【技术实现步骤摘要】
从原油污染土壤中分离与纯化高效石油烃降解菌的方法
本专利技术涉及一种从原油污染土壤中分离与纯化高效石油烃降解菌的方法，属于石油烃生物降解处理
技术介绍
作为重要能源的石油是近代工业的“血液”，但是石油在给人类带来快捷便利的同时，也造成了越来越严重的环境污染。石油在开采、运输、贮藏、加工过程中因意外事故或管理不当，都会使石油排放到土壤、地下水、海洋等，使环境遭受污染，直接危害人类生产与生活。石油污染治理主要有物理、化学和微生物等方法。物理化学法存在能耗多、成本高和二次污染严重等缺点，微生物法通过石油类污染物在微生物的新成代谢循环中得到转化和去除，使被污染环境恢复其天然功能，具有费用低、环境影响小以及应用范围广的优点。由于自然的选择和淘汰作用，在长期被石油烃类污染的环境中一般存在着不同种类能够降解石油烃的菌种，在自然环境中他们往往是水体或土壤中石油烃类污染物生物修复的主力军。因此筛选高效石油烃降解菌是当前石油污染土壤微生物修复技术的研究热点。目前，在本领域常规的富集分离纯化降解菌株的方法中，所用的碳源通...
【技术保护点】
1.一种从原油污染土壤中分离与纯化高效石油烃降解菌的方法，其特征在于，所述方法包括：/n(1)将无机盐培养基与高含油土壤样品混合后进行培养，得到富集后的培养液；/n(2)将无机盐培养基与稀油混合，得到混合液A，再将步骤(1)所得富集后的培养液加入到所述混合液A后进行培养；/n(3)将无机盐培养基与稠油混合，得到混合液B，再将步骤(2)所得富集后的培养液加入到所述混合液B后进行培养；/n(4)将步骤(3)所得培养液稀释后涂布于原油/无机盐固体平板培养基上并进行培养；再经纯化得到形态一致的纯化菌株；/n(5)将步骤(4)所得纯化菌株于牛肉膏蛋白胨培养基中进行培养，培养后得到菌液...
【技术特征摘要】
1.一种从原油污染土壤中分离与纯化高效石油烃降解菌的方法，其特征在于，所述方法包括：
(1)将无机盐培养基与高含油土壤样品混合后进行培养，得到富集后的培养液；
(2)将无机盐培养基与稀油混合，得到混合液A，再将步骤(1)所得富集后的培养液加入到所述混合液A后进行培养；
(3)将无机盐培养基与稠油混合，得到混合液B，再将步骤(2)所得富集后的培养液加入到所述混合液B后进行培养；
(4)将步骤(3)所得培养液稀释后涂布于原油/无机盐固体平板培养基上并进行培养；再经纯化得到形态一致的纯化菌株；
(5)将步骤(4)所得纯化菌株于牛肉膏蛋白胨培养基中进行培养，培养后得到菌液；随后将所述菌液接种至原油/无机盐液体培养基中，以进行原油降解实验；再测定该纯化菌株原油降解率，选择原油降解率较大的菌株作为所述高效石油烃降解菌纯菌株。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述高含油土壤样品为于4oC冰箱中保存的样品。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述高含油土壤样品的含油量为10％-20％。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述无机盐培养基的体积与高含油土壤样品的质量的比例为9:1-10:1，单位分别为mL和g。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)-(4)中，所述培养为于25-30℃，转速为120-150rpm下培养7-10天。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，以所述无机盐培养基的体积计，其包含：
硝酸铵：2.0g/L，磷酸氢二钾：1.5g/L，磷酸二氢钾：3.0g/L，七水合硫酸镁：0.1g/L，无水氯化钙：0.01g/L及乙二胺四乙酸二钠：0.01g/L。
7.根据权利要求1或6所述的方法，其特征在于，所述无机盐培养基的pH值为7.5±0.1。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，以无机盐培养基及步骤(1)所得富集后的培养液的总体积计，所述稀油的浓度为1-10g/L。
9.根据权利要求1或8所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，以所述稀油的总重量为100％计，其饱和烃含量为65％-75％，芳香烃含量为15％-25％，胶质和沥青质的含量为5％-15％。
10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，步骤(1)所...
【专利技术属性】
技术研发人员：郑瑾，季远玲，陈宏坤，王晓玲，杜显元，陈昌照，于文赫，宋佳宇，张坤峰，
申请(专利权)人：中国石油天然气集团有限公司，中国石油集团安全环保技术研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11
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