一种基于RGO-CS-Fc/Pt-Pd NPs纳米复合材料检测GPC3的方法技术

本发明专利技术是以肝癌标志物磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（Glypican‑3,GPC3）为研究对象，以GPC3适配体为识别探针，基于还原性氧化石墨烯‑壳聚糖‑二茂铁/纳米铂、钯（Pt‑Pd NPs/RGO‑CS‑Fc）复合材料良好的电子传递效应和优异的负载能力，GPC3适配体能够特异性识别和结合GPC3蛋白，构建一种能对GPC3蛋白进行特异性识别以及定量分析的新型适配体传感器，用以检测血清中GPC3的含量。该方法操作简单、省时、费用低且具有较低的检测限。

【技术实现步骤摘要】
一种基于RGO-CS-Fc/Pt-PdNPs纳米复合材料检测GPC3的方法
本专利技术属于生物检测领域，具体涉及一种基于纳米复合材料结合适配体来检测磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3（GPC3）的方法。
技术介绍
原发性肝细胞癌（HCC）是一种在我国较为常见，容易对人们生命造成威胁的恶性肿瘤。常见的肝癌标志物有AFP、GPC3、GP73等。GPC3在常人组织中则是以非常低的浓度存在，但在肝癌患者体内浓度会很高，因此GPC3与肝癌的发生、发展密切相关。GPC3检测方法主要有放射免疫分析法、荧光免疫分析法、酶联免疫吸附法、化学发光免疫分析法、流式免疫分析法、电化学免疫传感器、压电免疫传感器等。公开号CN105717104B的专利技术专利，涉及一种利用膜过滤装置分离获取无法获得组织标本的肝癌患者外周血中的CTC，运用细胞蜡块技术制作薄层切片，进而检测肝细胞癌患者外周血GPC3表达情况的方法。公开号CN105759051B的专利技术专利，涉及一种以吖啶酯为发光标物的GPC3纳米磁微球化学发光免疫分析测定磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3的定量分析试剂盒。这些方法所用仪本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于RGO-CS-Fc/Pt-Pd NPs纳米复合材料检测GPC3的方法，按以下步骤进行：/n步骤1：RGO-CS-Fc材料的制备/n（1）还原性氧化石墨烯的制备：氧化石墨烯倒入蒸馏水中，使用超声细胞破碎仪超声，使其充分溶解均匀，制成GO水溶液；取上述GO水溶液置于烧杯中，加入抗坏血酸使其还原GO，得RGO；/n（2）壳聚糖-二茂铁的制备：将壳聚糖加入乙酸溶液中，得壳聚糖溶液；将二茂铁甲酸与壳聚糖溶液混合，以EDC/NHS活化，搅拌得CS-Fc复合物；/n（3）还原性氧化石墨烯-壳聚糖-二茂铁复合材料的制备：取RGO悬液加入到CS-Fc溶液中，EDC/NHS活化，离心分离得RGO-CS...

【技术特征摘要】
1.一种基于RGO-CS-Fc/Pt-PdNPs纳米复合材料检测GPC3的方法，按以下步骤进行：
步骤1：RGO-CS-Fc材料的制备
（1）还原性氧化石墨烯的制备：氧化石墨烯倒入蒸馏水中，使用超声细胞破碎仪超声，使其充分溶解均匀，制成GO水溶液；取上述GO水溶液置于烧杯中，加入抗坏血酸使其还原GO，得RGO；
（2）壳聚糖-二茂铁的制备：将壳聚糖加入乙酸溶液中，得壳聚糖溶液；将二茂铁甲酸与壳聚糖溶液混合，以EDC/NHS活化，搅拌得CS-Fc复合物；
（3）还原性氧化石墨烯-壳聚糖-二茂铁复合材料的制备：取RGO悬液加入到CS-Fc溶液中，EDC/NHS活化，离心分离得RGO-CS-Fc悬浊液；
步骤2：电极的修饰与生物传感界面的构建
（1）将丝网印刷电极置于H2SO4溶液中，进行循环伏安扫描，得到活化后的丝网印刷电极，用水冲洗干净；
（2）将活化后的丝网印刷电极置入氯铂酸和硝酸钯溶液中，进行恒电位沉积，沉积结束后用水将电极冲洗干净，得到Pt-PdNPs/SPE电极；
（3）将Pt-PdNPs/SPE电极用戊二醛浸泡，用PBS洗涤，吹干，而后滴加RGO-CS-Fc悬浊液孵育一段时间，PBS洗涤，晾干，得到RGO-CS-Fc/Pt-PdNPs/SPE电极；
（4）取氨基化的GPC3适配体滴加到传感器界面，孵育一段时间，用PBS溶液洗涤未固定到界面的GPC3适配体，滴加BSA溶液进行封闭，得到GPC3apt/RGO-CS-Fc/Pt-PdNPs/SPE传感界面，晾干备用；
步骤3：GPC3的工作曲线绘制
（1）将标准GPC3溶液滴加到步骤2得到的GPC3apt/RGO-CS-Fc/Pt-PdNPs/SPE传感界面，孵育一段时间，用PBS溶液清洗，得到工作电极，晾干备用；
（2）将工作电极放入PBS溶液中，采用电化学工作站的DPV扫描，记录其峰电流；
（3）分别...

【专利技术属性】
技术研发人员：李桂银，史校行，李玉秋，周治德，梁晋涛，
申请(专利权)人：桂林电子科技大学，
类型：发明
国别省市：广西;45