【技术实现步骤摘要】
保护和诱导毛囊再生的干细胞生发因子的制备方法
本专利技术属于生物
，具体涉及一种用于保护和诱导毛囊再生的干细胞生发因子的制备方法及应用。
技术介绍
雄激素性脱发(androgeneticalopecia.AGA)，又称为脂溢性脱发，是病理性脱发的主要类型，也是临床上最常见的脱发类型。AGA的主要表现为进行性毛发稀疏与毛囊萎缩，并可伴头皮油腻、瘙痒和皮屑过多。流行病学数据显示，我国男性AGA总发病率约为20％，18～30岁男性患病率约为3％，50岁以上男性患病率超过35％。随着生活节奏的加快与压力的增加，AGA患病率呈现逐年升高，发病年龄逐步年轻化的趋势。因AGA直接影响外形的美观，所以患者群体不仅数量巨大，治疗需求也极其迫切。毛发生长过程的更新和维持由毛囊干细胞驱动，并随干细胞在激活与静止状态来回切换而呈现周期性循环，包括生长期、退行期和休止期共3个阶段。研究表明AGA患者毛囊生长期/休止期比例较正常下降，毛囊生长期缩短，休止期延长，并伴有毛囊萎缩。由于生长期变短，使毛发变细变短，形成易于脱落的毳毛，甚至由于毛...
【技术保护点】
1.一种保护和诱导毛囊再生的干细胞生发因子的制备方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：/n1)人脂肪间充质干细胞原代提取和传代培养：/n1.1)人脂肪间充质干细胞原代提取：将抽取的脂肪颗粒用PBS清洗2～3遍，加入0.1％～0.3％Ⅰ型胶原酶，于37℃摇床中，220r/min，20～35min消化，无菌滤网过滤后，取滤过液体于800～1000r/min离心机中离心5～10min，PBS清洗2遍，于无血清培养基MSC Xeno-FreeSFM中重悬并接种，孵箱中常规培养；/n1.2)人脂肪间充质干细胞传代培养：细胞融合率达到80％时，以1:3比例传代，孵箱常规传代培养；/n2...
【技术特征摘要】
1.一种保护和诱导毛囊再生的干细胞生发因子的制备方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：
1)人脂肪间充质干细胞原代提取和传代培养：
1.1)人脂肪间充质干细胞原代提取：将抽取的脂肪颗粒用PBS清洗2～3遍，加入0.1％～0.3％Ⅰ型胶原酶，于37℃摇床中，220r/min，20～35min消化，无菌滤网过滤后，取滤过液体于800～1000r/min离心机中离心5～10min，PBS清洗2遍，于无血清培养基MSCXeno-FreeSFM中重悬并接种，孵箱中常规培养；
1.2)人脂肪间充质干细胞传代培养：细胞融合率达到80％时，以1:3比例传代，孵箱常规传代培养；
2)人脂肪间充质干细胞扩增预处理：
2.1)配置扩增培养基：将临床级抗坏血酸溶解至无血清培养基MSCXeno-FreeSFM，混匀后于4℃冰箱保存；
2.2)人脂肪间充质干细胞扩增预处理：取步骤1.2)所培养的人脂肪间充质干细胞，PBS清洗后，0.25％胰酶-EDTA消化细胞，于扩增培养基中重悬并接种，孵箱中常规培养；
3)人脂肪间充质干细胞特异诱导预处理：
3.1)配置特异诱导培养基：将米诺地尔溶解至无血清培养基MSCXeno-FreeSFM，混匀后于4℃冰箱保存；
3.2)将步骤2.2)的人脂肪间充质干细胞消化后传代接种，待细胞贴壁后更换培养基为特异诱导培养基，于孵箱中常规培养，培养期间不换液；
4)人脂肪间充质干细胞旁分泌细胞因子和生长因子的收集和浓缩：将步骤3.2)所得上清收集，用滤膜进行首次过滤，随后更换截留分子量为1～3KD的滤膜对滤过液进行浓缩，浓缩倍数为15～25倍，最后将浓缩液通过0.22um的滤膜除菌，最后所得即为干细胞生发因子。
2.根据权利要求1所述的保护和诱导毛囊再生的干细胞生发因子的制备方法，其特征在于：所述步骤2.1)中，抗坏血酸浓度为10～200μM。
3.根据权利要求2所述的保护和诱导毛囊再生的干细胞生发因子的制备方法，其特征在于：所述步骤2.2)中，人脂肪间充质干细胞接种密度为1～2×104/ml，人脂肪间充质干细胞培养时间为36h。
4.根据权利要求3所述的保护和诱导毛囊再生的干细胞生发因子的制备方法，其特征在于：所述步骤3.1)中，米诺地尔的浓度为0...
【专利技术属性】
技术研发人员：胡储涵，
申请(专利权)人：陕西朗泰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：陕西;61
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。