一种RNA核酸生物探针及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种RNA核酸生物探针及其制备方法，属于生物探针领域。本发明专利技术，通过H

【技术实现步骤摘要】
一种RNA核酸生物探针及其制备方法本专利技术为分案申请，原申请的信息如下，名称：一种一维纳米结构氧化钼的制备方法及其应用，申请号：2019104703530，申请日：2019.05.31。
本专利技术属于生物探针领域，尤其是一种RNA核酸生物探针及其制备方法。
技术介绍
近年来很多研究课题对氧化钼的形貌进行控制挖掘纳米氧化钼性能增加氧化钼的潜在应用，MoO2是一种优良的半金属性半导体材料，虽然在应用基础的研究远不如MoO3广泛，但是在搭建功能化微电子器件方面具有更广阔的应用效果；而且由于MoO2具有巨大的表面积，使其在纳米级界面化学、和纳米吸附上具有明显优势。生物传感器的发展已有30多年的历史，现有的生物探针一般选取选择多孔硅敏感材料，作为衬底材料，由于多孔硅敏感纳米材料的粒径小，比表面积大，具有较高的比表面积促进了多孔硅中生物活性探针与被检测分子的结合，在生物敏感性能上具有很多优点。但同时由于多孔硅的非金属性半导体材料，一方面其韧性较差，在长期使用过程，少数成型不完全的衬底被容易折断，大大减小生物传感器的使用寿命，另一方面，由于其导电性性能较差，作为生物探针衬底时，需要填充金属纳米粒子，导致其灵敏度较低。
技术实现思路
专利技术目的：提供一种RNA核酸生物探针的制备方法，以解决
技术介绍
中所提出的问题。技术方案：一种RNA核酸生物探针的衬底，其具体合成步骤如下：步骤一：将合成的MoO2-MoO3一维纳米材料浸泡于0.01mol/L的异丁基三乙氧基硅溶液中2h，并用离子水洗涤、干燥；然后继续浸泡于2.5%的戊二醛水溶液中2h，并用磷酸缓冲液洗涤、干燥；步骤二：以功能化的MoO2-MoO3一维纳米材料作为衬底，用微量移液器将浓度为40umol/L的探针RNA滴加在MoO2-MoO3一维纳米材料的表面，在36.5℃的恒温条件下放置2h，然后再将MoO2-MoO3一维纳米材料浸泡于3mol/L的乙醇胺（EA）溶液中，36.5℃的恒温条件下放置2h，最后用PBS清洗未偶联的探针RNA。在进一步实施过程中，所述MoO2-MoO3一维纳米材料的制备工艺包括如下步骤：S1、将4g的高纯钼粉分4～8次缓慢加入到30～40g的H2O2和58～68g纯净水的混合液体中，常温充分搅拌3～5h，形成橘黄色的前驱体溶液；S2、向橘黄色的前驱体溶液中加入前驱体溶液质量的5～15%的无水乙醇，恒温搅拌2～3h；S3、然后将呈前驱体混合溶液加入到密封的反应釜中，放入到恒温加热箱中，在100～200℃条件下，加热处理48～96h，反应结束后得到黑色MoO2-MoO3悬浊液；S4、经过过滤，洗涤，干燥，得到的MoO2-MoO3一维纳米材料。在进一步实施过程中，所述H2O2为氧化源，其质量分数为30%～100%。在进一步实施过程中，所述步骤S1中，所述钼粉与H2O2的摩尔浓度比为1：（25~30）。在进一步实施过程中，所述步骤S1、步骤S3中反应釜外壳采用耐高温高压的密闭不锈钢制成，内层嵌有一层封闭的聚四氟乙烯材料制成保护层。在进一步实施过程中，所述步骤S1中，还包括温度测量步骤，在反应容器内设置有温度测量装置，用于测量反应体系的温度；通过分光光度剂检测橘黄色的溶液中吸光度，计算前驱体溶液浓度。在进一步实施过程中，所述S2步骤还可以为：将橘黄色溶液稀释至其质量浓度为0.05g/ml水溶液，加入透明的玻璃容器中，然后将基质板表面彻底清洗、干燥，并将其平稳的放置在稀释溶液的液面，封闭玻璃容器，最后将封闭后的玻璃容器放入烘箱中，在40～60℃条件下加热6～24h。在进一步实施过程中，所述基质板的面积为1×1cm2，以中空的单质硅为主体，且整体的平均密度为1.1g/ml；在单质硅表面镀有600～900nm的二氧化硅镀层。在进一步实施过程中，所述步骤S3中，过滤、洗涤、干燥的过程具体为：步骤一：将滤纸上的固态MoO2-MoO3一维纳米材料转移至烧杯中，将无水乙醇洗涤液从喷头以较高速度喷向凝结成块的固态MoO2-MoO3一维纳米材料上，打散成为颗粒状；步骤二：轻微搅拌10～15min，使固态MoO2-MoO3一维纳米材料和无水乙醇洗涤液形成分布均匀的非均相分散液，然后将过滤分散液，分离得到固态MoO2-MoO3一维纳米材料滤饼；步骤三：重复第一步和第二步1～2次；将无水乙醇洗涤液更换成蒸馏水，继续重复第一步和第二步2～3次；步骤四：采用自然风干，干燥固态MoO2-MoO3一维纳米材料滤饼。另一方面，上述的一维纳米结构氧化钼的应用，可以作为各类生物探针的制作衬底。在进一步实施过程中，作为于有益效果：本专利技术涉及一种RNA核酸生物探针的制备方法，通过H2O2氧化高纯钼粉制备橘黄色的MoO3前驱体溶液，向前驱体溶液中加入一定量的无水乙醇，然后在180℃条件下，加热处理48h，得到黑色MoO2-MoO3悬浊液，最后经过过滤，洗涤、干燥，得到高纯度的一维结构MoO2-MoO3纳米材料；通过引入基质板，加快前驱体溶液在基质板表面进行垂直方向上结晶生长速度和精细度。提供了具有高韧性、高灵敏度生物探针的衬底材料的制备方法。附图说明图1是实施例1～4得到的氧化钼样品的X射线衍射(XRD)数据。图2是实施例1得到的不同RNA浓度对应的反射谱红移量。图3是实施例1和实施例4～6得到的RNA核酸生物探针样品的RNA检测极限与灵敏度。具体实施方式在下文的描述中，给出了大量具体的细节以便提供对本专利技术更为彻底的理解。然而，对于本领域技术人员而言显而易见的是，本专利技术可以无需一个或多个这些细节而得以实施。在其他的例子中，为了避免与本专利技术发生混淆，对于本领域公知的一些技术特征未进行描述。为了解决现有技术存在的问题，申请人在深入研究现有生物探针撑死材料的制备工艺后，得到如下发现：1、现有的生物探针大多采用多孔硅纳米材料作为衬底；而多孔硅纳米材料在制备过程中大多采用电化学雕刻法，属于一种自上而下的工艺采用物理或化学的方法对宏观物质进行切割细化，得到纳米级物质。以此制备得到的一维纳米材料的纯度、纳米精细度和一维结构完整性一般较低，因此影响生物探针的使用效果和使用寿命。在此不作具体讨论。2、在常规的一维结构的MoO3的结晶过程，加入一定量的无水乙醇，在水热反应结晶过程中，在乙醇的还原作用下，MoO3纳米线重新溶解-重结晶转化为MoO2，在一维结构的MoO3表面形成一层粗糙的MoO2层，在长时间反应过程中一维结构的MoO3可完全转化为粗糙的MoO2。3、当基质板放置与溶液表面时，由于与稀释溶液的密度相近，且与液体表面之间的张力，能够使基质板漂浮于液面上，由于镀层与氧化钼之间的晶格匹配度较差，故只能在其表面进行结晶生长，不能向镀层内生长，首先在基质板上形成一层致密的氧化钼薄膜，在重力作用下，氧化钼颗粒逐渐沿着薄膜向下结晶，在竖直方向上形成一维结构的MoO3阵列，其中MoO3表面被乙本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种RNA核酸生物探针的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：/n步骤一：将合成的MoO

