针对病原体抗原的抗体矩阵检测法（MEGA法）及多联检测卡制造技术

本发明专利技术公开了针对病原体抗原的抗体矩阵检测法(MEGA法)及多联检测卡。本发明专利技术提供了一种检测或辅助检测被检样品针对病原体抗原的抗体多联检测卡，其由n个不同探测抗体的检测试纸条并联组成；每个所述检测试纸条延所述被检样品流动方向包括样品垫、喷有探测抗体的结合垫、含有m个检测线和质控线的NC膜和吸水纸；m大于等于1。本发明专利技术的MEGA法及其多联检测卡可同时检测受试者针对病原体的多种抗原产生的不同种类和亚类的抗体，所得数据能够更准确的反映受感染和保护的情况。MEGA法及其多联检测卡既可以用于血清检测，也可以用于其他体液特别是粘膜液体的无创检测。

【技术实现步骤摘要】
针对病原体抗原的抗体矩阵检测法(MEGA法)及多联检测卡
本专利技术属于生物
，涉及一种针对病原体抗原的抗体矩阵检测法(MEGA法)及多联检测卡。
技术介绍
在传染病爆发的过程中，有效的快速检测对于患者的隔离，疾病的管控有极其重要的意义。在快速检测的各种手段中，基于免疫学原理的侧向层析技术是一种常用的方法。在各种疾病中，呼吸道感染疾病是尤为重大的公共卫生问题。呼吸道感染主要由病毒，细菌，支原体，衣原体引起，侵染鼻腔，咽，喉等上呼吸道器官，以及气管，支气管，肺等下呼吸道器官。主要的病原体包括鼻病毒，冠状病毒,流感病毒，腺病毒，肺炎链球菌，流感嗜血杆菌，肺炎衣原菌，肺炎分枝杆菌等。由于各种病原体在初期引起的症状相似，对于致病因素的区分十分必要，尤其在大流行传染病爆发的时候,迅速鉴别出致病病原体对于疾病和患者的相应管理有重要的意义。准确的快速检测在紧急情况发生时有极大的需求，而且世界各国都普遍存在短缺的现象，这一点在COVID-19流行的发生发展的过程中体现的尤为明显。机体感染病原体后获得性免疫系统会产生相应的特异性抗体，其中IgM抗体在感染后最先产生，是初次感染的标志性抗体。随着感染的延长或者再次感染，抗体会发生类别转换，血液中IgG水平升高，粘膜免疫相关的IgA水平也会升高。检测血液和粘膜中的特异性IgG和IgA水平对于患者是否受到感染以及感染后是否产生了保护性抗体是非常重要的指示。另一个被相对忽视的抗体类别是IgE,它对病原体的清除和过敏反应的启动都具有功效。免疫侧向层析试纸是现有最方便的快速检测技术之一。试纸由样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜(NC膜)、吸水纸、塑料基底板等几部分组成(见图1)，结合垫上含可以和靶标物质结合的探测抗原或探测抗体，NC膜上含能与靶标物质结合的抗体或抗原。显色反应有若干种，主要包括胶体金，荧光和量子点，其中，胶体金是一种人眼可见的显色方式，而荧光和量子点需要一定的光学装置。为了区分鉴定何种病原体侵染宿主，可以将层析试纸分为两种。一种是直接法，即检测受试者是否携带该病原体。另一种是间接法，即检测受试者是否产生了针对该病原体的抗体，由此判断其感染史。直接法和间接法检测各有优势与劣势，直接法给出病原体存在的直接证明，但是该方法依赖于所取的病原体的浓度，如果取样部位不对，该处不存在病原体，或者虽然所取样品中有病原体，但是其浓度低于检测灵敏度，就会给出假阴性结果。间接法检测的是针对病原体的特异性抗体。受病原体感染后，绝大多数具有正常适应性免疫系统的人都会产生针对病原体抗原的特异性抗体，检测特异性抗体来反映感染情况以及受试者的免疫系统状态，和直接法相比检测敏感性高。间接法的不足之处是病原体感染后，要经过几天时间才产生特异性抗体，和直接法相比会有一定的滞后。由于抗体在病原体清除后仍然能够在一段时间内维持较高水平，间接法得到的阳性结果只能表明被检人被该病原体感染过，但是并不能表明检测时该病原体是否还存在于被检人体内。另外抗原也有可能被非特异性抗体吸附，造成假阳性情况，因此需在建立方法的时候排除产生假阳性的条件。人的抗体根据重链Fc段的区别一共可以分为5种类别即IgM,IgD,IgA,IgE，IgG。IgA和IgG还有亚类，即IgA1，IgA2，IgG1,IgG2,IgG3,IgG4。检测血液和粘膜中的多种特异性抗体的水平可以总观受试者是否受到感染以及感染后是否产生了保护性抗体，对患者的病程进展可以提供重要信息。目前市场上已经有一些使用间接法的快速检测层析试纸，但是这些试纸都是血清学检测，即通过取血来检测被检者是否有针对病原体某抗原的抗体，主要检测IgM与总IgG两种情形，生成单指标或双指标的数据。
