一种用于皮肤创面修复的含干细胞外泌体的凝胶制备方法技术

本发明专利技术涉及一种用于皮肤创面修复的含干细胞外泌体的凝胶制备方法。该方法包括以下步骤：1)人脐带间充质干细胞的原代提取和培养：1.1)人脐带间充质干细胞的原代提取；1.2)传代培养；1.3)培养上清收集；2)人脐带间充质干细胞外泌体提取：2.1)初次离心；2.2)二次离心；2.3)去除细胞器离心；2.4)外泌体粗提；2.5)外泌体终提；3)凝胶材料制备：3.1)壳聚糖制备；3.2)β‑GP配置；3.3)凝胶材料制备；4)凝胶负载外泌体。本发明专利技术可促进皮肤创面修复，缩短伤口愈合时间及减少瘢痕形成。

【技术实现步骤摘要】
一种用于皮肤创面修复的含干细胞外泌体的凝胶制备方法
本专利技术属于生物
，具体涉及一种用于皮肤创面修复的含干细胞外泌体的凝胶制备方法及其应用。
技术介绍
皮肤软组织创面的修复是一个涉及炎症，增殖和组织重塑等因素的多阶段过程，且各个阶段截然不同又彼此重叠。参与此过程的生长因子，细胞因子，趋化因子和各种细胞以复杂精密的方式相互作用。然而，这些阶段和因素中任何一项失衡都可能引起正常伤口愈合过程的协调性被破坏，最终导致慢性不愈伤口的转归和异常疤痕的形成。例如在糖尿病、感染或辐射暴露等情况下，人体细胞和分子信号的破坏都可能会引发创面迁延不愈或慢性愈合。虽然皮肤软组织创伤很普遍，但是迁延不愈的慢性伤口，如大面积损伤、糖尿病等慢性病引起较严重的皮肤溃疡等情况，更可能造成疤痕形成或愈合质量差强人意的结局，不仅后期会导致组织功能的障碍，还会影响患者的心理健康。因此，在皮肤软组织创伤恢复中，如何缩短愈合时间并减少疤痕形成，是近年临床应用中较为迫切的需求。现阶段针对皮肤创伤修复的主要手段包括植皮、激光治疗、生长因子或细胞因子的应用以及基因治疗等。但是这本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于皮肤创面修复的含干细胞外泌体的凝胶制备方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：/n1)人脐带间充质干细胞的原代提取和培养：/n1.1)人脐带间充质干细胞的原代提取：脐带组织取自足月健康新生儿，组织于75％酒精消毒30s后，剥离华通氏胶并剪切成0.5cm

【技术特征摘要】
1.一种用于皮肤创面修复的含干细胞外泌体的凝胶制备方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：
1)人脐带间充质干细胞的原代提取和培养：
1.1)人脐带间充质干细胞的原代提取：脐带组织取自足月健康新生儿，组织于75％酒精消毒30s后，剥离华通氏胶并剪切成0.5cm3大小的组织块，离心后，于培养基中在37℃、5％CO2的培养箱中常规培养；每隔3d小心更换培养基，约12～14d后去除脐带组织，贴壁细胞常规培养；
1.2)传代培养：贴壁细胞融合度到达80％时使用0.25％胰酶-EDTA消化细胞并传代培养；
1.3)培养上清收集：取适合代次细胞，细胞培养至50％-70％融合度时，弃去培养基，用无菌生理盐水清洗3遍，更换为无血清培养基培养，收集培养上清液；
2)人脐带间充质干细胞外泌体提取：
2.1)初次离心：无菌条件下，将收集的上清液离心，去除死细胞和体积较大的细胞碎片；
2.2)二次离心：通过离心去除死细胞和细胞碎片；
2.3)去除细胞器离心：通过离心去除细胞器及小颗粒，并于0.22μm滤器过滤；
2.4)外泌体粗提：滤过后液体转移至超速离心管中，离心后去除上清液，获得粗提外泌体；
2.5)外泌体终提：用1ml生理盐水重悬沉淀，离心后弃上清，生理盐水溶解沉淀，即得到人脐带间充质干细胞外泌体，置于-80℃保存待用；
3)凝胶材料制备：
3.1)壳聚糖制备：取医用级壳聚糖粉末,加入乙酸中，磁力搅拌器搅拌后，4℃放置保存；
3.2)β-GP配置：β-GP溶解于无菌注射用水中，震荡搅拌，通过0.22μm滤器过滤，配置好溶液4℃放置保存；
3.3)凝胶材料制备：将配置好的壳聚糖和β-GP从4℃环境取出，于冰上将β-GP溶液逐步滴加至壳聚糖溶液，持续搅拌8-10min，即得到壳聚糖/β-甘油磷酸钠凝胶材料；
4)凝胶负载外泌体：将干细胞外泌体和壳聚糖/β-甘油磷酸钠凝胶以1:3比例混合并搅拌均匀；外泌体负载完成后，将负载干细胞外泌体的凝胶置于4℃保存待用。


2.根据权利要求1所述的用于皮肤创面修复的含干细胞外泌体的凝胶制备方法，其特征在于：所述步骤1.1)中，离心条件为室温，200-300g转速离心5-8min。


3.根据权利要求2所述的用于皮肤创面修复的含干细胞外泌体的凝胶制备方法，其特征在于：所述步骤1)中，原代和传代细胞培养基为含体积分数5-15％胎...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡储涵，
申请(专利权)人：陕西朗泰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：陕西;61