【技术特征摘要】
1.一种RNA核酸生物探针的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一：将合成的MoO2-MoO3一维纳米材料浸泡于0.01mol/L的异丁基三乙氧基硅溶液中2h，并用离子水洗涤、干燥；然后继续浸泡于2.5%的戊二醛水溶液中2h，并用磷酸缓冲液洗涤、干燥；
步骤二：以功能化的MoO2-MoO3一维纳米材料作为衬底，用微量移液器将浓度为40umol/L的探针RNA滴加在MoO2-MoO3一维纳米材料的表面，在36.5℃的恒温条件下放置2h，然后再将MoO2-MoO3一维纳米材料浸泡于3mol/L的乙醇胺（EA）溶液中，36.5℃的恒温条件下放置2h，最后用PBS清洗未偶联的探针RNA。


2.根据权利要求1所述的RNA核酸生物探针的制备方法，其特征在于，所述MoO2-MoO3一维纳米材料的制备工艺包括如下步骤：
S1、将4g的高纯钼粉分4～8次缓慢加入到30～40g的H2O2溶液和58～68g纯净水的混合液体中，常温充分搅拌3～5h，形成橘黄色的前驱体溶液；
S2、将橘黄色溶液稀释至其质量浓度为0.05g/ml水溶液，加入透明的玻璃容器中，然后将基质板表面彻底清洗、干燥，并将其平稳的放置在稀释溶液的液面，封闭玻璃容器，最后将封闭后的玻璃容器放入烘箱中，在40～60℃条件下加热6～24h；
S3、然后将呈前驱体混合溶液加入到密封的反应釜中，放入到恒温加热箱中，在100～200℃条件下，加热处理48～96h，反应结束后得到黑色MoO2-MoO3悬浊液；
S4、经过过滤，洗涤，干燥，得到的MoO2-MoO3一维纳米材料。


3.根据权利要求2所述的RNA核酸生物探针的制备方法，其特征在于，所述H2O2溶液为氧化源，其质量分数为30%～100%。


4.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋连福，董文英，
申请(专利权)人：南京倍格电子科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32