一种重组HIV缺陷病毒及其制备方法技术

本发明专利技术提供一种重组HIV缺陷病毒及其制备方法。本发明专利技术将感染者携带的HIV相同亚型病毒重组为缺陷病毒，删除env区大部分，插入带有三组四段+1段双链miRNA的内含子，除env外它与HIV基因序列完全一样，它可以自我复制，并借用HIV产生的env蛋白成为有感染力的缺陷病毒。它逆转录到细胞基因组成为原病毒后转录生成子病毒时，生成env的前mRNA，剪切除去内含子，生成大量双链miRNA，产生RNAi，杀死HIV子病毒和env的mRNA及侵入的新病毒，从而达到治疗艾滋病的效果。

A recombinant HIV deficient virus and its preparation method

【技术实现步骤摘要】
一种重组HIV缺陷病毒及其制备方法
本专利技术涉及临床医学领域，尤其涉及一种重组HIV缺陷病毒及其制备方法。
技术介绍
自1981年美国CDC首次报道HIV病毒到现在，三十八年来，艾滋病以惊人的速度传播，成为全球严重的公共卫生问题。世界卫生组织数据显示，目前全球约有3670万艾滋病毒感染者，每年新增感染者约200万人，死亡病例累计超过3500万人。据中国疾病预防控制中心、联合国艾滋病规划署、世界卫生组织联合评估，截至2018年底，中国估计存活艾滋病感染者约125万。截至2018年9月底全国报告存活感染者85.0万，死亡26.2万例。估计新发感染者每年8万例左右。全人群感染率约为9.0/万。每年全球投入大量经费用于抗击艾滋病毒，联合国艾滋病规划署数据显示，2018年有191亿美元资金用于艾滋病治疗和预防，到2031年，这一费用将达350亿美元。截至2019年10月底，全球未见治愈艾滋病的新方法，主要科学研究如下：1、疫苗：被艾滋病研究专家们寄予厚望的疫苗，是由美国默克制药公司组织开发的一种被称为“HIV-1”的整合酶抑制剂疫苗，这本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种重组HIV缺陷病毒及其制备方法，其特征在于，包括以下步骤：以HIV病毒携带者同种亚型的病毒株为模板，使用TOPO-TA克隆制备该亚型的全基因序列感染性克隆及质粒。/n

【技术特征摘要】
1.一种重组HIV缺陷病毒及其制备方法，其特征在于，包括以下步骤：以HIV病毒携带者同种亚型的病毒株为模板，使用TOPO-TA克隆制备该亚型的全基因序列感染性克隆及质粒。


2.根据权利要求1所述的制备方法，其中，包括以下步骤：
在HIV病毒携带者同种亚型的病毒株在env区选择中间酶切位点，分析37条基因24个亚型中有20条基因16亚型在6500-7650处可以使用有限制内切酶AflIII(acatgt)酶切位点；把HIV病毒分为前后两段，分别设计引物，以该病毒为模板，使用长片段PCR扩增前后半段，TOPO-TA克隆后，酶切后再互相连接成为TOPO全基因序列感染性克隆及质粒。


3.根据权利要求1或2所述制备方法制得的全基因序列感染性克隆及质粒。


4.一种内含子感染性重组缺陷病毒质粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：删除该亚型的全基因序列感染性质粒中env区大部分碱基，插入带有miRNA的内含子生成感染性重组缺陷病毒质粒。


5.根据权利要求4所述的制备方法，其中，包括以下步骤：
miRNA的内含子是使用第1阅读框的tat蛋白的内含子起始区、分枝点和结束区作为第3阅读框的内含子插入env基因删除大部分碱基的区域；
在内含子起始区和分枝点之间插入2个限制内切酶AflIII(ACATGT)和AscI(GGCGCGCC)位点。


6.根据权利要求4或5所述制备方法制得的内含子感染性重组缺陷病毒质粒。


7.一种感染性重组缺陷病毒的...

【专利技术属性】
技术研发人员：戚其平，张晓光，戚本昊，戚坤，
申请(专利权)人：北京君禾药业有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11