本发明专利技术涉及分子生物学和免疫学领域，具体涉及Rv1733c用于制备鉴别活动性结核病和潜伏性结核感染的试剂盒的应用。本发明专利技术应用荧光免疫斑点法，检测经结核分枝杆菌潜伏相关抗原Rv1733c刺激后引起的特异性Th1细胞免疫反应，鉴别活动性结核病和潜伏性结核感染。通过实验发现，经新型潜伏感染相关抗原Rv1733c刺激后产生IL‑2的T细胞斑点数对鉴别活动性结核病和潜伏性结核感染有一定的价值，能够提高鉴别的准确性。
【技术实现步骤摘要】
鉴别活动性结核病和潜伏性结核病的组合物
本专利技术涉及分子生物学和免疫学领域，具体涉及Rv1733c用于制备鉴别活动性结核病和潜伏性结核感染的试剂盒的应用。
技术介绍
结核病(tuberculosis，TB)严重威胁着人类健康。目前全球约1/3人口潜伏感染结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis，Mtb),其中5％-10％有可能发展为结核病。当潜伏感染者免疫力下降时，体内的MTB激活、增殖、播散，最终发展为活动性结核病。结核分枝杆菌在潜伏感染期主要以休眠菌状态存在。结核分枝杆菌休眠菌为了适应宿主环境和逃避机体免疫作用而特异性转录表达一组由休眠调节子调控的休眠相关抗原。休眠相关抗原的表达对结核分枝杆菌在体内的潜伏感染和持续存活具有重要意义。其中休眠相关抗原Rv1733c是Mtb潜伏感染人群中外周血T淋巴细胞识别率较高的一个蛋白，该蛋白能够有效刺激T淋巴细胞分泌IFN-γ。目前Rv1733c被更多用于制备结核病相关疫苗，如专利申请CN108239660A；WO2012/210018A1；WO2006/104389A1。目前临床诊断和检测中，很难快速准确的将结核病(activeTuberculosis，ATB)和潜伏性结核感染(LatentTBinfection，LTBI)区分开来。如ELISPOT技术的T-SPOT.TB检测已被临床广泛用于诊断结核感染,但其无法鉴别诊断活动性结核病和潜伏结核感染。主要原因包括:1)T-SPOT.TB检测所应用的抗原仅与结核菌毒力相关；2)仅检测单一效应细胞因子IFN-γ的分泌。因其应用的ELISPOT技术，采用化学显色法，在检测多因子时，会由于斑点混色造成无法识别，影响其临床应用。荧光免疫斑点法(FluoroSpot)目前被用于鉴别活动性结核病和非活动性结核病(LifanZhang；ApplicationofIFN-γ/IL-2FluoroSpotassayfordistinguishingactivetuberculosisfromnon-activetuberculosis:Acohortstudy；ClinicaChimicaActa499(2019)64–69)，但其使用的刺激源为ESAT-6抗原和CFP-10抗原，灵敏度和特异性并不理想。因此，需要一种能够准确、灵敏的鉴别活动性结核病和潜伏性结核感染的试剂盒及方法。
技术实现思路
为了提高活动性结核病和潜伏性结核感染鉴别的灵敏度和特异性，本专利技术旨在应用荧光免疫斑点法(FluoroSpot)，检测经结核分枝杆菌潜伏相关抗原Rv1733c刺激后引起的特异性Th1细胞免疫反应，鉴别ATB和LTBI。通过实验发现，经新型潜伏感染相关抗原Rv1733c刺激后产生IL-2的T细胞斑点频数对鉴别LTBI和ATB有一定的价值，可辅助进行鉴别，提高鉴别的准确性。具体而言，本专利技术涉及一种组合物，其含有Rv1733c抗原、ESAT-6抗原和CFP-10抗原；所述组合物用于诊断结核病；进一步的，用于鉴别活动性结核病和潜伏性结核感染。进一步的，所述组合物中还可以含有IFN-γ和IL-2单抗；也可以包含荧光免疫斑点法所使用到的主要试剂；所述试剂可以是抗IFN-γ和抗IL-2的单抗，和/或荧光素标记的单抗IFN-γ-FITC和IL-2-biotin，和/或二抗anti-FITC-490和SA-550等。本专利技术涉及一种诊断结核病的试剂盒，试剂盒含有Rv1733c抗原；进一步，试剂盒中还可以含有ESAT-6抗原和CFP-10抗原；所述抗原为肽段抗原；进一步的，试剂盒中还含有IFN-γ和IL-2单抗。