一种烟草eIFiso4E-T突变体及在培育抗病毒病烟草中的应用制造技术

一种烟草eIFiso4E‑T突变体及在培育抗病毒病烟草中的应用。所述烟草eIFiso4E‑T突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO:2或者SEQ ID NO:3所示，与SEQ ID NO:1所示的野生型烟草eIFiso4E‑T的氨基酸序列相比，所述烟草eIFiso4E‑T突变体的氨基酸序列第76位由A突变为T或者第98位由G突变为D。将eIFiso4E‑T突变体与抗马铃薯Y病毒的va位点或eifiso4e‑t

【技术实现步骤摘要】
一种烟草eIFiso4E-T突变体及在培育抗病毒病烟草中的应用
本专利技术属于生物
，进一步属于烟草生物技术育种领域，具体涉及烟草eIFiso4E-T基因突变体的获得及其烟草抗病育种应用。
技术介绍
马铃薯Y病毒(PotatovirusY,PVY)是烟草马铃薯Y病毒属(Potyvirus)的典型成员，PVY主要危害马铃薯、烟草、番茄和辣椒等茄科作物，近年来PVY已经上升为烟草上的主要病害。PVY在田间由蚜虫非性传播。由于蚜虫发育周期短、繁殖力强和易产生抗药性，利用化学药剂防治媒介昆虫来治理该病害效果有限，因此，种植抗病品种是防控PVY最根本、最经济有效的手段。烟草作为重要的经济作物和植物研究重要的模式作物，有关持久抗PVY资源鉴定、抗病育种和病原调查鉴定研究较少。其中通过X-射线诱变获得的va基因抗病资源，已广泛应用于选育烟草抗病品种。烟草eIF4E1-S基因(有的文献缩写为eIF4E-1，GenBank序列登录号KF155696)缺失会导致烟草产生针对马铃薯Y病毒(PotatovirusY,PVY)的抗性(刘勇等，2013；Julio等，2014)，但有关持久抗PVY资源鉴定、抗病育种和病原调查鉴定研究较少。未见普通烟草持久抗PVY的种质资源报道。在同科作物相邻种植的农田生态下，控制一种作物上PVY的发生不仅有利于该作物的病害防治，也有利于其他作物的病害治理。
技术实现思路
本专利技术的第一专利技术目的是提供一种eIFiso4E-T基因突变体。第二专利技术目的是提供一种eIFiso4E-T基因突变体在选育抗病毒病品种中的应用。本专利技术的第一专利技术目的是这样实现的：一种烟草eIFiso4E-T突变体，所述烟草eIFiso4E-T突变体的氨基酸序列如SEQIDNO:2或者SEQIDNO:3所示，与SEQIDNO:1所示的野生型烟草eIFiso4E-T的氨基酸序列相比，所述烟草eIFiso4E-T突变体的氨基酸序列第76位由A突变为T或者第98位由G突变为D。所述野生型烟草eIFiso4E-T的核苷酸序列如SEQIDNO:4所示，所述烟草eIFiso4E-T突变体的核苷酸序列如SEQIDNO:5或者SEQIDNO:6所示。本专利技术的第二专利技术目的是这样实现的：本专利技术所述的烟草eIFiso4E-T突变体在培育抗病毒病烟草中的应用，所述病毒病为马铃薯Y病毒。进一步地，所述应用方法是通过染色体片段导入或者基因导入将eIFiso4E-T突变位点引入目标烟草，得到包含eIFiso4E-T突变体的烟草，使目标烟草获得马铃薯Y病毒抗性；所述目标烟草为eIF4E1-S基因缺失、或者eIF4E1-S基因敲除的烟草；所述目标烟草eIF4E1-S基因缺失的核苷酸序列如SEQIDNO:7所示，所述目标烟草eIF4E1-S基因敲除的氨基酸序列如SEQIDNO:8所示。进一步地，所述通过染色体片段导入将eIFiso4E-T突变位点引入目标烟草的方法，是通过杂交育种、原生质体融合，将eIFiso4E-T突变体基因与eIF4E1-S基因敲除的烟草材料聚合，得到抗病毒病烟草；所述通过基因导入将eIFiso4E-T突变位点引入目标烟草的方法，是将外源的eIFiso4E-T突变体基因导入目标烟草中，得到抗病毒病烟草。本专利技术所述目标烟草为烟草属植物，包括烤烟、白肋烟、香料烟、雪茄烟、晾晒烟、黄花烟中的任一种栽培烟草。本专利技术的eIFiso4E-T突变体具有重要的应用价值，其与eIF4E1-S敲除(eif4e1-sKO)或eIF4E1-S缺失(va)的材料聚合，可以得到含eifiso4e-tKOeif4e1-sKO或者eifiso4e-tKOva基因组合的烟草植株。上述烟草植株持久抗马铃薯Y病毒(PotatovirusY,PVY)，可用于选育对PVY具有持久抗性的烟草品种。将本专利技术所述烟草eIFiso4E-T突变体应用于培育抗病毒病烟草，可以得到新的持久抗PVY烟草品种及其种子和无性繁殖体，还可以开发一些基因工程产品，包括A:所述eIFiso4E-T突变基因的表达盒，转基因细胞系和重组菌等；B:包括所述eIF4E1-S基因Knockout的表达盒，转基因细胞系和重组菌等；C:A和B的组合。利用上述基因工程产品使烟草获得对PVY的持久抗性。附图说明图1所示为eIFiso4E-T基因结构；图2为eIFiso4E-T基因杂合突变(t1)的突变体基因组测序峰图；图3为eIFiso4E-T基因纯合突变(t2)的突变体基因组测序峰图。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步说明，但不以任何方式对本专利技术加以限制，基于本专利技术教导所作的任何变换，均落入本专利技术保护范围。如无特殊说明，下述各实施例使用的均为常规方法；如无特殊说明，所用的试验材料均为自常规生化试剂公司购买得到的。一种烟草eIFiso4E-T突变体，所述烟草eIFiso4E-T突变体的氨基酸序列如SEQIDNO:2或者SEQIDNO:3所示，与SEQIDNO:1所示的野生型烟草eIFiso4E-T的氨基酸序列相比，所述烟草eIFiso4E-T突变体的氨基酸序列第76位由A突变为T(简写：A76T)或者第98位由G突变为D(简写：G98D)。所述野生型烟草eIFiso4E-T的核苷酸序列如SEQIDNO:4所示，所述烟草eIFiso4E-T突变体的核苷酸序列如SEQIDNO:5或者SEQIDNO:6所示。本专利技术所述的烟草eIFiso4E-T突变体可应用于培育抗病毒病烟草，所述病毒病为马铃薯Y病毒(PotatovirusY，PVY)。应用方法是修饰目标烟草的内源eIFiso4E-T基因，对目标烟草细胞、组织、个体或群体进行诱变、筛选，使其编码基因含所述烟草eIFiso4E-T突变体。具体技术手段是通过染色体片段导入或者基因导入将eIFiso4E-T突变位点引入目标烟草，得到包含eIFiso4E-T突变体的烟草，使目标烟草获得马铃薯Y病毒持久抗性。所述目标烟草为eIF4E1-S基因缺失(va基因型)或者eIF4E1-S基因敲除(eif4e1-sKO)的烟草；所述目标烟草eIF4E1-S基因缺失的核苷酸序列如SEQIDNO:7所示，所述目标烟草eIF4E1-S基因敲除的氨基酸序列如SEQIDNO:8所示。所述通过染色体片段导入将eIFiso4E-T突变位点引入目标烟草的方法，是通过杂交育种、原生质体融合，将eIFiso4E-T突变体基因(A76T或者G98D)与eIF4E1-S基因敲除(eif4e1-sKO)的烟草材料聚合，得到抗病毒病烟草。所述通过基因导入将eIFiso4E-T突变位点引入目标烟草的方法，是将eIFiso4E-T突变体基因(A76T或者G98D)导入目标烟草中，得到抗病毒病烟草。基因导入包括将外源基因转入后导入(即转基因)和直接导入，转基因最常用的方法为农杆菌转化法；直接导入的方法包括显微注射、花粉管通道法、电导、基因枪等常规生物学方法转化烟草本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种烟草eIFiso4E-T突变体，其特征在于，所述烟草eIFiso4E-T突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO:2或者SEQ ID NO:3所示，与SEQ ID NO:1所示的野生型烟草eIFiso4E-T的氨基酸序列相比，所述烟草eIFiso4E-T突变体的氨基酸序列第76位由A突变为T或者第98位由G突变为D。/n

