一种检测蛋白质和RNA相互作用的方法技术

本发明专利技术公开了一种检测蛋白质和RNA相互作用的方法，包括如下步骤：(1)提供亲和素标记的RNA，进行生物素标记；(2)取步骤(1)所得RNA，加入结构缓冲液，使得RNA形成二级结构，然后加热、冰浴、室温静置；(3)提供纯化的蛋白；(4)将步骤(2)所得RNA和步骤(3)纯化的蛋白混合，利用BLI生物干涉膜方法，对步骤(2)所得RNA和步骤(3)纯化的蛋白进行动力学检测，即得。本发明专利技术首次利用BLI生物干涉膜技术检测蛋白质与lncRNA相互作用，与现有方法比较，本发明专利技术可同时检测3个以上蛋白与lncRNAs相互作用，可在30分钟内完成检测，具有检测快速，可精确定量相互作用力的强弱，能实现高通量检测等优点。

A method for detecting the interaction between protein and RNA

【技术实现步骤摘要】
一种检测蛋白质和RNA相互作用的方法
本专利技术涉及生物大分子
，尤其是一种检测蛋白质和RNA相互作用的方法。
技术介绍
RNAPull-down是现在检测RNA与蛋白质相互作用最常用的方法之一；RNAPull-down是定性的检测，无法定量检测RNA与蛋白质结合强弱。BLI生物膜干涉技术常用与检测蛋白与蛋白的相互作用，蛋白与小分子的相互作用。现有技术中并没有能准确检测蛋白质和RNA相互作用力强弱的方法。
技术实现思路
基于上述问题，本专利技术的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种能准确检测蛋白质和RNA相互作用力的强弱的方法。为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案为：一种检测蛋白质和RNA相互作用的方法，包括如下步骤：(1)提供亲和素标记的RNA，进行生物素标记；(2)取步骤(1)所得RNA，加入结构缓冲液，使得RNA形成二级结构，然后加热、冰浴、室温静置；(3)提供纯化的蛋白；(4)将步骤(2)所得RNA和步骤(3)纯化的蛋白混合，利用BLI生物干涉膜方法，对步骤(2)所得RNA和步骤(3)纯化的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测蛋白质和RNA相互作用的方法，其特征在于，包括如下步骤：/n(1)提供亲和素标记的RNA，进行生物素标记；/n(2)取步骤(1)所得RNA，加入结构缓冲液，使得RNA形成二级结构，然后加热、冰浴、室温静置；/n(3)提供纯化的蛋白；/n(4)将步骤(2)所得RNA和步骤(3)纯化的蛋白混合，利用BLI生物干涉膜方法，对步骤(2)所得RNA和步骤(3)纯化的蛋白进行动力学检测，即得。/n

【技术特征摘要】
1.一种检测蛋白质和RNA相互作用的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)提供亲和素标记的RNA，进行生物素标记；
(2)取步骤(1)所得RNA，加入结构缓冲液，使得RNA形成二级结构，然后加热、冰浴、室温静置；
(3)提供纯化的蛋白；
(4)将步骤(2)所得RNA和步骤(3)纯化的蛋白混合，利用BLI生物干涉膜方法，对步骤(2)所得RNA和步骤(3)纯化的蛋白进行动力学检测，即得。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述RNA为lncRNA。


3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中结构缓冲液中含有：10mMTris，0.1MKCl和10mMMgCl2；且结构缓冲液的pH值为7.0。


4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(4)中BLI生物干涉膜方法包括以下5个步骤：
(4.1)基线均一化，时间为1min；
(4.2)固化，通过SR固化传感器捕捉生物素标记的lncRNA,lncRNA的浓度范围为100-200nM，固化时间为5-10min；
(4.3)基线均一化，时间为3min；
(4.4)结合，在样品板检测孔加入不同浓度梯度纯化蛋白，使之与固化的lncRNAs相互结合，结合时间为5-10min；
(4.5)解离，时间为5-10min。


5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中蛋白纯化的步骤包括：
(3.1)将重组蛋白表达菌株按1:100比例稀释后，转接至1L的LB培养瓶中，37℃，220rpm培养2.5-3h，加入诱导剂诱导...

【专利技术属性】
技术研发人员：李建明，倪雯，姚溯，刘园园，
申请(专利权)人：中山大学孙逸仙纪念医院，
类型：发明
国别省市：广东;44