【技术实现步骤摘要】
一种用于3D打印或原位注射的因子缓释中性凝胶系统及其制备方法
本专利技术涉及生物材料
，具体涉及一种用于3D打印和原位注射的因子缓释中性凝胶系统及其制备方法。
技术介绍
胶原是一种生物相容性良好的生物材料，广泛应用于组织工程和再生医学领域，现已经有一系列产品如胶原修复膜、胶原骨支架等在临床上取得了应用许可。在实验研究中，鼠尾胶原得到了广泛的应用，未变性的胶原溶解于酸性溶液中，中和后在一定盐浓度下在37℃可形成凝胶。但传统的胶原凝胶存在以下不足：1，浓度低，广泛应用的鼠尾胶原的浓度一般为3mg/mL，当提高其浓度后，则难以中和均匀。此类胶原黏度低，不适用3D打印和原位注射。2，凝胶快，3mg/mL鼠尾胶原在中性条件下，即使在4℃下，会在20分钟内完全凝胶，当浓度提高，凝胶速度会加快，不仅每次使用需要现配，且限制了操作时间。目前，将生长因子固定于冻干态胶原的方法已经趋于成熟，如京尼平、碳二亚胺发等。但是，在含细胞的水凝胶中固定生长因子的情况比较复杂，首先，上述的固定方法会破坏活性细胞，故不可取。其次，胶原凝胶方式为...
【技术保护点】
1.一种用于3D打印或原位注射的因子缓释中性凝胶系统的制备方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：/n(1)胶原溶液的制备：以提取的牛跟腱胶原为原材料，将牛跟腱胶原加入0.1-0.5mol/L的乙酸溶液中，制备3-10mg/mL的牛跟腱胶原溶液；/n(2)胶原纤维制备：/n在牛跟腱胶原溶液中加入0.1mol/L的PBS溶液和1mol/L氢氧化钠溶液，以酚红为指示剂，将溶液中和至红色，得中性溶液；然后将所得溶液倾倒至PBS溶液中，于20-37℃水浴条件下磁力搅拌1-4小时，所得物料经离心分离后，得到胶原纤维；/n(3)肝素活化处理：/n将肝素溶解于吗啉乙磺酸溶液中，得到肝素含量...
【技术特征摘要】
1.一种用于3D打印或原位注射的因子缓释中性凝胶系统的制备方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：
(1)胶原溶液的制备：以提取的牛跟腱胶原为原材料，将牛跟腱胶原加入0.1-0.5mol/L的乙酸溶液中，制备3-10mg/mL的牛跟腱胶原溶液；
(2)胶原纤维制备：
在牛跟腱胶原溶液中加入0.1mol/L的PBS溶液和1mol/L氢氧化钠溶液，以酚红为指示剂，将溶液中和至红色，得中性溶液；然后将所得溶液倾倒至PBS溶液中，于20-37℃水浴条件下磁力搅拌1-4小时，所得物料经离心分离后，得到胶原纤维；
(3)肝素活化处理：
将肝素溶解于吗啉乙磺酸溶液中，得到肝素含量为1-10mg/mL的肝素的吗啉乙磺酸溶液，再加入NHS和EDC；所得混合物料在4℃条件下反应12h后，反应产物经丙酮沉淀，冻干，即得到活化肝素；
(4)胶原纤维与肝素的共价接枝：
将步骤(2)制备的胶原纤维分散于0.01mol/L的PBS或50mmol/L碳酸氢钠溶液中，再加入活化肝素，活化肝素的加入量为胶原纤维重量的0.01-0.3倍，所得混合物料中胶原纤维含量为1-5wt.％；将所得混合物料在4℃条件下反应12小时后，经0.01mol/L的PBS透析和冻干后，此时肝素共价接枝于胶原纤维表面，得到表面修饰肝素的胶原纤维；
(5)预凝胶胶原的制备：取步骤(1)制备的牛跟腱胶原溶液，使用中和剂将其调至红色；中和后的溶液在25-37℃水浴条件下处理5-50分钟，然后在4-10℃离心2-5小时，离心后得到的沉淀使用摇晃加搅拌的方式匀质后，即得到具有一定黏度、置于37℃会再次凝胶的可打印、可注射的预凝胶胶原；
(6)将步骤(5)制备的预凝胶胶原、步骤(4)制备的表面修饰肝素的胶原纤维和生长因子混合，经4℃处理12小时后，再加入一定量的细胞，所得混合物料即为所述用于3D打印和或原位注射的因子缓释中性凝胶系统。
2.根据权利要求1所述的用于3D打印和原位注射的因子缓释中性凝胶系统的制备方法，其特征在于：步骤(1)中，所述牛跟腱胶原的提取过程如下：
将牛跟腱溶解于含有胃蛋白酶的乙酸溶液中，搅拌72h后，依次进行盐析和乙酸透析过程，透析袋截留分子量为3000-10000...
【专利技术属性】
技术研发人员：郭凯，郑雄飞，王赫然，朱慧轩，李松，
申请(专利权)人：中国科学院沈阳自动化研究所，
类型：发明
国别省市：辽宁;21
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