一种软枣猕猴桃一步成苗及休眠的繁殖方法技术

本发明专利技术属于植物培养技术领域，具体涉及一种软枣猕猴桃一步成苗及休眠的繁殖方法。本申请的软枣猕猴桃一步成苗及休眠的繁殖方法，通过采用优质软枣猕猴桃的嫩茎段(一叶一段)为材料，利用植物组织培养技术通过茎段基部生根同步腋芽萌发生长方式，从培养到成苗仅用一种培养基完成试管内一步成苗的简捷快速方法，成苗后再在试管内促使植株落叶进入休眠，休眠植株可免去炼苗步骤直接出瓶定植，成活率达到99％以上，此方法具有整个成苗及定植过程简捷、成本低、遗传稳定性好、可操作性强、易推广、成苗率和移栽成活率高等优点，属一步高效快速成苗技术，可应用于软枣猕猴桃的工厂化育苗。

【技术实现步骤摘要】
一种软枣猕猴桃一步成苗及休眠的繁殖方法
本专利技术属于植物培养
，具体涉及一种软枣猕猴桃一步成苗及休眠的繁殖方法。
技术介绍
软枣猕猴桃(Actinidiaarguta)，别名中华软枣猕猴桃、软枣子、藤瓜、狗枣子、金果木、猕猴梨、猕猴桃、软枣、深山木天蓼、藤梨、小洋桃等，是猕猴桃科猕猴桃属藤本落叶植物。果实可食用，营养价值很高，含大量维生素C、淀粉，果胶质等，可加工成果酱、果汁、果脯、罐头、酿酒或用于制作糕点、糖果等多种食品。亦可药用，有强壮、解热、健胃、止血等功能；根及根皮对消化道癌有一定治疗和抑制作用；种子含油量35.62％，是一种较好干性油，而且软枣猕猴桃还具有良好的蜜源和观赏植物，因此，软枣猕猴桃具有极高的经济和药用等价值。目前，软枣猕猴桃还是以野生为主，人工栽培(品种)为辅。在现有技术中，软枣猕猴桃多采用种子、扦插、嫁接、组培等方式进行常规繁殖，种子繁殖性状产生分离，扦插生根率和嫁接成活率极低。常规组织培养繁殖不仅投入成本高且操作性差，而且大多采用愈伤组织诱导、愈伤组织再分化、继代增殖、生根、炼苗或初代培养、继代增殖、生根、炼苗等多步方式才能达到成苗，尽管生根率可观，但在出瓶炼苗时成活率不足70％，又因在愈伤组织诱导、愈伤组织再分化和继代增殖时，可能产生了与亲本性状出现差异的变异或突变，导致原品种的不一致性问题。因此，提供一种软枣猕猴桃高效、成本低、快速、简捷的种苗繁殖方法具有重要意义。
技术实现思路
为了解决上述软枣猕猴桃扦插生根率和嫁接成活率低，组织培养成本高且操作性差，出瓶炼苗时成活率低，遗传不稳定等问题，本专利技术提供一种软枣猕猴桃一步成苗及休眠的繁殖方法。为实现上述目的，本专利技术所采用的技术方案是：一种软枣猕猴桃一步成苗及休眠的繁殖方法，包括以下步骤：S1.材料选择与处理：剪取6月中旬软枣猕猴桃嫩枝条，将嫩枝条去叶后剪成一叶一段的茎段，用75％乙醇涮洗5-15s后移至次氯酸钠溶液浸泡5-15min，无菌水冲洗5-8次，无菌滤纸吸干表面水分作为外植体备用；S2.培养基制备：以马铃薯上清液10-50g·L-1；铁盐：FeSO4·7H2O6.80-7.00mg·L-1，Na2·EDTA·2H2O8.50-9.50mg·L-1；微量元素：MnSO4·4H2O1.00-1.50mg·L-1，ZnSO4·7H2O0.2-0.3mg·L-1，KI0.08-0.10mg·L-1为基本培养基；附加油菜素内酯溶液0.02-0.12mg·L-1、赤霉素GA3溶液0.05-0.15mg·L-1、吲哚丁酸溶液0.01-0.06mg·L-1，再添加琼脂条7.8g·L-1，白糖10g·L-1，并调节培养基pH值至5.5-6.5；S3.生长培养：将步骤S1中茎段接种于含有S2培养基的培养瓶中，并置于适宜的环境中培养30天，使得软枣猕猴桃茎段生根并萌发腋芽；S4.增殖培养：将步骤S3中的茎段继续培养生长至6cm以上的小植株，接着在无菌状态下打开培养瓶，将小植株留1叶剪下苗干，并去叶切割成1叶1段的小茎段后，再次将小茎段转接到S2的培养基中继续培养，获得软枣猕猴桃小植株；S5.植株落叶休眠：当S4中软枣猕猴桃小植株增殖至一定数量，且小植株长至2.0-3.0cm时，将培养瓶置于光照周期4.0-7.0h·d-1、光照强度250-850lx、温度5-18℃环境下培养22天，使得软枣猕猴桃小植株落叶进入休眠状态；S6.