一种纳米开关分子及其控制激活的实体瘤靶向性CAR-T细胞制造技术

本发明专利技术公开了一种纳米开关分子及其控制激活的实体瘤靶向性CAR‑T细胞，实体瘤靶向性CAR‑T细胞通过以下步骤制备：1）制备纳米开关分子：采用双乳化‑挥发法使开关分子负载于肿瘤靶向性纳米粒子上；2）构建组装型CAR‑T质粒：用基因重组法将T2A元件、FRB、FKBP序列及靶向实体瘤的ScFv段导入CAR‑T质粒中；3）制备组装型CAR‑T细胞：将组装型CAR‑T质粒转染T淋巴细胞；4）制备实体瘤靶向性CAR‑T细胞：组装型CAR‑T细胞胞吞纳米开关分子。本发明专利技术通过使用瘤靶向性纳米粒子负载开关分子，可以使开关分子特异性聚集于肿瘤组织，通过开关分子连接CAR‑T的FKBP和FRAP，使CAR‑T的两部分结合而具有攻击活性，可从根本上解决CAR‑T细胞脱靶效应的问题。

【技术实现步骤摘要】
一种纳米开关分子及其控制激活的实体瘤靶向性CAR-T细胞
本专利技术属于肿瘤免疫学
，具体涉及一种纳米开关分子及其控制激活的实体瘤靶向性CAR-T细胞。
技术介绍
CAR-T疗法(ChimericAntigenReceptorT-CellImmunotherapy，嵌合抗原受体T细胞免疫疗法)在白血病治疗中取得了重大突破，为特定血液肿瘤患者带来了新的希望。但是CAR-T疗法在应用于实体瘤时却面临了阻碍，其中最关键的原因在于目前实体瘤CAR-T的靶点在正常组织中都有少量表达，因此CAR-T可以非特异性攻击正常组织造成严重的脱靶效应，已有相关死亡案例。CAR-T细胞的制备方法是将CAR基因质粒转染入T淋巴细胞使之成为CAR-T细胞，转染方法包括病毒转染和电穿孔转染法。病毒转染法是用慢病毒或逆转录病毒感染细胞，使之表达相应基因；电穿孔法是用转座子或者转座酶系统对CAR基因进行转染，转座子是一段DNA序列能够通过转座酶切割和插入，CAR基因序列可以插入到质粒的转座子上，质粒在T细胞活化之前电转到T细胞中，之后转座酶切割含有CAR的转座子，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种纳米开关分子的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：/n步骤一）将疏水性的开关分子与肿瘤靶向性纳米载体溶于二氯甲烷溶液中，构成有机相，混合液A；/n步骤二）将混合液A加入含有 3% 聚乙烯醇的第一外水相中并采用超声乳化技术充分混合，形成混合液B，其中mPEG-PEP-PCL两嵌段共聚物在水相中自组装为高分子纳米粒子且亲水端向外，疏水端向内；/n步骤三）将混合液B加入含1% 聚乙烯醇的第二外水相中并采用超声乳化技术充分混合，形成混合液C；/n步骤四）将混合液C通过常温磁力搅拌挥发，去除有机溶剂，得到负载开关分子的肿瘤靶向性纳米粒子。/n

【技术特征摘要】
1.一种纳米开关分子的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
步骤一）将疏水性的开关分子与肿瘤靶向性纳米载体溶于二氯甲烷溶液中，构成有机相，混合液A；
步骤二）将混合液A加入含有3%聚乙烯醇的第一外水相中并采用超声乳化技术充分混合，形成混合液B，其中mPEG-PEP-PCL两嵌段共聚物在水相中自组装为高分子纳米粒子且亲水端向外，疏水端向内；
步骤三）将混合液B加入含1%聚乙烯醇的第二外水相中并采用超声乳化技术充分混合，形成混合液C；
步骤四）将混合液C通过常温磁力搅拌挥发，去除有机溶剂，得到负载开关分子的肿瘤靶向性纳米粒子。


2.根据权利要求1所述的纳米开关分子的制备方法，其特征在于：所述的开关分子为赤霉素或雷帕霉素或雷帕霉素衍生物。


3.根据权利要求2所述的纳米开关分子的制备方法，其特征在于：所述的肿瘤靶向性纳米载体为明胶酶靶向纳米粒子或磁靶向纳米粒子或热靶向纳米粒子或环境响应靶向纳米粒子。


4.一种纳米开关分子，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：李茹恬，刘宝瑞，
申请(专利权)人：南京鼓楼医院，
类型：发明
国别省市：江苏;32