术特征摘要】
1.一种稀有鮈鲫ApoA1基因，其特征在于，所述基因命名为GrApoA1，其核苷酸序列如SEDIDNO：1所示。
2.一种稀有鮈鲫ApoA1基因，其特征在于，所述基因经过密码子优化，其核苷酸序列如SEDIDNO：2所示。
3.一种稀有鮈鲫ApoA1蛋白，其特征在于，其氨基酸序列如SEDIDNO：3所示。
4.一种稀有鮈鲫ApoA1重组表达蛋白的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
将密码子优化后的SEDIDNO：2序列直接合成并连入pET30a表达载体，转化到大肠杆菌BL21感受态细胞，挑选单克隆进行摇菌，IPTG诱导表达，收集菌体进行SDS-PAGE蛋白检测，超声破碎裂解细菌，纯化重组蛋白。
5.根据权利要求4所述的稀有鮈鲫ApoA1重组表达蛋白的制备方法，其特征在于，转化步骤为：向感受态细胞E.coliBL21中加入pET30a-GrApoA1重组质粒，轻轻混匀，在冰浴中静置5min，后置于42℃水浴热激90s，迅速转移至冰浴中。向每个离心管中加入900μL的无菌LB培养基，混匀后置于37℃摇床振荡培养45min，使菌体复苏，然后吸取100μL复苏的菌液涂布在含有卡纳青霉素抗性的LB固体培养基上，37℃培养12-16h。
6.根据权利要求5所述的稀有鮈鲫ApoA1重组表达蛋白的制备方法，其特征在于，诱导表达步骤为：挑选含有重组质粒的大肠杆菌，加入液体培养基，37℃震荡培养直至菌液OD600＝0.4～0.6，加入适量IPTG至终浓度1mM，诱导表达4h后，收集菌体，并用灭菌水重悬菌体，放入-80℃冻存，并反复冻融...
【专利技术属性】
技术研发人员：张莹莹，魏文志，糜凯航，杨辉，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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