【技术实现步骤摘要】
一种检测霉菌毒素的免疫层析试纸条的制备
本专利技术涉及一种检测
的方法，特别是一种检测玉米赤霉烯酮的胶体金试纸条的制备及使用方法。
技术介绍
玉米赤霉烯酮又称F-2毒素，是一种具有雌激素作用的真菌毒素，其产毒菌主要是镰刀菌属(Fusarium)的菌侏，如禾谷镰刀菌(F.graminearum)和三线镰刀菌(F.tricinctum)，主要污染玉米、小麦、大米、大麦、小米和燕麦等谷物，在世界各地各种粮谷与饲料中均有存在。玉米赤霉烯酮耐热性较强，110℃下处理1h才被完全破坏，具有较强的生殖毒性和致畸作用，可引起动物发生雌激素亢进症，引起妊娠期动物(包括人)流产、死胎和畸胎，对家禽、猪、牛和羊的影响较大，给畜牧业带来很大经济损失。目前，检测玉米赤霉烯酮的方法很多，根据真菌毒素含量常用的检测方法，可分为3类：①生物学检测法；②理化检测方法(薄层层析法TLC、高效液相色谱法HPLC、气相色谱法GC；③免疫化学检测法(ELISA、CLEIA等方法)(吴文达，2009)。其中，高效液相色谱法HPLC、气象色谱法GC是定量的...
【技术保护点】
1.一种检测玉米赤霉烯酮（ZEN）的胶体金免疫层析试纸条的制备及使用方法，其特征在于，将玉米赤霉烯酮半抗原通过戊二醛法分别与BSA和OVA偶联，得到玉米赤霉烯酮的偶联物ZEN-BSA和ZEN-OVA；将ZEN-BSA作为免疫原，采用常规方法制备高灵敏度的抗玉米赤霉烯酮的单克隆抗体；用柠檬酸三钠还原法制备35 nm的胶体金溶液，用该胶体金标记玉米赤霉烯酮的单克隆抗体，制备成玉米赤霉烯酮单克隆抗体胶体金标记物；将玉米赤霉烯酮单克隆抗体胶体金标记物用划膜仪喷在玻璃纤维素膜金标垫上，将ZEN-OVA偶联物、兔抗鼠的单克隆抗体分别喷涂在包被膜，即硝酸纤维素膜上，自然晾干或37℃烘干，...
【技术特征摘要】
1.一种检测玉米赤霉烯酮（ZEN）的胶体金免疫层析试纸条的制备及使用方法，其特征在于，将玉米赤霉烯酮半抗原通过戊二醛法分别与BSA和OVA偶联，得到玉米赤霉烯酮的偶联物ZEN-BSA和ZEN-OVA；将ZEN-BSA作为免疫原，采用常规方法制备高灵敏度的抗玉米赤霉烯酮的单克隆抗体；用柠檬酸三钠还原法制备35nm的胶体金溶液，用该胶体金标记玉米赤霉烯酮的单克隆抗体，制备成玉米赤霉烯酮单克隆抗体胶体金标记物；将玉米赤霉烯酮单克隆抗体胶体金标记物用划膜仪喷在玻璃纤维素膜金标垫上，将ZEN-OVA偶联物、兔抗鼠的单克隆抗体分别喷涂在包被膜，即硝酸纤维素膜上，自然晾干或37℃烘干，组装成试纸条；将待测样品用甲醇提取，离心，取上清，将上清滴入试纸条的样本槽中，观察T线和C线的显色，得到检测结果。
2.根据权利要求1所述的一种检测玉米赤霉烯酮（ZEN）的胶体金免疫层析试纸条的制备及使用方法，其特征是，所述胶体金溶液制备：取1L三角烧瓶1个，加入超纯水495mL，而后加入1%氯金酸(HAuCl4·3H2O)5mL，配制成500mL0.01%氯金酸水溶液，加热煮沸后在持续搅拌的情况下加入1%柠檬酸三钠(Na3C6H5O7·2H2O)溶液5-7mL，继续加热搅拌，当溶液的颜色完全变为透明的紫红色时，维持5min后停止加热，补水至原体积，冷却至室温，2-8℃保存备用。
3.根据权利要求1所述的一种检测玉米赤霉烯酮（ZEN）的胶体金免疫层析试纸条的制备及使用方法，其特征是，所述玉米赤霉烯酮单克隆抗体胶体金标记物的制备具体为：将要标记的玉米赤霉烯酮抗体在1000r/min,4℃条件下，离心20min，取上清，用0.01mol/LPBS稀释成1mg/mL；或者用0.01mol/LPBS稀释成1mg/ml，过0.22µm滤膜；取权利要求2中的胶体金溶液40mL，用0.25mol/LK2CO3调节胶体金溶液pH至8.5，电磁搅拌器250r/min搅拌，逐滴加入4mL含0.3mg抗体蛋白...
【专利技术属性】
技术研发人员：洪霞，袁超，秦悦，
申请(专利权)人：丹阳亿太生物科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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