一种高效提取龙脷叶总黄酮的方法技术

本发明专利技术公开了一种高效提取龙脷叶总黄酮的方法，在龙脷叶加入柠檬酸、纤维素酶、果胶酶组成的浸泡，然后取出龙脷叶加入水，再加入D‑异抗坏血酸钠、氯化钠、乳酸链球菌素，打浆，得龙脷叶提取液；向龙脷叶提取液加入发酵菌种、红糖、尿素、硫酸铵、磷酸二氢钾，搅拌均匀，发酵；所述发酵菌种由海洋芽孢杆菌、黑曲霉、产朊假丝酵母组成；将发酵后的龙脷叶提取液加热回流提取，抽滤，减压浓缩，将浓缩提取物经于大孔吸附树脂柱提纯，干燥，即得龙脷叶总黄酮。本方法采用柠檬酸、纤维素酶、果胶酶浸泡使龙脷叶酶解，再用混合菌种发酵后再进行加热回流提取，利于龙脷叶中总黄酮有效成分的浸出，总黄酮的提取量达到2.8g/kg）以上，总黄酮含量达到80%以上。

【技术实现步骤摘要】
一种高效提取龙脷叶总黄酮的方法
本专利技术涉及植物有效成分提取
，具体是一种高效提取龙脷叶总黄酮的方法。
技术介绍
为大戟科植物龙脷叶SauropusspatulifoliusBeille的干燥叶，主要分布于广西、广东、福建等地。龙脷叶为广西特色中药，具有通气道、润肺止咳、滑肠通便等功效，是临床上常用壮药。龙脷叶既可药用，又可食用，华南地区民间常用其煲凉茶以祛痰化湿，也可与瘦猪肉或猪肺同煮，对肺热咳嗽、失音、喉痛、急性支气管炎、上呼吸道炎等症具有一定的保健作用。广西龙脷叶资源丰富，深入研究其药用成分，对龙删叶的药用开发与利用具有重要意义，也有利于促进广西中药民族医药的可持续发展。植物黄酮类化合物是一种天然的抗氧化剂，因其能清除人体内的游离自由基，抑制自由基的产生，可作为天然的食品防腐剂，广泛应用于产品的保鲜和加工中。目前也有学者对龙脷叶总黄酮的提取有了一定研究。如中国专利201910530831.2公开了了一种龙脷叶总黄酮的制备方法，选取龙脷叶药材的干燥叶，用95％乙醇加热回流提取，获得龙脷叶的提取液；将龙脷叶的提取液减压回收，浓缩至无醇味，获得龙脷叶醇提浸膏；将龙脷叶醇提浸膏与去离子水搅拌均匀，混悬过滤，获得龙脷叶醇提上清液，将龙脷叶醇提上清液用石油醚萃取，获得龙脷叶萃取水层；龙脷叶萃取水层经ODS减压柱层析，以甲醇-水系统梯度洗脱，获得龙脷叶总黄酮。本专利技术方法其方法简单、对实验材料要求低，易操作；龙脷叶总黄酮具有α-葡萄糖苷酶的抑制活性，黄酮中的六个黄酮化合物具有α-葡萄糖苷酶的抑制活性，并且对正常肺泡细胞安全，可以用于抗糖尿病药物的制备，用于糖尿病患者的辅食。当前方法是将龙脷叶粉碎后再用水或乙醇提取，提取后经过经ODS减压柱层析纯化，即得龙脷叶总黄酮。现有方法存在提取率较低，且产品的纯度低，且由于黄酮结构中存在酚羟基，稳定性较差，直接粉碎后提取很容易发生氧化。以上
技术介绍
内容的公开仅用于辅助理解本专利技术的专利技术构思及技术方案，其并不必然属于本专利申请的现有技术，在没有明确的证据表明上述内容在本专利申请的申请日已经公开的情况下，上述
技术介绍
不应当用于评价本申请的新颖性和创造性。
技术实现思路
本专利技术针对当前提取龙脷叶总黄酮存在的不足，提供一种高效提取龙脷叶总黄酮的方法。本方法采用柠檬酸、纤维素酶、果胶酶浸泡使龙脷叶酶解，再用混合菌种发酵后再进行加热回流提取，利于龙脷叶中总黄酮有效成分的浸出，提高总黄酮的提取率；打浆过程中加入D-异抗坏血酸钠、氯化钠、乳酸链球菌素，使得药材不易发生氧化，提高总黄酮的稳定性。为了实现以上目的，本专利技术采用的技术方案如下：一种高效提取龙脷叶总黄酮的方法，包括如下步骤：（1）将龙脷叶采摘后经冷冻24-48h，取出用温水解冻，再加入由柠檬酸、纤维素酶、果胶酶组成的浸泡液，浸泡2-6h，取出龙脷叶；（2）按照料液比为1:20-25g/mL的用量加入水，再加入D-异抗坏血酸钠、氯化钠、乳酸链球菌素，打浆，得龙脷叶提取液；（3）向龙脷叶提取液加入发酵菌种、红糖、尿素、硫酸铵、磷酸二氢钾，搅拌均匀，发酵；所述发酵菌种由海洋芽孢杆菌、黑曲霉、产朊假丝酵母组成；（4）将发酵后的龙脷叶提取液加热回流提取，抽滤，减压浓缩，得浓缩提取物；（5）将浓缩提取物溶于4-6倍蒸馏水，离心，取上清液以1.0-3.0BV/h的上样流速上样于大孔吸附树脂柱上；按1.0-3.0BV/h的洗脱速度洗脱，先用水洗脱至无色透明，再用乙醇和乙醇乙酯洗脱剂洗脱，收集洗脱液，减压浓缩回收洗脱剂，干燥，即得龙脷叶总黄酮。