一种微生物利用甘油发酵生产1,3-丙二醇的方法技术

本发明专利技术提供了一种微生物共培养体系利用甘油发酵生产1,3‑丙二醇的方法，通过成功构建重组大肠杆菌Rosseta‑dhaB1dhaB2和Rosseta‑dhaT，将上述重组大肠杆菌共培养，进行种子培养和发酵培养，其中重组大肠杆菌Rosseta‑dhaB1dhaB2实现甘油的利用生产中间代谢产物3‑羟基丙醛(3‑HPA)，重组大肠杆菌Rosseta‑dhaT催化3‑HPA生产1,3‑丙二醇，在发酵过程中，按1:1.5比例接种于发酵培养基，加入60g/L底物甘油与10g/L辅底物葡萄糖。本发明专利技术的方法，提高了甘油的转化率和1,3‑丙二醇的产量，且本发明专利技术采用酪酸梭菌含有不依赖辅酶B

【技术实现步骤摘要】
一种微生物利用甘油发酵生产1,3-丙二醇的方法
本专利技术属于生物工程
，具体涉及一种微生物利用甘油发酵生产1,3-丙二醇的方法。
技术介绍
粗甘油是生产生物柴油中的主要副产物之一，每生产10kg生物柴油将会产生1kg的粗甘油，有报道预计2020年将达到58.7亿磅以上，若粗甘油不能及时有效的利用和处理，将有可能成为新的污染源。因此利用甘油生产高附加值的产品，提高甘油转化率是目前研究的热点。1,3-丙二醇(1,3-PD)作为一种良好的溶剂、抗冻剂、保护剂，被广泛的应用于食品、医药、化妆品和化工等领域。在食品领域，1,3-丙二醇易于溶解难溶于水的食品添加剂，也可作为食品添加剂，提高食品的营养价值、耐藏性和稳定性。在医药领域，1,3-丙二醇作为中间体合成的聚酯具有安全无毒可生物降解等优点。在化工领域，1,3-丙二醇主要用于合成新型聚酯纤维，使其具有良好的回弹性、固色性等优点。目前工业上主要采用化学法生产1,3-丙二醇，但化学合成法需要在高温、高压和昂贵的催化剂下进行，生产条件苛刻，原料依赖不可再生资源石油，副产物多导致分离纯化本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种微生物利用甘油发酵生产1,3-丙二醇的方法，其特征在于，所述方法包括：/n1)扩增甘油脱水酶和甘油脱水酶激活因子的基因序列dhaB1、dhaB2，经一步无缝克隆法克隆到表达载体pANY1中，经转化、筛选阳性克隆子获得E.coli Rosseta-dhaB1dhaB2的重组菌；/n2)扩增1,3-丙二醇脱氢酶基因dhaT，经一步无缝克隆法克隆到表达载体pANY1中，经转化、筛选阳性克隆子获得E.coli Rosseta-dhaT的重组菌；/n3)将E.coli Rosseta-dhaB1dhaB2重组菌和E.coli Rosseta-dhaT重组菌进行种子培养和发酵培养，发酵培养时以甘油...

【技术特征摘要】
1.一种微生物利用甘油发酵生产1,3-丙二醇的方法，其特征在于，所述方法包括：
1)扩增甘油脱水酶和甘油脱水酶激活因子的基因序列dhaB1、dhaB2，经一步无缝克隆法克隆到表达载体pANY1中，经转化、筛选阳性克隆子获得E.coliRosseta-dhaB1dhaB2的重组菌；
2)扩增1,3-丙二醇脱氢酶基因dhaT，经一步无缝克隆法克隆到表达载体pANY1中，经转化、筛选阳性克隆子获得E.coliRosseta-dhaT的重组菌；
3)将E.coliRosseta-dhaB1dhaB2重组菌和E.coliRosseta-dhaT重组菌进行种子培养和发酵培养，发酵培养时以甘油为底物。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的甘油脱水酶、甘油脱水酶激活因子和1,3-丙二醇脱氢酶来源于酪酸梭菌YJH-09。


3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的种子培养过程包括将重组大肠杆菌Rosseta-dhaB1dhaB2、Rosseta-dhaT分别接种于LB-Kan培养基中，过夜培养为一级种子液，再将重组大肠杆菌Rosseta-dhaB1dhaB2、Rosseta-dhaT的一级种子液分别接种于发酵培养基中，过夜培养为二级种子液。

【专利技术属性】
技术研发人员：齐向辉，员君华，张国艳，袁娇，张宇飞，王洋，
申请(专利权)人：江苏大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32