技术实现思路
本专利技术一个目的是提供一种检测或辅助检测被检样品中是否含有针对病原体抗原的抗体的多联检测卡。本专利技术提供的多联检测卡，其由n个不同探测抗体的检测试纸条并联组成；每个所述检测试纸条延所述被检样品流动方向包括样品垫、喷有探测抗体的结合垫、含有m个检测线和质控线的NC膜(硝酸纤维素膜)和吸水纸；m大于等于1；每个所述检测试纸条的结合垫上的探测抗体为n种抗体中任一种，且不相同；所述n种抗体为如下任一种：能与所述病原体抗原反应的n种人免疫球蛋白或其亚类对应结合的抗体；n大于等于1；每个所述检测试纸条中的m个检测线均由m个病原体抗原蛋白溶液依次包被形成；每个所述检测试纸条中m个病原体抗原的包被顺序相同；每个所述检测试纸条中的质控线由结合每个试纸条中探测抗体的抗体溶液包被形成。所述结合每个试纸条中探测抗体的抗体溶液相同或不同。上述检测卡中，所述探测抗体为能与IgG、IgM、IgD、IgA、IgE或其亚类结合的抗体。上述检测卡中，每个试纸条中所述喷有探测抗体的结合垫在所述结合垫上面喷有显色物标记的探测抗体溶液形成；或，所述显色物标记探测抗体中的显色物为胶体金、荧光基团或量子点；所述结合垫和样品垫可以为玻璃纤维或聚酯膜。所述显色物标记的探测抗体溶液为用所述显色物标记所述探测抗体的溶液；或，每个试纸条中所述含有m个检测线和质控线的NC膜为将所述m种病原体抗原蛋白溶液依次包被在NC膜上作为m条检测线，且将所述结合该试纸条中探测抗体的抗体溶液包被在所述NC膜上作为质控线。上述检测卡中，所述显色物标记的探测抗体溶液的浓度为0.4％(质量百分含量)；所述m种病原体抗原蛋白溶液的包被浓度均为0.5-2mg/ml；所述结合每个试纸条中探测抗体的抗体溶液的包被浓度均为0.5-2mg/ml；上述检测卡中，所述病原体抗原在本专利技术的实施例中为新冠病毒COVID-19的N蛋白；所述N蛋白为如下(1)或(2)或(3)：(1)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(2)由序列表中序列1所示的氨基酸序列的末端添加标签序列组成的蛋白质；(3)将序列表中序列1所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由(1)或(2)衍生的蛋白质。或，所述探测抗体在本专利技术的实施例中具体为如下3种抗体：抗IgG抗体、抗IgA抗体和抗IgM抗体；在本专利技术的实施例中，均为单克隆抗体。本专利技术另一个目的是提供一种试剂盒。本专利技术提供的试剂盒，为如下1)或2)：1)所述试剂盒包括上述检测卡和样品稀释液；2)所述试剂盒包括上述检测卡、样品稀释液和记载如下方法的可读载体；所述样品稀释液为含1MNaCl的磷酸盐缓冲液。上述的检测卡在如下1)-6)任一种中应用也是本专利技术保护的范围：1)检测或辅助检测针对病原体的抗体；2)制备检测或辅助检测针对病原体的抗体产品；3)检测或辅助检测被检样品中是否含有针对病原体的抗体；4)制备检测或辅助检测被检样品中是否含有针对病原体的抗体产品；5)检测或辅助检测被检者感染病原体的风险度；6)制备检测或辅助检测被检者感染病本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测或辅助检测被检样品中是否含有针对病原体抗原的抗体的多联检测卡，其由n个不同探测抗体的检测试纸条并联组成；/n每个所述检测试纸条延所述被检样品流动方向包括样品垫、喷有探测抗体的结合垫、含有m个检测线和质控线的硝酸纤维素膜和吸水纸；m大于等于1；/n每个所述检测试纸条的结合垫上的探测抗体为n种抗体中任一种，且不相同；所述n种抗体为如下任一种：能与所述病原体抗原反应的n种人免疫球蛋白或其亚类对应结合的抗体；n大于等于1；/n每个所述检测试纸条中的m个检测线均由m个病原体抗原蛋白溶液依次包被形成；每个所述检测试纸条中m个病原体抗原的包被顺序相同；/n每个所述检测试纸条中的质控线由结合每个试纸条中探测抗体的抗体溶液包被形成。/n