进一步地，所述龙脷叶与柠檬酸、纤维素酶、果胶酶的质量比为100:1-2:0.5-1:0.3-0.5。进一步地，所述D-异抗坏血酸钠、氯化钠、乳酸链球菌素与龙脷叶的质量比为0.5-1.0:1-3:0.3-0.6:100。进一步地，所述发酵菌种、红糖、尿素、硫酸铵、磷酸二氢钾与龙脷叶的质量比为1-3:4-8:0.5-1.0:0.3-0.5:0.1-0.3:100。进一步地，所述发酵菌种由质量比为3-5:0.5-2:1-3的海洋芽孢杆菌、黑曲霉、产朊假丝酵母组成。进一步地，所述加热回流提取是在温度为70-80℃下回流提取3次，每次提取1.5-2.5h。进一步地，步骤（5）所述干燥是在温度为-25~-45℃下干燥3-5h，再用60-80℃热风干燥至含水率为4.0-5.5%。进一步地，所述大孔吸附树脂柱为HPD-100型、AB-8型或X-5型大孔吸附树脂柱。进一步地，所述洗脱剂由体积比为1-3:1的乙醇和乙醇乙酯组成。进一步地，步骤（3）所述发酵在温度为25-32℃下发酵36-72h。与现有技术相比，本专利技术的优点及有益效果为：1、本方法采用柠檬酸、纤维素酶、果胶酶浸泡使龙脷叶酶解，再用混合菌种发酵后再进行加热回流提取，利于龙脷叶中总黄酮有效成分的浸出，提高总黄酮的提取率；打浆过程中加入D-异抗坏血酸钠、氯化钠、乳酸链球菌素，使得药材不易发生氧化，提高总黄酮的稳定性。2、本方法采用海洋芽孢杆菌、黑曲霉、产朊假丝酵母组成的混合菌种对龙脷叶提取液发酵后再提取，充分利用微生物间的协同作用，利于总黄酮的溶出，其中海洋芽孢杆菌具有较强的产淀粉酶、蛋白酶等能力，可以将大分子淀粉、蛋白物质降解；黑曲霉能分泌纤维素酶等分解纤维素，利于总黄酮的提取；产朊假丝酵母能分解蛋白质、果胶酶等，分解的蛋白质能为其他微生物提供营养物质。3、本方法得到的提取液经过大孔吸附树脂柱吸附，再用乙醇和乙酸乙酯洗脱，能够提高总黄酮纯度，该方法简单，成本较低。4、本方法提取总黄酮后先经过冷冻干燥再用热风干燥，能够使得总黄酮有效成分不被破坏，干燥彻底，操作简单，成本低。5、本专利技术方法总黄酮先冷冻后再用温水解冻，利用两者不同的温差，有利于总黄酮的提取。6、本方法龙脷叶总黄酮的提取量达到2.8g/kg（以龙脷叶鲜重计）以上，总黄酮含量达到80%以上，提取的总黄酮在医药领域具有很好的应用前景。具体实施方式下面结合具体实施方式对本专利技术作进一步详细说明。应该强调的是，下述说明仅仅是示例性的，而不是为了限制本专利技术的范围及其应用。实施例1一种高效提取龙脷叶总黄酮的方法，包括如下步骤：（1）将1kg龙脷叶采摘后在温度为-50℃下冷冻24h，取出用80℃温水解冻，再加入由15g柠檬酸、8g纤维素酶、5g果胶酶组成的浸泡液，浸泡没过龙脷叶4h，取出龙脷叶；（2）按照料液比为1:20g/mL的用量加入水，再加入8gD-异抗坏血酸钠、20g氯化钠、4g乳酸链球菌素，打浆，得龙脷叶提取液；（3）向龙脷叶提取液加入25g发酵菌种、50g红糖、8g尿素、3g硫酸铵、2g磷酸二氢钾，搅拌均匀，在温度为30℃下发酵48h；所述发酵菌种由质量比为3:1:1的海洋芽孢杆菌、黑曲霉、产朊假丝酵母组成；（4）将发酵后的龙脷叶提取液在温度为75℃本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高效提取龙脷叶总黄酮的方法，其特征在于：包括如下步骤：/n（1）将龙脷叶采摘后经冷冻24-48h，取出用温水解冻，再加入由柠檬酸、纤维素酶、果胶酶组成的浸泡液，浸泡2-6h，取出龙脷叶；/n（2）按照料液比为1:20-25g/mL的用量加入水，再加入D-异抗坏血酸钠、氯化钠、乳酸链球菌素，打浆，得龙脷叶提取液；/n（3）向龙脷叶提取液加入发酵菌种、红糖、尿素、硫酸铵、磷酸二氢钾，搅拌均匀，发酵；所述发酵菌种由海洋芽孢杆菌、黑曲霉、产朊假丝酵母组成；/n（4）将发酵后的龙脷叶提取液加热回流提取，抽滤，减压浓缩，得浓缩提取物；/n（5）将浓缩提取物溶于4-6倍蒸馏水，离心，取上清液以1.0-3.0BV/h的上样流速上样于大孔吸附树脂柱上；按1.0-3.0BV/h的洗脱速度洗脱，先用水洗脱至无色透明，再用乙醇和乙醇乙酯洗脱剂洗脱，收集洗脱液，减压浓缩回收洗脱剂，干燥，即得龙脷叶总黄酮。/n

