基于秀丽隐杆线虫的抗肺癌耐药作用的药物筛选方法技术

本发明专利技术为一种基于秀丽隐杆线虫的抗肺癌耐药作用的药物筛选方法。利用此线虫的EGFR基因DNA片段(1323aa)与人体EGFR的cDNA的编码，通过PCR技术扩增、克隆、组装得到LET23：：hEFGR(1388aa)片段。将此hEFGR上的21外显子L858R点及20外显子T790M点突变分别得到LET23：：hEGFR[L858R](药物敏感性基因)和LET23：：hEGFR[T790M‑L858R](耐药型基因)，再通过酶剪切及转基因技术，将上述两种LET23：：hEGFR‑TK质粒嵌合在LET23基因序列LET‑23N至LET‑23C之间形成人体化LET23：：hEGFR‑TK[L858R](1323aa)线虫模型和人体化LET23：：hEGFR‑TK[T790M‑L858R](1323aa)线虫模型。该方法具有体内外可比性强、成本低，效率高等优点，可为肺癌EGFR‑TKIs耐药后的药物治疗提供实验依据。

【技术实现步骤摘要】
基于秀丽隐杆线虫的抗肺癌耐药作用的药物筛选方法
本专利技术涉及一种药物筛选方法，特别是涉及一种基于秀丽隐杆线虫的抗肺癌耐药作用的药物筛选方法，属于医药

技术介绍
全球癌症死亡率最高的是肺癌，而非小细胞肺癌大约占80％。大多数患者被诊断出时已经是晚期患者，即使积极治疗，平均存活时间仅为10-12个月。虽然化学疗法占肺癌患者治疗方法的很大比例，但仍然很少有效。筛选潜在的候选药物是一件代价昂贵的事情，通常平均需要13年，从候选药物开始到药物上架时花费约数亿美元。只有大约10％的候选药物能够进入市场，更令人担忧的是，几乎一半的药物在三期临床试验中失败，其中80％的成本已经发生。目前肺癌常用的表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶(TK)抑制剂，多在患者中位时间9月后出现耐药，主要由于EGFR-TK敏感基因发生突变。针对一代EGFR-TKIs的耐药，国外开发了二代不可逆EGFR-TKIs(未上市)、多靶点TKI以及其他靶向药物，但目前临床试验研究表明上述新药不能明显改善患者中位生存时间。中药具有抑制EGFR-TK活性的研究较多，但主要针对EGF本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于秀丽隐杆线虫的抗肺癌耐药作用的药物筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)线虫的冻存/n同步化后收集L1期线虫，离心，弃上清，浓缩，加入冻存管中，，置于-80℃冰箱保存；/n(2)线虫的传代与培养/n取出冻存管，20℃迅速解冻，倒在NGM平板上，置于20℃生化培养箱中培养；/n(3)线虫的同步化/n将培养基表面的孕虫和虫卵用缓冲液洗下，收集于离心管中，离心吸弃上清，解液，弃上清，20℃下培养24小时得到L1期线虫；/n(4)液体板的制备/n弃去LB液体培养基的上清，将大肠杆菌OP50置于无菌48孔板；/n(5)线虫的EGFR-TKIs耐药模型的建立/n将给药后48孔板中的线虫...

【技术特征摘要】
1.一种基于秀丽隐杆线虫的抗肺癌耐药作用的药物筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)线虫的冻存
同步化后收集L1期线虫，离心，弃上清，浓缩，加入冻存管中，，置于-80℃冰箱保存；
(2)线虫的传代与培养
取出冻存管，20℃迅速解冻，倒在NGM平板上，置于20℃生化培养箱中培养；
(3)线虫的同步化
将培养基表面的孕虫和虫卵用缓冲液洗下，收集于离心管中，离心吸弃上清，解液，弃上清，20℃下培养24小时得到L1期线虫...

【专利技术属性】
技术研发人员：童艳丽，黄冠，梅清华，
申请(专利权)人：广东省第二人民医院，
类型：发明
国别省市：广东;44