本专利技术还涉及鉴别活动性结核病和潜伏性结核感染的试剂盒，试剂盒含有Rv1733c抗原；进一步，试剂盒中还可以含有ESAT-6抗原和CFP-10抗原；所述抗原为肽段抗原；进一步的，试剂盒中还可以含有IFN-γ和IL-2单抗等。本专利技术涉及一种诊断结核病的试剂盒，试剂盒含有Rv1733c抗原，试剂盒中还包含荧光免疫斑点法所使用到的主要试剂；所述试剂包括抗IFN-γ和抗IL-2的单抗，和/或荧光素标记的单抗IFN-γ-FITC和IL-2-biotin，和/或二抗anti-FITC-490和SA-550。本专利技术涉及一种鉴别活动性结核病和潜伏性结核病的试剂盒，试剂盒含有Rv1733c抗原，试剂盒中还包含荧光免疫斑点法所使用到的主要试剂；所述试剂包括抗IFN-γ和抗IL-2的单抗，和/或荧光素标记的单抗IFN-γ-FITC和IL-2-biotin，和/或二抗anti-FITC-490和SA-550。本专利技术还涉及Rv1733c在制备诊断结核病的试剂盒中的用途，进一步，试剂盒中还含有ESAT-6抗原和CFP-10抗原。本专利技术还涉及Rv1733c用于制备鉴别活动性结核病和潜伏性结核感染的试剂盒的用途，进一步，试剂盒中还含有ESAT-6抗原和CFP-10抗原。本专利技术还涉及Rv1733c抗原、ESAT-6抗原和CFP-10抗原联用在制备鉴别活动性结核病和潜伏性结核感染的试剂盒的用途。进一步的，前述Rv1733c抗原为Rv1733cSLP肽段库。SLP为合成长肽(Syntheticlongpeptides)。进一步的，所述Rv1733cSLP肽段库每条肽段长28个氨基酸，两端重叠14个氨基酸。进一步的，所述Rv1733cSLP肽段库是如下肽段或其组合：Rv1733cp1-28MIATTRDREGATMITFRLRLPCRTILRV；Rv1733cp16-43FRLRLPCRTILRVFSRNPLVRGTDRLEA；Rv1733cp29-56FSRNPLVRGTDRLEAVVMLLAVTVSLLT；Rv1733cp43-70AVVMLLAVTVSLLTIPFAAAAGTAVQDS；Rv1733cp57-84IPFAAAAGTAVQDSRSHVYAHQAQTRHP；Rv1733cp71-98RSHVYAHQAQTRHPATATVIDHEGVIDS；Rv1733cp85-112ATATVIDHEGVIDSNTTATSAPPRTKIT；Rv1733cp99-126NTTATSAPPRTKITVPARWVVNGIERSG；Rv1733cp113-140VPARWVVNGIERSGEVNAKPGTKSGDRV；Rv1733cp125-152SGEVNAKPGTKSGDRVGIWVDSAGQLVD；Rv1733cp141-168GIWVDSAGQLVDEPAPPARAIADAALAA；Rv1733cp169-196LGLWLSVAAVAGALLALTRAILIRVRNA。进一步的，所述Rv1733cSLP肽段库也可以是现有技术中Rv1733cSLP肽段库中任意肽段的组合或其变体。进一步的，所述ESAT-6抗原为ESAT-6肽段库。进一步的，所述CFP-10抗原为CF本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种组合物，其特征在于，含有Rv1733c抗原、ESAT-6抗原和CFP-10抗原。/n
【技术特征摘要】
1.一种组合物，其特征在于，含有Rv1733c抗原、ESAT-6抗原和CFP-10抗原。
2.一种结核病诊断试剂盒，其特征在于，含有Rv1733c抗原、ESAT-6抗原和CFP-10抗原。
3.Rv1733c抗原在制备结核病诊断试剂盒中的用途。
4.权利要求3...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘晓清，张丽帆，
申请(专利权)人：中国医学科学院北京协和医院，
类型：发明
国别省市：北京;11
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