【技术特征摘要】
1.一种高效提取龙脷叶总黄酮的方法，其特征在于：包括如下步骤：
（1）将龙脷叶采摘后经冷冻24-48h，取出用温水解冻，再加入由柠檬酸、纤维素酶、果胶酶组成的浸泡液，浸泡2-6h，取出龙脷叶；
（2）按照料液比为1:20-25g/mL的用量加入水，再加入D-异抗坏血酸钠、氯化钠、乳酸链球菌素，打浆，得龙脷叶提取液；
（3）向龙脷叶提取液加入发酵菌种、红糖、尿素、硫酸铵、磷酸二氢钾，搅拌均匀，发酵；所述发酵菌种由海洋芽孢杆菌、黑曲霉、产朊假丝酵母组成；
（4）将发酵后的龙脷叶提取液加热回流提取，抽滤，减压浓缩，得浓缩提取物；
（5）将浓缩提取物溶于4-6倍蒸馏水，离心，取上清液以1.0-3.0BV/h的上样流速上样于大孔吸附树脂柱上；按1.0-3.0BV/h的洗脱速度洗脱，先用水洗脱至无色透明，再用乙醇和乙醇乙酯洗脱剂洗脱，收集洗脱液，减压浓缩回收洗脱剂，干燥，即得龙脷叶总黄酮。


2.根据权利要求1所述高效提取龙脷叶总黄酮的方法，其特征在于：所述龙脷叶与柠檬酸、纤维素酶、果胶酶的质量比为100:1-2:0.5-1:0.3-0.5。


3.根据权利要求1所述高效提取龙脷叶总黄酮的方法，其特征在于：所述D-异抗坏血酸钠、氯化钠、乳酸链球菌素与龙脷叶的质量比为0.5-1.0:1-3:0.3-0.6:100。
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【专利技术属性】
技术研发人员：黄锁义，雷智冬，陈石梅，林瑶，周世友，卢丽香，
申请(专利权)人：右江民族医学院，
类型：发明
国别省市：广西;45