一种耐高温超氧化物歧化酶的制备方法及其应用技术

本发明专利技术涉及一种耐高温超氧化歧化酶的制备方法及其应用，其特征在于：采用以下步骤：A、条斑紫菜浆料的制备：采摘新鲜成熟的条斑紫菜，冲洗、粉碎、过网，制得得条斑紫菜浆料；B、制备NB液体培养基；C、枯草芽孢杆菌种子液的制备：将枯草芽孢杆菌接种到NB液体培养基，得枯草芽孢杆菌种子液；D、一次发酵：发酵完成后即得到第一条斑紫菜发酵液；E、二次发酵：得第三条斑紫菜发酵液；F、分离提纯：将步骤F所得第三条斑紫菜发酵液加入膜分离器和蛋白液相系统，分离纯化完成，得耐高温超氧化歧化酶。本发明专利技术制备的耐高温超氧化歧化酶80℃和90℃时酶活力稳定、无损失，具有耐高温，稳定性好的优点，添加到化妆品中具有抗衰老作用。

【技术实现步骤摘要】
一种耐高温超氧化物歧化酶的制备方法及其应用
本专利技术涉及微生物发酵
，特别涉及一种耐高温超氧化歧化酶的制备方法及其应用。
技术介绍
超氧化物歧化酶（SuperoxideDismutase，SOD）是生物体内存在的一种抗氧化金属酶，是生物体系中抗氧化酶系的重要组成成员之一，广泛分布在微生物、植物和动物体内。它能够催化超氧阴离子自由基歧化生成氧和过氧化氢，在机体氧化与抗氧化平衡中起到至关重要的作用。由于人的皮肤直接与氧气接触，活性氧类自由基堆积或清除产生障碍都会引起细胞损伤以及色素沉着，导致皮肤衰老和损伤。通过补充外源SOD，可起到抗氧化、祛色斑的作用，有利于延缓皮肤衰老。因此，SOD可广泛应用于抗衰老护肤类产品中，应用前景广阔。但目前，由于商品化的SOD热稳定性差，易失活，极大限制其功能的正常发挥，导致市场需求受到影响。此外，市场上流通的SOD大多来源于动物血液，容易受到污染，产生细菌内毒素，从而引发热源性问题，且生产量小，成本高。而微生物发酵则是一种反应温和可控、容易放大、安全环保的生物反应过程。通过选择合适的微生物，能在发酵过程中将海本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种耐高温超氧化歧化酶的制备方法，其特征在于：采用以下步骤：/nA、条斑紫菜浆料的制备：采摘新鲜成熟的条斑紫菜，冲洗去除其表面沙粒等杂质，用秸秆粉碎机切碎，过10目筛网，得到条斑紫菜小颗粒；将所述条斑紫菜小颗粒与去离子水按质量比1：15-20混合，得混合液；使用在线均质机，在2800 RPM转速下推动所述混合液通过100目不锈钢筛网，弃去未通过筛网的紫菜残渣，将所得滤液用1.0 mol/L浓度的HCl水溶液调节pH至4.0-5.2，于80℃灭菌30 min，降温至25-28℃，得条斑紫菜浆料；/nB、制备NB液体培养基：称取牛肉膏5 g、蛋白胨10 g、NaCl 5 g、葡萄糖20 g，混...

【技术特征摘要】
1.一种耐高温超氧化歧化酶的制备方法，其特征在于：采用以下步骤：
A、条斑紫菜浆料的制备：采摘新鲜成熟的条斑紫菜，冲洗去除其表面沙粒等杂质，用秸秆粉碎机切碎，过10目筛网，得到条斑紫菜小颗粒；将所述条斑紫菜小颗粒与去离子水按质量比1：15-20混合，得混合液；使用在线均质机，在2800RPM转速下推动所述混合液通过100目不锈钢筛网，弃去未通过筛网的紫菜残渣，将所得滤液用1.0mol/L浓度的HCl水溶液调节pH至4.0-5.2，于80℃灭菌30min，降温至25-28℃，得条斑紫菜浆料；
B、制备NB液体培养基：称取牛肉膏5g、蛋白胨10g、NaCl5g、葡萄糖20g，混合后加入1L的水，加热搅拌至均匀；冷却至室温，调节pH值至7.0-7.2，然后121℃灭菌15min，得NB液体培养基；
C、枯草芽孢杆菌种子液的制备：将枯草芽孢杆菌接种到NB液体培养基，然后置于恒温培养摇床中，在30-37℃、120-150RPM条件下振荡培养24h；再按照体积比1:100接种于NB液体培养基中，在30-37℃、120-150RPM条件下振荡培养24-48h，得枯草芽孢杆菌种子液，期间测定其OD600，当所述种子液的OD600达到1.0后停止发酵；
D、一次发酵：将步骤A所得的条斑紫菜浆料和步骤C所得的枯草芽孢杆菌种子液以质量比9：1的比例混合装入不锈钢发酵罐中进行发酵，发酵为期3天，期间温度保持在30-37℃的环境条件，且持续通入无菌空气，通气量为15-20L/min，发酵完成后即得到第一条斑紫菜发酵液；
E、二次发酵：将步骤D得到的第一条斑紫菜发酵液装入10L光发酵罐中进行二次...

【专利技术属性】
技术研发人员：京逸如，岳娟，徐思伟，邱玉想，毕天宇，蒋丽刚，
申请(专利权)人：珀莱雅化妆品股份有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33