一种乳铁蛋白的聚丙烯酰胺凝胶电泳检测方法及试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种乳铁蛋白的聚丙烯酰胺凝胶电泳检测方法及试剂盒，利用乳铁蛋白与DNA的特异性结合，以及结合形成的复合物与未结合的DNA在聚丙烯酰胺凝胶电泳中迁移率的差异，将复合物和DNA分离，通过凝胶电泳成像并根据复合物荧光强度值对乳铁蛋白进行定量检测。该方法无需样品前处理，具有灵敏度高、特异性好、易于操作、检测成本低等优点，适合于对乳品以及乳铁蛋白添加型产品中乳铁蛋白含量的准确检测。

【技术实现步骤摘要】
一种乳铁蛋白的聚丙烯酰胺凝胶电泳检测方法及试剂盒
本专利技术属于食品质量及营养检测领域，涉及一种基于聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)的乳铁蛋白含量检测方法。
技术介绍
乳铁蛋白(lactoferrin，简称Lf)是一种具有多种生物活性和生理功能的铁结合蛋白，其分子量为77-80kDa，主要存在于哺乳动物组织及外分泌液(如牛乳、羊乳、骆驼乳等)，其含量受泌乳时间、物种差异影响。人乳中乳铁蛋白含量最高，初乳中为7mg/mL，常乳中为1.0-3.2mg/mL，山羊乳和牛乳中乳铁蛋白含量差异较小，为0.02-0.2mg/mL。乳铁蛋白可通过结合铁离子，使铁离子浓度低于微生物正常繁殖所需浓度，从而达到抗菌、抗病毒作用，同时乳铁蛋白有利于益生菌生长，对于调节新生儿肠道菌群正常以及增强机体免疫力具有重要作用。由于乳铁蛋白的热不稳定性，不同加工工艺将导致乳铁蛋白热损失情况不同，据此可以判断乳制品是否存在过热加工情况。此外，GB14880-2012《食品营养强化使用标准》中将乳铁蛋白作为营养强化剂使用，其中规定婴幼儿配方食品等乳制品中乳铁蛋白的允许添加量为≤1.0本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于PAGE的乳铁蛋白含量检测方法，其特征在于：该检测方法包括以下步骤：/n采用可以与样品中的乳铁蛋白特异性结合的DNA，并根据结合形成的乳铁蛋白-DNA复合物与DNA在聚丙烯酰胺凝胶电泳迁移率上的差异，将所述复合物和/或DNA分离，根据不同浓度的乳铁蛋白所对应的电泳条带在荧光强度值上的差异对样品中的乳铁蛋白进行定量分析。/n

【技术特征摘要】
1.一种基于PAGE的乳铁蛋白含量检测方法，其特征在于：该检测方法包括以下步骤：
采用可以与样品中的乳铁蛋白特异性结合的DNA，并根据结合形成的乳铁蛋白-DNA复合物与DNA在聚丙烯酰胺凝胶电泳迁移率上的差异，将所述复合物和/或DNA分离，根据不同浓度的乳铁蛋白所对应的电泳条带在荧光强度值上的差异对样品中的乳铁蛋白进行定量分析。


2.根据权利要求1所述一种基于PAGE的乳铁蛋白含量检测方法，其特征在于：所述的检测方法具体包括以下步骤：
1)DNA前处理：将浓度为1μM的可以与乳铁蛋白特异性结合的单链DNA进行退火；
2)样品处理：将经过步骤1)处理后的单链DNA与食品样品混匀，然后在37-37.5℃下孵育20-60min；
3)电泳：对经过步骤2)处理的食品样品进行聚丙烯酰胺凝胶电泳；
4)定量：采集乳铁蛋白-DNA复合物对应的电泳条带的荧光强度值，根据乳铁蛋白含量-电泳条带荧光强度值标准曲线计算食品样品中的乳铁蛋白含量。


3.根据权利要求2所述一种基于PAGE的乳铁蛋白含量检测方法，其特征在于：所述的退火的条件为：置于95-95.5℃下5-10min后冷却。


4.根据权利要求2所述一种基于PAGE的乳铁蛋白含量检测方法，其特征在于：所述的单链DNA具有荧光标记。


5.根据权利要求1或2所述一种基于PAGE的乳铁蛋白含量检测方法，其特征在于：所述的可以与乳铁蛋白特异性结合的DNA选自以下单链DNA：
5`-TGGTGCTGCCCCTAGTCTCCGGCTGATAGCTGCTTCTTGG-3`
或...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄锐，
申请(专利权)人：中垦华山牧乳业有限公司，
类型：发明
国别省市：陕西;61