一种能够有效感染大日龄幼鼠的柯萨奇A组5型病毒株制造技术

本发明专利技术涉及一种能够有效感染大日龄幼鼠的柯萨奇A组5型病毒株，所述的病毒株为CV‑A5‑M14‑611，其完整氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；本发明专利技术还涉及一种柯萨奇A组5型(CV‑A5)病毒株的弱毒株株系CV‑A5‑M14‑111，其完整氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。本发明专利技术还涉及所述病毒株在制备评价治疗手足口病疫苗和/或药物的动物模型中的应用和所述病毒株在制备评价手足口病疫苗保护效果的制剂中的应用。

【技术实现步骤摘要】
一种能够有效感染大日龄幼鼠的柯萨奇A组5型病毒株
本专利技术属于生物
，具体而言，涉及一种能够有效感染大日龄幼鼠的柯萨奇A组5型病毒株。
技术介绍
手足口病(Hand,footandmouthdisease,HFMD)是由多种肠道病毒血清型引起的法定丙类传染性疾病。HFMD多发于5岁以下儿童。目前研究表明EV-71、CV-A6、CV-A10、CV-A16、CV-A5是引起HFMD的主要病原体。柯萨奇病毒A和B(CoxsackievirusAandB)组中其它肠道病毒血清型也是引起HFMD爆发和散发的病原体[1]。CV-A5属于小RNA病毒科肠道病毒属，直径约为27-30nm，病毒颗粒呈20面对称球形，核心含约7400核苷酸残基单股正链RNA基因组。据文献报道，CV-A5常见在亚热带地区引起HFMD，疱疹性咽峡炎(Herpangina,HA)和脱甲症。本实验室2016-2017年在湖北省襄阳市部分地区收集了3703份HFMD患儿临床样本，通过核酸分型确诊CV-A5阳性样本共147份，占比3.94％[2]，呈爆发流行特征。通过软件分析CV-A5襄阳流行株基因组全序列，结果显示P1区与原型株同源性较高，而P2、P3区与其它肠道病毒血清型发生重组，并且为新的CV-A5重组株，引发了较高病例数的流行。为了更全面的预防手足口病，需要研发包含CV-A5在内的多种肠道病毒抗原的多价手足口病疫苗。动物感染模型是评价候选疫苗效力的最有效的工具。其中，通过小鼠感染模型评价EV-71、CV-A16、CV-A6、CV-A10全病毒灭活疫苗及相应的病毒样颗粒的保护效力已有较多报道[3-4]。肠道病毒动物感染模型常规构建主要是通过乳鼠体内反复传代获得突变株。而未经过小鼠体内适应病毒仅感染1-3日龄鼠，并且实验操作难度系数增大，非特异性死亡比例高，且仅能用于被动免疫-攻毒模型的疫苗保护效力评价。目前文献也有EV-71感染大日龄免疫缺陷鼠构建感染模型的报道[5]。CV-A5及其它血清型大日龄小鼠感染攻毒株的选育，可用于主动免疫-攻毒后的疫苗保护效力评价，高度模拟疫苗免疫后的免疫应答及抗病毒感染及疾病预防的效力。目前CV-A5病毒分子流行病学、免疫原性研究、致病机理、病毒感染机体的机制、病毒与细胞受体结合机理尚未阐明。CV-A5疫苗的体内效力评估有赖于合适的动物模型，因此建立成熟稳定的动物模型显得格外重要。而缺乏合适的用于筛选、评价抗病毒药物的CV-A5感染小鼠模型，也是药物研发过程中亟待解决的一个重要瓶颈。参考文献1.ChenKT,ChangHL,WangST,etal.Epidemiologicfeaturesofhand-foot-mouthdiseaseandherpanginacausedbyenterovirus71inTaiwan,1998-2005[J].Pediatrics,2007,120(2):e244-52.2.孟晓丹等.2016年-2017年襄阳市手足口病流行病和病原学研究.武汉生物制品研究所，未发表.3.KuZ,LiuQ,YeX,etal.Avirus-likeparticlebasedbivalentvaccineconfersdualprotectionagainstenterovirus71andcoxsackievirusA16infectionsinmice[J].Vaccine,2014,32(34):4296-303.4.LimH,InHJ,LeeJA,etal.TheimmunogenicityandprotectioneffectofaninactivatedcoxsackievirusA6,A10,andA16vaccineagainsthand,foot,andmouthdisease[J].Vaccine,2018,36(24):3445-452.5.YangCH,LiangCT,JiangST,etal.Anovelmurinemodelexpressingachimericmscarb2/hscarb2receptorishighlysusceptibletooralinfectionwithclinicalisolatesofEnterovirus71[J].JournalofVirology,2019,93(11):e00183-19.
技术实现思路
本专利技术首先涉及一种能够有效感染大日龄幼鼠的柯萨奇A组5型(CV-A5)病毒株CV-A5-M14-611，所述的CV-A5-M14-611病毒毒株的完整氨基酸序列如SEQIDNO.1所示，其中：氨基酸编号1-69为病毒VP4蛋白氨基酸编号70-324为病毒VP2蛋白氨基酸编号325-564为病毒VP3蛋白氨基酸编号565-860为病毒VP1蛋白氨基酸编号861-1010为病毒2A蛋白氨基酸编号1011-1109为病毒2B蛋白氨基酸编号1110-1438为病毒2C蛋白氨基酸编号1439-1524为病毒3A蛋白氨基酸编号1525-1546为病毒3B蛋白氨基酸编号1547-1729为病毒3C蛋白氨基酸编号1730-2191为病毒3D蛋白；所述的CV-A5-M14-611病毒毒株的完整基因组核苷酸序列如SEQIDNO.2所示，其中，核苷酸编号1-745为5’UTR区核苷酸编号746-952编码病毒VP4蛋白核苷酸编号953-1717编码病毒VP2蛋白核苷酸编号1718-2437编码病毒VP3蛋白核苷酸编号2438-3325编码病毒VP1蛋白核苷酸编号3326-3775编码病毒2A蛋白核苷酸编号3776-4072编码病毒2B蛋白核苷酸编号4073-5059编码病毒2C蛋白核苷酸编号5060-5317编码病毒3A蛋白核苷酸编号5318-5383编码病毒3B蛋白核苷酸编号5384-5932编码病毒3C蛋白核苷酸编号5933-7318编码病毒3D蛋白核苷酸编号7322-7402为3’UTR区；本专利技术还涉及一种柯萨奇A组5型(CV-A5)病毒株的弱毒株株系CV-A5-M14-111，所述的CV-A5-M14-111病毒毒株的完整氨基酸序列如SEQIDNO.3所示，其各蛋白的氨基酸编号与CV-A5-M14-611病毒毒株相同；所述的CV-A5-M14-111病毒毒株的完整基因组核苷酸序列如SEQIDNO.4所示，其基因组的核苷酸编号与CV-A5-M14-611病毒毒株相同。本专利技术还涉及一种柯萨奇A组5型(CV-A5)的强病毒株，其特征在于，所述的强病毒株的完整氨基酸序列和完整基因组核苷酸序列与病毒株CV-A5-M14-611至少具有95％以上的同源性，并且，所述的病毒株的具有如下的特定位点的核苷酸或氨基酸：(1)基因组中(核苷酸的序号排列方式是完整基因组统一编号)：...