移栽培养：当S5中小植株落叶休眠后，将小植株从培养瓶中取出，放在高锰酸钾溶液中洗净根上的琼脂，并将小植株栽植到经多菌灵消毒过的草炭土、腐烂松针和河砂的基质畦上或营养钵中培养，获得软枣猕猴桃育苗。进一步的，步骤S1中次氯酸钠溶液的质量分数为1-5％。进一步的，基本培养基中马铃薯上清液30g·L-1；铁盐：FeSO4·7H2O6.95mg·L-1，Na2·EDTA·2H2O9.325mg·L-1；微量元素：MnSO4·4H2O1.25mg·L-1，ZnSO4·7H2O0.25mg·L-1，KI0.095mg·L-1。进一步的，步骤S2中的油菜素内酯溶液0.02-0.07mg·L-1、赤霉素GA3溶液0.05-0.10mg·L-1、吲哚丁酸溶液0.03-0.07mg·L-1。进一步的，步骤S2中的油菜素内酯溶液0.07-0.12mg·L-1、赤霉素GA3溶液0.10-0.15mg·L-1、吲哚丁酸溶液0.01-0.03mg·L-1。进一步的，步骤S3培养环境为温度26±2℃、光照强度1000lx、光照周期10h·d-1。进一步的，步骤S5的培养环境为光照强度500-800lx、温度10-18℃。进一步的，步骤S5的培养环境为光照强度250-500lx、温度5-10℃。进一步的，步骤S6中高锰酸钾溶液的浓度为20mg·L-1。进一步的，步骤S6中炭土、腐烂松针、河砂的质量比2-5:1-3:1。本专利技术提供一种软枣猕猴桃一步成苗及休眠的繁殖方法，具有以下优点：(1)培养基简单、成本低、可操作性强，在整个繁殖过程中仅用1种培养基即可完成茎段生根，并同步腋芽的迅速萌发生长，经过30天的培养，成苗率达99.0％以上，属一步成苗方法；(2)为提高成苗后定植成活率和缩短定植周期，采用试管苗落叶休眠方法，此方法可免去炼苗过程，仅培养22天软枣猕猴桃试管苗落叶进入休眠状态，休眠率均在99.5％以上；(3)试管内快速繁殖通过节增殖方式，增殖倍数为25天一个周期，按每瓶接种10个茎段，每个茎段在一个周期内可切割成5-6段计算，每年有14个周期，年生产种苗数为：∑年产成活种苗＝10×514×99.0％×99.5％×99.0％株，可见本技术可以满足软枣猕猴桃工厂化育苗的需要。附图说明图1中a为软枣猕猴桃腋芽萌发生长并同步生根的一步成苗图；b为软枣猕猴桃生根图；c为软枣猕猴桃试管内落叶休眠图。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本专利技术的一部分实施例，而不是全部的实施例。如图1所示，一种软枣猕猴桃一步成苗及休眠的繁殖方法，包括以下步骤：1材料与方法1.1材料选择与处理6月中旬，剪取优质软枣猕猴桃嫩枝条(选择芽包饱满的枝条)，将嫩枝条去叶后剪成一叶一段(长度控制在1.00cm)，用75％乙醇(体积分数)涮洗10s后移至3.0％次氯酸钠溶液(质量浓度)浸泡10min，无菌水冲洗6次，无菌滤纸吸干表面水分，去除被乙醇和次氯酸钠损伤的组织作为外植体备用；1.2软枣猕猴桃茎段生根同步腋芽萌发生长和植株高效再生体系建立培养基制备：以马铃薯上清液10-50g·L-1；铁盐：FeSO4·7H2O6.80-7.00mg·L-1，Na2·EDTA·2H2O8.50-9.50mg·L-1；微量元素：MnSO4·4H2O1.00-1.50mg·L-1，Zn本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种软枣猕猴桃一步成苗及休眠的繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：/nS1.材料选择与处理：剪取6月中旬软枣猕猴桃嫩枝条，将嫩枝条去叶后剪成一叶一段的茎段，用75％乙醇涮洗5-15s后移至次氯酸钠溶液浸泡5-15min，无菌水冲洗5-8次，无菌滤纸吸干表面水分作为外植体备用；/nS2.培养基制备：以马铃薯上清液10-50g·L

