一种猪圆环病毒2型病毒样颗粒的夹心ELISA定量检测法制造技术

本发明专利技术涉及一种猪圆环病毒2型病毒样颗粒夹心定量ELISA检测法及其应用。本发明专利技术基于硫酸乙酰肝素(heparan sulfate，HS)包被板，通过反应条件的优化，建立了猪圆环病毒2型(porcine type 2，PCV2)病毒样颗粒(VLPs)定量的夹心ELISA方法(PCV2 VLPs HS‑ELISA)。该方法利用PCV2 VLPs作为标准品建立了用于定量的标准曲线，检测最低浓度约62.5ng/ml，相关系数R

【技术实现步骤摘要】
一种猪圆环病毒2型病毒样颗粒的夹心ELISA定量检测法
本专利技术涉及一种猪圆环病毒2型病毒样颗粒夹心定量ELISA检测法及其应用，属于动物疾病诊断和生物制品领域。
技术介绍
猪圆环病毒(Porcinetype2，PCV2)是一种无囊膜的单链环状DNA病毒，属于圆环病毒科，被认为是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(Postweaningmultisystemicwastingsyndrome,PMWS)、猪皮炎肾病综合征等的主要病原体，PCV2能损伤猪免疫系统，引起猪严重的免疫抑制，常与其他病原体(猪蓝耳病毒、猪细小病毒、猪链球菌等)多重感染和混合感染，给养猪业造成重大经济损失。PCV2呈现全球性分布，PCV2感染猪的典型临床症状为体表皮肤出现丘疹或者不规则的红紫斑、精神不振等，在保育猪中，最常见的是呼吸道综合征，引起生长缓慢、厌食等不良情况。在妊娠期的母猪中，主要引起繁殖性障碍，产生死胎或者流产等情况。在部分临床案例中，PCV2的感染不产生明显症状。疫苗是防御PCV2感染的最有效手段之一，目前市场上销售的病毒样颗粒亚单位疫苗主要品牌有勃林本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种猪圆环病毒2型病毒样颗粒夹心定量ELISA检测法，其特征在于该方法是基于硫酸乙酰肝素(heparan sulfate，HS)包被板，通过反应条件的优化，建立了猪圆环病毒2型(porcine type 2，PCV2)病毒样颗粒定量的夹心ELISA方法。/n

【技术特征摘要】
1.一种猪圆环病毒2型病毒样颗粒夹心定量ELISA检测法，其特征在于该方法是基于硫酸乙酰肝素(heparansulfate，HS)包被板，通过反应条件的优化，建立了猪圆环病毒2型(porcinetype2，PCV2)病毒样颗粒定量的夹心ELISA方法。


2.如权利要求1所述一种猪圆环病毒2型病毒样颗粒夹心定量ELISA检测法，其特征在于该方法包括以下步骤：
(1)用pH7.4的PBS将HS稀释至1μg/mL，按每孔100μL加入96孔板中包被12h，弃去板中液体，用300μLPBST洗涤5次，拍干剩余液体；
(2)加入100μLBSA封闭液封闭3h，弃去板中液体，用300μLPBST洗涤5次，拍干剩余液体；
(3)PCV2VLPs进行不同倍数稀释后，分别加入孔中，于37℃反应60min，弃去板中液体，用300μLPBST洗涤5次，拍干剩余液体；
(4)将兔多抗按1:2000进行稀释后，分别加入孔中于37℃反应60min，弃去板中...

【专利技术属性】
技术研发人员：王乃东，邹亚文，杨毅，于浩洋，王东亮，湛洋，杨文兵，
申请(专利权)人：湖南阳铭永康生物科技有限公司，湖南阳铭生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南;43