一种极少细胞量的细胞液相染色鉴定方法技术

本发明专利技术提供了一种极少细胞量的细胞液相染色鉴定方法，其包括步骤：(1)向非干燥状态的细胞加入细胞固定液进行细胞固定；(2)清洗细胞后，加入细胞染色液进行细胞染色；所述细胞染色液包括荧光抗体染色液；(3)利用明场光染色液对细胞进行染色；(4)清洗细胞后，将细胞悬浮，置于显微镜下进行荧光和明场光下观测，同时获得各种荧光和明场光成像。本发明专利技术可以使细胞在不干燥、不封片的前提下，能够进行荧光抗体和明场光细胞形态学的双重光源的染色、成像，并能获得高质量的细胞荧光标志物和明场光形态学成像；本发明专利技术方法简单易行，成本低，有利于细胞的分类和后续分子水平的分析，可获得更全面的细胞标志物信息。

【技术实现步骤摘要】
一种极少细胞量的细胞液相染色鉴定方法
本专利技术属于生物
，具体涉及一种极少细胞量的细胞液相染色鉴定方法。
技术介绍
近年来液体活检技术以其在肿瘤检测分析上的优势，解决了手术病理和组织穿刺病理上的许多限制，提高了早期检测的灵敏度并提早了早期检测时间3-5年，在临床、科研、制药和生物
发挥着越来越重要的作用。作为液体活检中最重要的标志物之一的循环肿瘤细胞的检测，以其最能代表肿瘤原发灶和扩散灶信息的液体活检标志物的优势，在计数和基因分析方面发挥着早期检测、诊断、病情跟踪、复发检测等重要和必不可少的作用。但是，循环肿瘤细胞毕竟在血液中属于稀有细胞，富集和捕获所得到的细胞数量较少，在发挥其基因检测优势方面受到了细胞数量上的限制。现在市场上的方法是，基于捕获的靶细胞，离心在载玻片上，进行免疫荧光鉴定后，再将单个的肿瘤细胞用激光挑取法收集后，抽提其DNA/RNA等，作基因分析。问题是，这种方法，收集到的单个细胞不可能保证单个细胞的完整性，那么后续的基因分析时，是原有的肿瘤细胞的基因缺失，还是收集细胞时缺少细胞完整性的技术操作所致，没有办法判断，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种极少细胞量的液体状态下的细胞染色鉴定方法，其特征在于，所述染色方法包括如下步骤：/n(1)向非干燥状态的细胞加入细胞固定液进行细胞固定；/n(2)清洗细胞后，加入细胞染色液进行细胞染色；所述细胞染色液包括发光抗体染色液；/n(3)利用明场光染色液对细胞进行染色；/n(4)清洗细胞后，将细胞悬浮在缓冲液中，置于显微镜下，液相进行荧光和明场光下观测；/n所述极少细胞量的含义为：单细胞或者数目在使用器皿中能充分铺开的有限细胞数量。/n

【技术特征摘要】
1.一种极少细胞量的液体状态下的细胞染色鉴定方法，其特征在于，所述染色方法包括如下步骤：
(1)向非干燥状态的细胞加入细胞固定液进行细胞固定；
(2)清洗细胞后，加入细胞染色液进行细胞染色；所述细胞染色液包括发光抗体染色液；
(3)利用明场光染色液对细胞进行染色；
(4)清洗细胞后，将细胞悬浮在缓冲液中，置于显微镜下，液相进行荧光和明场光下观测；
所述极少细胞量的含义为：单细胞或者数目在使用器皿中能充分铺开的有限细胞数量。


2.根据权利要求1所述的染色方法，其特征在于，所述细胞包括体液和溶液中的肿瘤细胞、干细胞和免疫细胞中的至少一种。


3.根据权利要求1所述的染色方法，其特征在于，所述非干燥状态的细胞的获得方法包括：细胞培养后，细胞分离后，组织活检细胞或组织细胞悬浮液细胞，除去液体但不干燥，保持细胞湿润并可再悬浮于细胞缓冲液中。


4.根据权利要求1所述的染色方法，其特征在于，所述荧光抗体染色液包括一级荧光标记抗体和/或一级抗体对应的二级荧光标记抗体。


5.根据权利要求1所述的染色方法，其特征在于，进行所述步骤(2)的细胞染色时，利用所述细胞染色液进行至...

【专利技术属性】
技术研发人员：邓亚光，覃程陈，孙长胜，李宴清，邓全伟，李春妍，邓江平，
申请(专利权)人：三峡医学检验实验室湖北有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42