【技术实现步骤摘要】
基于金属标记的阿尔兹海默症脑组织Aβ蛋白的原位检测方法
本专利技术属于分析化学领域，特别涉及蛋白原位分析方法的开发与应用。
技术介绍
阿尔兹海默症(Alzheimerdisease，AD)是一种神经退行性疾病，其主要症状有记忆力减退和认知行为困难，对患者造成极大痛苦。脑内蛋白的异常一般早于症状的出现。因此，对于阿尔兹海默症的病理研究有助于病情的发现与治疗。β-淀粉样蛋白(amyloidβ-protein，Aβ蛋白)级联假说是公认的阿尔兹海默症的发病机理，即过量的Aβ蛋白在脑内沉积形成淀粉样斑块引发神经系统的退行性改变。目前，针对Aβ蛋白的研究样品主要来源于脑脊液和血浆。脑脊液中Aβ水平的改变并不具有特异性；血浆样品来源于外周组织，无法对AD的病理有直观的体现。研究脑内Aβ蛋白沉积情况对于阿尔兹海默症的病理研究及药物筛选等至关重要。成像技术使脑内蛋白水平变化可视化，提供了病理变化的时间空间信息。临床上AD的分期主要通过计算机断层扫描(CT)、放射性标记共振成像(MRI)来实现，但这些技术不足以呈现AD早期斑块的...
【技术保护点】
1.一种螯合物，其特征在于，由双(2,2'-联吡啶)-4'-甲基-4-羧基联吡啶-钌N-琥珀酰亚胺酯-双-(六氟磷酸盐)(Ru-NHS酯)和Aβ抗体耦联形成。/n优选地，螯合物中Ru-NHS酯和Aβ抗体的摩尔比为50:1-500:1，更优选为约500:1。/n
【技术特征摘要】
1.一种螯合物，其特征在于，由双(2,2'-联吡啶)-4'-甲基-4-羧基联吡啶-钌N-琥珀酰亚胺酯-双-(六氟磷酸盐)(Ru-NHS酯)和Aβ抗体耦联形成。
优选地，螯合物中Ru-NHS酯和Aβ抗体的摩尔比为50:1-500:1，更优选为约500:1。
2.根据权利要求1所述的螯合物，其特征在于，所述Aβ抗体来自于哺乳动物，优选人、小鼠、兔、山羊等。
所述Aβ抗体能够与哺乳动物，优选人、小鼠、兔、山羊等Aβ蛋白结合。
所述Aβ抗体能够与β淀粉样前体蛋白(β-amyloidprecursorprotein，APP)、Aβ1-40、Aβ1-42中的一种或多种结合，优选Aβ1-42。
所述Aβ抗体为单克隆抗体。
3.根据权利要求1或2所述螯合物的制备方法，其特征在于，包括将Ru-NHS酯和Aβ抗体反应的步骤。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将Ru-NHS酯溶解溶剂中；优选，溶剂选自DMSO、甲醇中的一种或两种的任意比例的混合物；优选，Ru-NHS酯溶液的浓度为50-500μg/ml，最优选约100μg/ml。
(2)将Aβ抗体溶解在溶剂中；优选，溶剂为PBS或PB；优选，Aβ抗体溶液的浓度为0.5-10μg/ml，最优选约2μg/ml；优选，PB和PBS的pH值为7.8-8.0，浓度为10-12mM。
(3)将步骤(1)所得溶液和步骤(2)所得溶液混合，反应；优选，反应在避光、室温、震荡下进行；优选，反应时间为0.1-10h，最优选约1h；
(4)在步骤(3)所得溶液中加入甘氨酸以终止反应；优选，该步骤在避光、室温、震荡下进行；优选，该步骤时间为5-30min；优选，甘氨酸以其水溶液的形式加入；优选，甘氨酸水溶液的浓度为1-3M，最优选约2M；优选，Ru-NHS酯和甘氨酸的摩尔比为1:400-1:1200，最优选约1:800；
(5)将步骤(4)所得溶液用透析管进行透析纯化；优选，透析管为10KD，透析液为PBS或PB，优选10-12mM、pH7.8-8.0的PBS或PB，透析液的用量以体积计至少为步骤(4)所得溶液的1000倍，更优选为4000-6000倍，最优选约5000倍。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所得溶液中Ru-NHS酯和步骤(2)所得溶液中Aβ抗体的摩尔比至少为50:1，优选至少为500:1，或者优选为50:1-1000:1，进一步优选为50:1-600:1，更优选为500:1-1000:1。
6.一种离体脑组织中Aβ蛋白的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取离体脑组织进行冰冻切片、丙...
【专利技术属性】
技术研发人员：高雪，罗施中，冯流星，
申请(专利权)人：北京化工大学，中国计量科学研究院，
类型：发明
国别省市：北京;11
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