【技术保护点】
1.一种能够有效感染大日龄幼鼠的柯萨奇A组5型(CV-A5)病毒株CV-A5-M14-611，其特征在于，所述的CV-A5-M14-611病毒毒株的完整氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，其中：/n氨基酸编号1-69为病毒VP4蛋白，/n氨基酸编号70-324为病毒VP2蛋白，/n氨基酸编号325-564为病毒VP3蛋白，/n氨基酸编号565-860为病毒VP1蛋白，/n氨基酸编号861-1010为病毒2A蛋白，/n氨基酸编号1011-1109为病毒2B蛋白，/n氨基酸编号1110-1438为病毒2C蛋白，/n氨基酸编号1439-1524为病毒3A蛋白，/n氨基酸编号1525-1546为病毒3B蛋白，/n氨基酸编号1547-1729为病毒3C蛋白，/n氨基酸编号1730-2191为病毒3D蛋白。/n

【技术特征摘要】
1.一种能够有效感染大日龄幼鼠的柯萨奇A组5型(CV-A5)病毒株CV-A5-M14-611，其特征在于，所述的CV-A5-M14-611病毒毒株的完整氨基酸序列如SEQIDNO.1所示，其中：
氨基酸编号1-69为病毒VP4蛋白，
氨基酸编号70-324为病毒VP2蛋白，
氨基酸编号325-564为病毒VP3蛋白，
氨基酸编号565-860为病毒VP1蛋白，
氨基酸编号861-1010为病毒2A蛋白，
氨基酸编号1011-1109为病毒2B蛋白，
氨基酸编号1110-1438为病毒2C蛋白，
氨基酸编号1439-1524为病毒3A蛋白，
氨基酸编号1525-1546为病毒3B蛋白，
氨基酸编号1547-1729为病毒3C蛋白，
氨基酸编号1730-2191为病毒3D蛋白。


2.如权利要求1所述的病毒株CV-A5-M14-611，其特征在于，所述的CV-A5-M14-611病毒毒株的完整基因组核苷酸序列如SEQIDNO.2所示，其中：
核苷酸编号1-745为5’UTR区，
核苷酸编号746-952编码病毒VP4蛋白，
核苷酸编号953-1717编码病毒VP2蛋白，
核苷酸编号1718-2437编码病毒VP3蛋白，
核苷酸编号2438-3325编码病毒VP1蛋白，
核苷酸编号3326-3775编码病毒2A蛋白，
核苷酸编号3776-4072编码病毒2B蛋白，
核苷酸编号4073-5059编码病毒2C蛋白，
核苷酸编号5060-5317编码病毒3A蛋白，
核苷酸编号5318-5383编码病毒3B蛋白，
核苷酸编号5384-5932编码病毒3C蛋白，
核苷酸编号5933-7318编码病毒3D蛋白，
核苷酸编号7322-7402为3’UTR区。


3.一种柯萨奇A组5型(CV-A5)病毒株的弱毒株株系CV-A5-M14-111，其特征在于，所述的CV-A5-M14-111病毒毒株的完整氨基酸序列如SEQIDNO.3所示，其各蛋白的氨基酸编号与权利要求1所述的病毒株CV-A5-M14-611相同。


4.根据权利要求3所述的CV-A5-M14-111病毒株，其特征在于，所述的CV-A5-M14-111病毒株的完整基因组...

【专利技术属性】
技术研发人员：申硕，靳卫平，吴杰，卢佳，麦健仪，王泽鋆，孟胜利，
申请(专利权)人：武汉生物制品研究所有限责任公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42