【技术特征摘要】
1.一种软枣猕猴桃一步成苗及休眠的繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1.材料选择与处理：剪取6月中旬软枣猕猴桃嫩枝条，将嫩枝条去叶后剪成一叶一段的茎段，用75％乙醇涮洗5-15s后移至次氯酸钠溶液浸泡5-15min，无菌水冲洗5-8次，无菌滤纸吸干表面水分作为外植体备用；
S2.培养基制备：以马铃薯上清液10-50g·L-1；铁盐：FeSO4·7H2O6.80-7.00mg·L-1，Na2·EDTA·2H2O8.50-9.50mg·L-1；微量元素：MnSO4·4H2O1.00-1.50mg·L-1，ZnSO4·7H2O0.2-0.3mg·L-1，KI0.08-0.10mg·L-1为基本培养基；附加油菜素内酯溶液0.02-0.12mg·L-1、赤霉素GA3溶液0.05-0.15mg·L-1、吲哚丁酸溶液0.01-0.06mg·L-1，再添加琼脂条7.8g·L-1，白糖10g·L-1，并调节培养基pH值至5.5-6.5；
S3.生长培养：将步骤S1中茎段接种于含有S2培养基的培养瓶中，并置于适宜的环境中培养30天，使得软枣猕猴桃茎段生根并萌发腋芽；
S4.增殖培养：将步骤S3中的茎段继续培养生长至6cm以上的小植株，接着在无菌状态下打开培养瓶，将小植株留1叶剪下苗干，并去叶切割成1叶1段的小茎段后，再次将小茎段转接到S2的培养基中继续培养，获得软枣猕猴桃小植株；
S5.植株落叶休眠：当S4中软枣猕猴桃小植株增殖至一定数量，且小植株长至2.0-3.0cm时，将培养瓶置于光照周期4.0-7.0h·d-1、光照强度250-850lx、温度5-18℃环境下培养22天，使得软枣猕猴桃小植株落叶进入休眠状态；
S6.移栽培养：当S5中小植株落叶休眠后，将小植株从培养瓶中取出，放在高锰酸钾溶液中洗净根上的琼脂，并将小植株栽植到经多菌灵消毒过的草炭土、腐烂松针和河砂的基质畦上或营养钵中培养，获得软枣猕猴桃育苗。


2.根据权利要求1所述的软枣猕猴桃一步成苗及休眠的繁殖方...

【专利技术属性】
技术研发人员：顾地周，杨丽娟，朱俊义，丁云峰，马艳丽，
申请(专利权)人：通化天妍生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：吉林;22