【技术特征摘要】
1.一种检测或辅助检测被检样品中是否含有针对病原体抗原的抗体的多联检测卡，其由n个不同探测抗体的检测试纸条并联组成；
每个所述检测试纸条延所述被检样品流动方向包括样品垫、喷有探测抗体的结合垫、含有m个检测线和质控线的硝酸纤维素膜和吸水纸；m大于等于1；
每个所述检测试纸条的结合垫上的探测抗体为n种抗体中任一种，且不相同；所述n种抗体为如下任一种：能与所述病原体抗原反应的n种人免疫球蛋白或其亚类对应结合的抗体；n大于等于1；
每个所述检测试纸条中的m个检测线均由m个病原体抗原蛋白溶液依次包被形成；每个所述检测试纸条中m个病原体抗原的包被顺序相同；
每个所述检测试纸条中的质控线由结合每个试纸条中探测抗体的抗体溶液包被形成。


2.根据权利要求1所述的多联检测卡，其特征在于：
所述探测抗体为能与IgG、IgM、IgD、IgA、IgE或其亚类结合的抗体。


3.根据权利要求1或2所述的多联检测卡，其特征在于：
每个试纸条中所述喷有探测抗体的结合垫在所述结合垫上面喷有显色物标记的探测抗体溶液形成；
或，所述显色物标记探测抗体中的显色物为胶体金、荧光基团或量子点；
或，每个试纸条中所述含有m个检测线和质控线的硝酸纤维素膜为将所述m种病原体抗原蛋白溶液依次包被在硝酸纤维素膜上作为m条检测线，且将所述结合该试纸条中探测抗体的抗体溶液包被在所述硝酸纤维素膜上作为质控线。


4.根据权利要求3所述的多联检测卡，其特征在于：
所述显色物标记的探测抗体溶液的浓度为0.4％；
所述m种病原体抗原蛋白溶液的包被浓度均为0.5-2mg/ml；
所述结合每个试纸条中探测抗体的抗体溶液的包被浓度均为0.5-2mg/ml；


5.根据权利要求1-4中任一所述的多联检测卡，其特征在于：
所述病原体抗原为新冠病毒COVID-19的N蛋白；
或，所述探测抗体为如下3种抗体：抗IgG抗体、抗IgA抗体和抗IgM抗体。


6.一种试剂盒，为如下1)或2)：
1)所述试剂盒包括权利要求1-5任一所述的检测卡和样品稀释液；
2)所述试剂盒包括权利要求1-5任一所述的检测卡、样品稀释液和记载如下权利要求9或10所述方法的可读载体；
所述样品稀释液为含1MNaCl的磷酸盐缓冲液。


7.权利要求1-4任一所述的检测卡在如下1)-6)任一种中应用：
1)检测或辅助检测针对病原体的抗体；
2)制备检测或辅助检测针对病原体的抗体产品；
3)检测或辅助检测被检样品中是否含有针对病原体的抗体；
4)制备检测或辅助检测被检样品中是否含有针对病原体的抗体产品；
5)检测或辅助检测被检者感染病原体的风险度；
6)制备检测或辅助检测被检者感染病原体的风险度产品；
或，权利要求5所述的检测卡在如下7)-12)任一种中应用：
7)检测或辅助检测针对新冠病毒COVID-19的抗体；
8)制备检测或辅助检...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈韬，
申请(专利权)人：陈韬，
类型：发明
国别省市：北京;11