【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】组织样品制备系统
本专利技术涉及制备光学分析用生物组织样品，并且更具体地涉及组织透明化方案(tissueclearingprotocols)。背景和相关技术组织样品的化学透明化正日益变成用于检测和重建组织样品(包括完整器官)中结构的关键手段。为了显微分析，一些组织类型薄到足以直接观察。大部分组织(例如，活检样品、厚组织样品、复杂3D组织形成如类器官或类球体、小型成年哺乳动物(如小鼠)的完整器官或完整躯体或胚胎)太厚，以至于不允许光穿过其传播。将组织切成薄切片具有丢失生物医学重要信息的缺点：生物学结构内在地是三维的(3D)。几种显微技术同时可用于(例如共聚焦显微术、双光子显微术和光片显微术)获得组织的3D图像。但是，生物标本天然地对UV-VIS-NIR范围的光学光不透明。通常，这种不透明度的主要来源是吸收和散射。实际上，生物组织样品最终由浸渍于低折射介质(水)中的各种高折射率大分子如脂质和蛋白质构成。在生物分子的高折射率和包含这些分子的胞内水及胞外水的低折射率之间的错配产生多重散射事件，最终导致不透明的样品。光学光子已经在...
【技术保护点】
1.一种制备光学分析用生物组织样品(301)，从而所制备样品的体积和/或形态距原始组织的体积或形态的偏离最小化的方法(100)，所述方法包括：/n-a)用第一固定液(202)固定(102)组织样品；/n-b)在脱脂液(204)中浸渍(104)固定的组织样品，脱脂液包含适应于诱导样品膨胀的离液剂；/n-d)用一种或多种染色液(206)着染(108)组织样品；/n-f)在有机脱水液(210)中使染色的组织样品脱水(112)，脱水液适应于诱导样品收缩；和/n-g)在有机透明化液(212)中浸渍(114)固定的组织样品。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171229 EP 17211233.61.一种制备光学分析用生物组织样品(301)，从而所制备样品的体积和/或形态距原始组织的体积或形态的偏离最小化的方法(100)，所述方法包括：
-a)用第一固定液(202)固定(102)组织样品；
-b)在脱脂液(204)中浸渍(104)固定的组织样品，脱脂液包含适应于诱导样品膨胀的离液剂；
-d)用一种或多种染色液(206)着染(108)组织样品；
-f)在有机脱水液(210)中使染色的组织样品脱水(112)，脱水液适应于诱导样品收缩；和
-g)在有机透明化液(212)中浸渍(114)固定的组织样品。
2.根据权利要求1所述的方法，还包括：
-c)用波长范围的光照射样品，其中所述波长范围包含染料的一个或多个发射波长和/或激发波长，以选择性消除或减少样品在所述波长范围内的自身荧光。
3.根据前述权利要求中任一项所述的方法，还包括：
-e)在进行洗涤和脱水之前，用第二固定液(208)固定(110)染色的组织样品。
4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中如此选择脱脂液的组成，从而有机脱水液诱导的组织收缩事先被脱脂液诱导的膨胀补偿。
5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，
-其中离液剂是适应于引起样品的体积膨胀至少15％的原始样品体积或至少20％的原始样品体积；和/或
-其中如此选择脱脂液的组成，从而脱脂液诱导的膨胀和脱水液引起的收缩的联合效果提供与原始、未处理组织样品的体积偏离小于15％、优选地小于10％、优选地小于5％的透明化组织样品。
6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，离液剂是非离子型离液剂、特别地脲或硫脲、或离子型离液剂胍、特别地以胍盐形式提供的胍。
7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中脱脂液包含以体积计5-30％、优选地10-25％、优选地15-25％、更优选地20-25％的氨基醇、特别地N,N,N',N'-四(2-羟丙基)乙二胺。
8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中脱脂液是基于水的透明化液。
9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中组织在第一固定组合物中的固定、固定的组织样品在脱脂液中的浸渍、染色、脱水、和固定的组织样品在有机透明化液中的浸渍以自动化或半自动化工艺进行，所述工艺不包括灌注步骤。
10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，有机透明化液是苯甲醇和苯甲酸苄酯(BABB)的混合物，所述方法包括：
-制备有机透明化液，所述制备包括如此选择苯甲醇和苯甲酸苄酯的比率，从而有机透明化液的折射率与样品的组织类型的折射率相同或相似。
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【专利技术属性】
技术研发人员：M·多布斯，J·穆勒，T·波辛格，
申请(专利权)人：豪夫迈·罗氏有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH
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