【技术特征摘要】
1.一种烟草eIFiso4E-T突变体，其特征在于，所述烟草eIFiso4E-T突变体的氨基酸序列如SEQIDNO:2或者SEQIDNO:3所示，与SEQIDNO:1所示的野生型烟草eIFiso4E-T的氨基酸序列相比，所述烟草eIFiso4E-T突变体的氨基酸序列第76位由A突变为T或者第98位由G突变为D。


2.如权利要求1所述的烟草eIFiso4E-T突变体，其特征在于，所述野生型烟草eIFiso4E-T的核苷酸序列如SEQIDNO:4所示，所述烟草eIFiso4E-T突变体的核苷酸序列如SEQIDNO:5或者SEQIDNO:6所示。


3.权利要求1或2所述的烟草eIFiso4E-T突变体在培育抗病毒病烟草中的应用，所述病毒病为马铃薯Y病毒。


4.如权利要求3所述的烟草eIFiso4E-T突变体在培育抗病毒病烟草中的应用，其特征在于，应用方法是通过染色体片段导入或者基因导入将eIFiso4E-T突变位点引入目标烟草，得到包含eIF...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘勇，黄昌军，李文正，于海芹，袁诚，曾建敏，
申请(专利权)人：云南省烟草农业科学研究院，
类型：发明
国别省市：云南;53