一种基因表达组件及其构建的克隆载体和应用制造技术

本发明专利技术提供了一种基因表达组件及其构建的克隆载体和应用，所述基因表达组件编码β‑半乳糖苷酶α肽和ω肽；所述基因表达组件包括组成型启动子，和所述组成型启动子启动表达的LacZα基因和LacZω基因。本发明专利技术采用组成型启动子调控LacZα基因和LacZω基因的表达，构建的pWizard质粒不需要IPTG诱导便可以在宿主细胞中产生具有β‑半乳糖苷酶活性的物质，扩大了宿主细胞的适用范围，所述pWizard质粒属于高拷贝质粒，因此，LacZα基因和LacZω基因在宿主菌中的拷贝数高，显著提高了宿主细胞对具有β‑半乳糖苷酶活性的酶的表达量，增强了显色效果和显色速度，缩短了显色时间。

【技术实现步骤摘要】
一种基因表达组件及其构建的克隆载体和应用
本专利技术属于分子生物学和基因工程
，涉及一种基因表达组件及其构建的克隆载体和应用，尤其涉及一种编码β-半乳糖苷酶α肽和ω肽的基因表达组件、构建的克隆载体及其构建方法和应用。
技术介绍
PCR是分子生物学和基因工程领域的重要技术，实验人员经常需要将PCR产物克隆到载体中。目前常用的克隆载体主要基于蓝白斑筛选原理，蓝白斑筛选方法为挑取阳性克隆带来了极大的方便。能够用于蓝白斑筛选的载体含有lacZ’基因，该基因能够编码α肽链，在lacZ’基因中含有一个用于克隆外源DNA的多克隆位点(MCS)。现有的具有蓝白斑筛选功能的载体仅适用于β-半乳糖苷酶缺陷型基因工程菌，这种工程菌的染色体中编码β-半乳糖苷酶的基因发生突变，该突变基因的编码产物(ω肽)与野生型β-半乳糖苷酶相比缺少N段146个氨基酸，因此不具有生物学活性。尽管该β-半乳糖苷酶缺陷型菌株无法单独编码有活性的β-半乳糖苷酶，但是当菌体中含有带lacZ’基因的质粒后，质粒lacZ’基因编码的α肽和菌株表达的ω肽发生互补，得到具有β-半乳糖苷酶活性的互本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基因表达组件，其特征在于，所述基因表达组件编码β-半乳糖苷酶α肽和ω肽；/n所述基因表达组件包括组成型启动子，和所述组成型启动子启动表达的LacZα基因和LacZω基因。/n

【技术特征摘要】
1.一种基因表达组件，其特征在于，所述基因表达组件编码β-半乳糖苷酶α肽和ω肽；
所述基因表达组件包括组成型启动子，和所述组成型启动子启动表达的LacZα基因和LacZω基因。


2.根据权利要求1所述的基因表达组件，其特征在于，所述LacZα基因中含有多克隆位点；
所述LacZα基因和LacZω基因之间具有核糖体结合位点；
优选地，所述组成型启动子包括抗性基因启动子，优选为bla启动子；
优选地，所述LacZα基因包括SEQIDNO:1所示的核酸序列；
优选地，所述LacZω基因包括SEQIDNO:2所示的核酸序列；
优选地，所述基因表达组件包括SEQIDNO:3所示的核酸序列。


3.一种克隆载体，其特征在于，所述克隆载体包括权利要求1或2所述的基因表达元件；
优选地，所述克隆载体还包括大肠杆菌复制子，优选为pBR322复制子；
优选地，所述pBR322复制子包括SEQIDNO:4所示的核酸序列；
优选地，所述克隆载体还包括抗生素抗性基因；
优选地，所述抗生素抗性基因包括卡那霉素抗性基因；
优选地，所述卡那霉素抗性基因包括SEQIDNO:5所示的核酸序列；
优选地，所述克隆载体包括SEQIDNO:6所示的核酸序列。


4.一种权利要求3所述的克隆载体的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括：
将基因表达组件、pBR322复制子和卡那霉素抗性基因的核酸分子混合，加入核酸外切酶、DNA聚合酶和DNA连接酶，40～60℃反应0.5～1h，得到闭合的环状双链DNA；
将所述闭合的环状双链DNA转化感受态细胞...

【专利技术属性】
技术研发人员：薛高旭，夏立军，陈业，方其，张艳，吴昕，廖国娟，
申请(专利权)人：苏州金唯智生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32